Роста клеточный клон

Онкогенез, вызываемый у животных ДНК-вирусами. Исследования канцерогенеза у животных нередко проводятся на культурах тканей. Если перенести клетки животных, например из органов кур или хомячков, или фибробласты человека в подходящую питательную среду, то на внутренней стенке культурального сосуда они начнут размножаться. Обычно клетки продолжают расти лишь до тех пор, пока не начнут соприкасаться между собой. Из-за контактного торможения образуется только однослойный клеточный газон. Если же эти нормальные клетки инфицировать опухолеродным вирусом, то контактное торможение снимается, клетки продолжают размножаться и начинают надвигаться друг на друга. Многослойный рост наблюдается только у клеток, претерпевших опухолевую трансформацию. Из клеточной массы легко выделить отдельные клетки и таким путем получить чистые линии (клоны) трансформированных клеток. [c.153]

У многоклеточных организмов на всем протяжении их формирования и роста идут интенсивные процессы клеточного деления, многие из которых сопровождаются дифференцировкой. Рост органов, а следовательно, и обеспечивающее этот рост клеточное деление должны идти лишь до известного предела. После этого клеточные деления должны либо вообще прекратиться, либо осуществляться по мере необходимости. Например, клетки эпидермиса (наружный слой клеток кожного покрова) должны делиться лишь по мере гибели части из них в результате механических или иных повреждений. Новые эритроциты должны образовываться путем многостадийной дифференцировки стволовых клеток по мере разрушения эритроцитов в ходе их функционирования. Т-лимфоциты и В-лимфоциты должны образовываться и значительном числе из соответствующих клонов по мере развития иммунного ответа. Одним из механизмов регулирования клеточно- [c.419]

После 1960 г. многие затруднения, встающие на пути биохимиков при использовании этого метода, были устранены в результате трех событий. Наиболее важную роль сыграл, возможно, тот факт, что промышленные компании взяли на себя поставку культуральных сред, сывороток, клеток и посуды для культивирования, что позволило выращивать клетки эпизодически или постоянно на самой различной поверхности — от менее одного квадратного сантиметра до нескольких квадратных метров. Это стало возможным только потому, что, с одной стороны, были созданы простые среды, обеспечивающие хороший рост клеток, а с другой — разработаны простые методы выделения первичных клеток, селекции клонов и хранения клеточных линий. [c.7]

Злокачественная опухоль — результат неконтролируемого деления клеток, точнее — нарушения их митотической активности. Причиной этого служит мутация или аномальная активация генов, отвечающих за клеточное деление. Гены, обусловливающие злокачественное перерождение нормальной клетки, называются онкогенами (по-гречески опкоз — опухоль ). Их известно около ста. Злокачественная клетка при делении дает клон своих копий. В конечном итоге они образуют неупорядоченную массу относительно недифференцированной ткани — злокачественную опухоль. Отделяющиеся от нее клетки (рис. 15.17) вместе с током крови и лимфой могут переноситься в другие части тела и, оседая там, формировать вторичные опухоли, называемые метастазами. Этот процесс называют метастазированием. Опухоли, способные к метастазированию, классифицируют как злокачественные, потому что, распространяясь по организму, они нарушают работу жизненно важных систем и рано или поздно приводят к гибели больного. Опухоли бывают и доброкачественными. Для них характерен ограниченный рост и отсутствие метастазов. Они практически безвредны и легко устраняются хирургическим путем. [c.233]

При использовании метода агаровых культур в большинстве случаев раствор агара, содержащий диспергированные клетки, непосредственно заливают в культуральные чашки в один слой. После образования агарового полужидкого матрикса за ростом клеточных клонов внутри него можно следить обычным способом — с помощью стереомикроскопа. Вместе с тем иногда [c.255]

Такая хромосомная нестабильность приводит к появлению большого числа клеток с различными анеуплоидиями, возникшими вследствие разрывов хромосом. Большинство этих клеток гибнет сразу, некоторые претерпевают несколько делений. Однако иногда появляется клетка со структурным дефектом, дающим ей селективное преимущество, частота ее делений более не сдерживается. Такая клетка быстро образует клон генетически одинаковых клеток-первичные раковые клетки. Благодаря своему безудержному росту аномальный клеточный клон будет постепенно замещать нормальные клетки. [c.200]

Размеры меченого клона определяются числом клеточных делений после возникновения клона. Обычно большие клоны образуются после облучения на ранних стадиях эмбрионального развития, а клоны меньшей величины-при более позднем облучении. Проводя облучение в разные сроки и определяя величину образующихся клонов у взрослой мухи, можно получить график роста зачатков различных частей взрослого организма на разных стадиях развития. [c.83]

Однако при соблюдении всех этих условий процент разделившихся клеток остается очень низким. Более эффективны методы кормящего слоя (рис. 10) или ткани-няньки . Для создания кормящего слоя берут суспензию клеток того же вида растения, что и одиночная клетка, или близкого вида. Клеточная суспензия должна находиться в ранней экспоненциальной фазе ростового цикла. Каллусная культура, служащая тканью-нянькой , также должна быть в состоянии активного роста. При достижении колонией, возникшей из отдельной клетки, 0,5—1 мм клон может быть перенесен для дальнейшего выращивания на агаризованную питательную среду непосредственно или на фильтр, помещенный на поверхность агара. Использование кормящего слоя , ткани-няньки и минимального объема среды, в которую помещается отдельная клетка, связаны с феноменом, называемым действие фактора кондиционирования . Несмотря на многочисленные попытки определить химическую природу веществ (или вещества), индуцирующих, деление отдельной клетки, и механизм действия фактора кондиционирования, ясности здесь пока нет. Пожалуй, уверенно можно сказать только то, что фактор этот химической, а не физической природы и включает низкомолекулярные вещества (М. К- Павлова, Р. Г. Бутенко, 1965). [c.29]

В некоторых случаях клоны трансформированных ВЭБ клеток становятся истинно бессмертными линиями. Однако, как показывает опыт многих исследователей, большая часть ВЭБ-трансформированных клонов утрачивает способность к росту или образованию антител [12]. Кроме того, даже если клон остается стабильным, его уровень продукции антител может быть весьма низким. Именно поэтому в настоящее время все больше внимания уделяется попыткам гибридизации ВЭБ-трансформированных клеток со стабильными клеточными линиями, чтобы получить стабильные клоны, активно синтезирующие антитела. [c.161]

Систематическая селекция клеточных линий, дифференцирующихся in vitro. Методы селективного обогащения — мощное средство микробиологов. Например, вы хотите получить мутацию у бактерий, при которой синтезируется, или, наоборот, не синтезируется какой-либо метаболит, или он производится в избыточном количестве. Вам может оказаться необходимым мутант, чувствительный или резистентный к этому метаболиту, или, наконец, мутант, превращающий его в интересующий вас продукт. Для этого необходимо только так составить среду, чтобы она способствовала росту мутантов и тормозила в то же время рост родительского клона, в котором опи возникают другими словами, чтобы отбор нужных мутантов происходил автоматически. Остановка лишь за вашей изобретательностью. [c.241]

Для того чтобы обеспечить антиген-независимый рост Т-клеточных клонов, в среду RPMI — СПК добавляют 5—20% (по объему) надосадочной жидкости от ФГА-активированных клеток миндалин, так что концентрация ИЛ-2 в среде становится равной по крайней мере 10 ед./мл. [c.271]

Для биохимического и генетического изучения структуры секретируемых лимфокинов, а также рецепторов лимфокинов и антигенов требуются клонированные популяции Т-клеток. Кроме того, Т-клеточные клоны могут быть использованы при исследовании регуляции секреции лимфокинов антигенами и экспрессии соответствующих рецепторов. В прошлом мы различали два типа клонов цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) в отношении ростовых потребностей клоны ЦТЛ-А, которые поддерживали в культуре с помощью регулярных добавок клеток-стимуляторов и факторов роста Т-клеток (ФРТК), и клоны ЦТЛ-В, которые могут расти в среде с ФРТК, но без каких-либо клеток-стимуляторов или питающих клеток. В настоящее время мы различаем большее число типов клонов ЦТЛ как в отношении их ростовых потребностей и характера антиген-зависимой экспрессии рецепторов лимфокинов, так и в отношении их способности к секреции лимфокинов. В этой главе мы опишем методики, используемые для выращивания различных типов клонов ЦТЛ, а также методики, которые мы применяли для получения цитолитических Т-клеточных гибридом. [c.281]

Накануне готовят 96-луночные микропланшеты с питающими клетками из расчета одна гибридома на один микропланшет. Микропланшеты ставят во влажный СОг-инкубатор с 5% СО2 при 37 °С. На следующий день готовят две суспензии гибридомных клеток в холодной среде из расчета 1 клетка в 100 мкл и 0,5 клетки в 100 мкл. Каждый 96-луночный планшет делят на две части и в каждые 48 лунок распределяют одну и другую клеточные суспензии одного клона гибридомы. Помещают микропланшеты в СОг-инкубатор. Через 10— 14 дней проверяют рост колоний в микропланшетах и отбирают те, в которых колонии выросли в менее 30%) лунок. Культуральные жидкости из этих лунок тестируют методом ИФА (с. 320) на присутствие специфических антител. Клетки из лунок, давших положительные реакции, последовательно наращивают в 96-, 24-луночных чашках и культуральных матрасах. Часть наросших клеток замораживают для сохранения и дальнейшего использования [c.313]

В одной из схем В-лимфоциты человека, активно продуцирующие специфические антитела, обработали флуоресцентно меченным антигеном, затем с помощью клеточного сортера провели обогащение образца В-лимфоцитами, вырабатывающими эти антитела. Поскольку В-клетки плохо растут в культуре, для улучшения роста их трансформировали вирусом Эпштейна-Барр. Некоторые клоны трансформированных В-кле- [c.214]

Метод, использованный Татумом для выделения ауксотрофов, оказался очень сложным приходилось отбирать наугад и вновь высевать тысячи бактериальных колоний. Поэтому генетики бактерий обрадовались, когда в 1948 г. Дэвис и Ледерберг опубликовали одновременно метод, позволяющий проводить прямой отбор ауксотрофов. Предложенный ими метод основан на том, что антибиотик пенициллин убивает бактерии только в том случае, если они находятся в процессе роста. Пенициллин препятствует синтезу клеточной стенки бактерии. Поэтому бактерии, растущие в его присутствии, вырастают из своей оболочки и в конце концов лопаются. Для бактерий, которые в данный момент не растут и, следовательно, не образуют клеточной стенки, очевидно, не имеет значения, подавлен синтез их клеточной стенки пенициллином или нет. Поэтому, чтобы отобрать небольшую фракцию ауксотрофных мутантов среди всех выросших колоний, культуру бактерий инокулируют в минимальную среду, содержащую пенициллин. В этих услоьиях все содержащиеся в культуре прототрофы будут расти и, следовательно, погибнут от действия пенициллина. Но любой оказавшийся в этой культуре ауксотроф, который не может расти из-за отсутствия в минимальной среде необходимого ему фактора роста, при этом уцелеет. Когда большинство прототрофов бывает убито, пенициллин из культуральной среды удаляют, а нем ногие выжившие клетки высевают на агар с полной средой. В принципе (хотя, увы, это не всегда так) после обработки культуры пенициллином на агаре с полной средой должны появляться только такие колонии, которые образуются клонами ауксотрофов. После этого уже можно описанным ранее методом определять их потреб нссти в спеиифических факторах роста. [c.121]

Клетки эмбриональных тканей и тканей новорожденных используются в качестве исходного материала для выделения специфических типов клеток, которые можно исследовать биохимически либо использовать для создания клеточных культур. Многие клетки растений и животных выживают и часто способны пролиферировать в культуральной чашке при наличии питательной среды соответствующего состава. Разные типы клеток нуждаются в различных питательных веществах, в том числе в одном или нескольких белковых факторах роста. Большинство клеток животных погибает после конечного числа белений, но иногда в культуре клеток спонтанно возникают редкие варианты, способные поддерживаться бесконечно долго в виде клеточных линий. Клеточные линии можно использовать для получения клонов, которые происходят из одиночной клетки-предшественника. Так, можно выделить мутантные клетки, дефектные по одному белку. Можно осуществить слияние различных типов клеток с образованием гетерокарионов (клеток с двумя ядрами), из которых в конечном счете образуются гибридные клетки (ядра клеток которых слились воедино). Гибридные клетки можно использовать для изучения взаимодействия компонентов двух различных клеток. Кроме того, этот метод позволяет ответить на вопрос, в каких конкретно хромосомах находятся те или иные гены. [c.208]

Такие наблюдения привели к представлению о том, что в процессе своей дифференцировки клетки программируются на гибель после определенного числа делений. Эта запрограммированная гибель клеток, возможно, полезна организму как дополнительная страховка от неконтролируемого роста какой-нибудь клетки. Поэтому большинство клеток, вьппедших из-под нормального контроля клеточного деления, даст начало лишь небольшим клонам потомков, после чего вся аномальная популяция погибнет. В главе 16 мы увидим, однако, что опухолевое перерождение означает нечто большее, чем просто нарушение пролиферации, и что не только контроль митотической активности и запрограммированное старение клеток делают рак относительно редким событием. [c.150]

В одном из опытов тератому дезагрегировали и отдельные клетки выращивали в чашках Петри. Получали клопы этих клеток и пересевали их. Каждый клон даже после роста in vitro и пересевов в течение нескольких месяцев давал разнообразные типы клеток клетки желточного мешка, кожи, мышц, хряща и нейроны. После реимплантации в живой организм клетки сохраняли способность к образованию опухоли и дифференцировке (хотя и не давали такого обилия клеточных типов, как те, которые перевивались из мыши в мышь без этапа культивирования in vitro). [c.253]

Клетки, получаемые непосредственно из опухолей, можно клонировать на стекле в виде монослойной культуры. Однако в последнее время появляется все больше данных о клонировании клеток в суспензии, при котором удается избавиться от стро-мальных элементов, которым необходима для роста твердая подложка. Теоретически преимущество клонирования в суспензии состоит в том, что в такой системе эффектам подвержены лишь клетки с высокой способностью к самообновлению (возможно, стволовые клетки опухолей) клетки с низкой пролифе-ративнои активностью, составляющие большую часть опухоли, в формировании ответа не участвуют. Это, однако, справедливо только в том случае, когда колонии представляют собой истинные клоны (то есть возникают из единичной клетки, а не из клеточного агрегата) и подсчет их производится после многих клеточных генераций. В реальных исследованиях эти требова- [c.262]

В том случае, когда клетки после слияния рассевают в лунки панели для культуры ткани объемом 2 мл, вероятность того, что в одной лунке окажется более одного клона, повышается. Просматривая культуры под инвертированным микроскопом, можно наблюдать два и более клонов в лунке. Клонирование клеток, продуцирующих антитела нужной специфичности, предпринимают немедленно после образования монослоя (обычно па 21—28-е сутки после гибридизации). Тем не менее гибридо-ыу продолжают наращивать в нескольких лунках, а затем во флаконах, пока не образуется достаточное для замораживания и хранения в жидком азоте количество клеток. Необходимо иметь, по меньшей мере, пять ампул исходной клеточной взвеси на случай, если возникнут трудности или неудачи при клонировании. Во время культивирования гибридомы во флаконах культуральную среду тестируют для выявления антител нужной специфичности. Если наблюдается прогрессирующее сни-жение образования антител на стадии роста культуры во флаконах, то это означает, что несекретирующие варианты гибридных клеток обогнали в росте антителообразующие клетки, В таком случае важно отобрать антителообразующие гибрид ные клетки путем клонирования, а небольшое количество клеток из этих флаконов сохранить для последующих процедур клонирования. Клонирование клеток из тех флаконов, где а культуральной среде выявляют прогрессивное снижение образования антител, почти всегда безуспешно. Если все же очень важно выделить такую клеточную линию, то следует извлечь из жидкого азота и разморозить образец клеток, замороженный на самой ранней стадии культивирования и сразу же после восстановления клеток в культуре провести клонирование. Клони-рование может быть осуществлено либо путем высевания небольшого количества клеток в мягкий агар, либо с помощью лимитирующих разведений. [c.139]

Для размораживания пробы переносят в стаканы, предварительно охлажденные в жидком азоте, и оставляют нагреваться на воздухе. Через 15—20 мин пробы почти полностью оттаивают, и их переносят в ледяную воду. Полностью размороженные пробы переносят в водяную баню при 37 °С и добавляют к ним подогретую до 30 X S-среду в соответствии со следующей схемой 5 раз по 20 мкл, 6 раз по 50 мкл, 4 раза по 100 мкл и 2 раза по 500 мкл через 2—3 мин. После каждой добавки пробы тщательно перемешивают. Клеточную суспензию объединяют с 20 мл теплой S-среды и разливают по лункам панелей ostar 3524. В каждую из 10 лунок наливают по 2 мл клеточной суспензии (2,5-105 исходно замороженных клеток) и по 100 мкл С8-среды, содержащей 2-105 облученных (2000 Р) перитонеальных клеток. Некоторые клоны размножаются достаточно интенсивно, и через 2—3 сут рост клеток становится [c.292]

Линия. Клеточная популяция, образовавшаяся в результате непрерывного роста культуры клеток in vitro. Обычно содержит ряд индивидуальных клонов. [c.560]

Скрытые повреждения, вызываемые опухолевым инициатором, как и генетические повреждения, необратимы, и поэтому могут обнаруживать себя при воздействии опухолевого промотора даже спустя большой промежз ок времени. Немедленный первичный эффект промотора, по-видимому, заключается в том, что он стимулирует деление клеток (или задерживает клетки, которые должны были окончательно дифференцироваться, в состоянии продолжающегося деления). В местах воздействия инициатора начинается рост многочисленных мелких доброкачественных бородавкоподобных опухолей, называемых папилломами Чем больше исходная доза инициатора, тем больше образуется папиллом Считается, что каждая папиллома, по крайней мере при низких дозах опухолевого инициатора, является одним клоном клеток -потомством мутантной клетки, возникшего под действием инициатора. Опухолевый промотор и механическое повреждение могут индуцировать экспрессию некоторых генов социального контроля , влияющих прямо или опосредованно, на клеточную пролиферацию (см. разд. 13.4). В спокойном эпителии такие гены могут молчать , и пототу любые ту тации, возникшие в них в результате действия инициатора, остаются скрытыми, однако индукция их экспрессии опз олевым промотором или факторами, образующимися при повреждении, ведет к проявлению этих мутаций и, как следствие, изменению пролиферации клеток (рис. 21-13). [c.456]

Репродуцируясь в культурах клеток, вирусы вьрывают разного рода ЦПД, выражающееся в округлении, сморщивании, уменьшении или, наоборот, увеличении размеров клеток, слиянии их и образовании симпластов, деструкции цитоплазмы и ядра. Наконец, в монослое клеток, зараженных вирусами, в результате разрушения ими отдельных участков клеточного пласта могут появляться стерильные пятна , или бляшки, представляющие собой клон вирусной частицы, что дает возможность не только изолировать вирус, но и определить его титр. Для этого из флакона с монослойной культурой клеток удаляют питательную среду и заражают ее вирусом. После адсорбции вщ са на клетках чдюз 30—60 мин культуру клеток быстро покрывают 3 % расплавленным агаром, содержащим лошадиную сыворотку, солевые добавки и индикатор нейтральный красный. В монослое, где происходит нормальный рост клеток, среда йодкнсляется и индикатор окрашивает его в розовый цвет. Пораженные вирусом клетки прекращают метаболизм, pH не меняется и в этих местах четко обозначаются островки неокрашенной среды в виде беловатых бляшек различных размеров и конфигураций. [c.110]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология