Антибиотики, введение в среду для роста

Во многих отраслях промышленности, особенно в фармацевтической, приходится проводить испытания продукта на стерильность. Стандартный метод такого испытания состоит в том, что проба продукта помещается в питательную культуральную среду и проводится ее инкубация, при этом через некоторые промежутки времени проверяется, не произошло ли помутнения, что свидетельствовало бы о росте бактерий. Однако если в испытуемом продукте содержатся микробные ингибиторы, такие, как антибиотики или антисептики, то этот метод испытания на стерильность применять нельзя, поскольку ингибиторы препятствуют росту бактерий. До того как для проверки на стерильность начали применять мембранную фильтрацию, единственной возможностью, которая могла позволить испытать лекарственный аппарат, содержащий антимикробные агенты, на стерильность, было разбавление небольшой дозы лекарства в таком большом количестве культуральной среды, когда можно считать, что ингибитор не оказывает никакого действия. Однако из-за малости пробы при этом можно обнаружить присутствие микроорганизмов лишь в том случае, когда их очень много. В настоящее время для установления стерильности лекарств предпочитают использовать мембранную фильтрацию, чтобы выделить микроорганизмы из продукта, а затем определяют возможное присутствие жизнеспособных микроорганизмов на самой мембране, помещая ее в питательную среду. Методы мембранной фильтрации предписывается использовать согласно Фармакопее США 1979 г. [228], Европейской фармакопее 1978 г. [70], а также предписаниям Управления США по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (кодекс федеральных законов 21 436). Фармакопея США обязывает применять мембранную фильтрацию для испытания на стерильность не только продуктов, содержащих антибактериальные вещества, но и любых лекарственных средств, которые могут быть растворены в жидкости, не содержащей ингибиторы. Мембранная фильтрация рекомендуется также для проверки стерильности отдельных деталей шлангов различных медицинских устройств и инструментов, которые использук)тся для введения стерильных лекарств. Инструмент тщательно промывают стерильным бульоном или водой, а затем промывочную [c.200]

ИХ стерильное культивирование после удаления агробактерий с помощью обработки антибиотиками остаются простейшим методом введения генов во многие двудольные растения. Это обусловлено тем, что на поверхности зараженного растения образуются опухоли (в случае заражения А. rhizogens — на корнях) и злокачественные клетки легко распознать (рис. 2.1) и перевести эксплантаты в культуру in vitro. Опухоли корончатых галлов большей частью образованы трансформированными клетками, которые способны расти на питательной среде, не содержащей фитогормонов, и, следовательно, обогнать в росте любые нетрансформированные клетки, присутствующие в исходной опухоли. Однако онкогенные клетки корончатых галлов [c.88]

Размножайте клетки в L-среде с 30 мкг/мл канамицин-суль-фата. Никогда не выращивайте космидсодержащие клетки без антибиотика и всегда — с хорощей аэрацией. Для получения-мини-препаратов мы выращиваем 5 мл в 50-миллилитровой пробирке, для препаративного выделения — 500—1000 мл в колбе на 2 л с энергичной аэрацией. Засев произведите введением-одной колонии или небольшого количества стационарной культуры и инкубируйте в течение ночи (17 ч) при 37 °С. Некоторые космиды обусловливают плохой рост клеток в таких случаях культура не достигает стационарной фазы и ее нужно культивировать дольше. Для космид, не являющихся производными фага К, мы не рекомендуем проводить амплификацию в присутствии хлорамфеникола. Это может повысить выход, но может также привести к преимущественной репликации делеционных производных исходных рекомбинантов. [c.60]

Метод получения концентратов антибиотиков для введения в культуральные среды изложен в приложении 1 (табл. 6). Пенициллин в концентрации 0,2—1,5 ед./мл подавляет рост большинства грамположительных бактерий. Стрептомицинсульфат при концентрации 100 мкг/мл эффективно подавляет рост грам-отрицательных бактерий, но его время полужизни в физиологических условиях составляет только 4 дня. Можно использовать более стабильный дигидрострептомицин. Ваномицин в концентрации 100 мкг/мл активен не только против грамотрица-тельных бактерий, но и против микоплазмы и может быть использован для освобождения культур от микоплазмы (гл. 9). [c.81]

Кроме того, использован ген пео транспозона Тп5, кодирующий аминогликозидфосфо-трансферазу (неомицин-фосфотрансферазу), которая деградирует антибиотик широкого спектра действия G-418 (2-дезоксистрептамин). Клетки млекопитающих чувствительны к данному антибиотику, поэтому при введении в них гибридных плазмид серии pSV-иео на среде с G-418 удается отбирать клоны устойчивых трансформантов. Плазмидная ДНК интегрируется в геном клеток в виде множественных повторов и стабильно сохраняется при росте клонов трансформантов в неселективных условиях. [c.349]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология