Клетки светорассеяние, флуоресценция

Клетки в исследуемом образце окрашивают специфическими флуоресцентными реагентами для определения поверхностных молекул и вносят в проточную вибрационную камеру прибора. Выходящие из камеры клетки попадают в поток несущего буферного раствора. Клетки проходят через лазерный луч, и с помощью детекторов определяются размеры (детектор светорассеяния) и гранулярность (детектор света, расположенный под прямым углом к лазерному лучу) каждой клетки, а также цвет флуоресценции (красный и зеленый) соответственно двум разным поверхностным маркерам. Под влиянием вибрации поток жидкости, несущей клетки, разбивается на капли им сообщается заряд, благодаря чему с помощью отклоняющих пластин (под контролем компьютера) можно получить раздельно различные клеточные популяции в соответствии с измеренными параметрами. На трехмерной диаграмме показаны размеры (з), число (п) и флуоресценция (f) лимфоцитов цельной клеточной популяции и популяции С08 , полученных на клеточном сор-тере с использованием антител анти-С08. [c.533]

Клетки окрашиваются флуоресцирующим красителем, специфическим для отдельных клеточных компонентов (может быть использован бромид этндия в концентрации 0,1 мг/мл для окраски ДНК или флуоресцирующие антитела). Анализ окрашенных клеток производится по мере их прохождения одна за другой через сенсорное устройство. Так, при прохождении клетками расположенного перпендикулярно луча аргонового лазера (время прохождения 2—3 мкс) каждая клетка дает вспышку флуоресценции, которая может быть проанализирована как по интенсивности, так и по цвету. Кроме того, сигнал, соответствующий клеточному объему, может генерироваться путем установки диафрагмы счетчика Коултера на пути прохождения клеток либо, что проще, путем измерения рассеянного света вторым фотоумножителем, установленным под прямым углом к лазерному лучу. Информация, полученная в результате измерения флуоресценции клеток и светорассеяния, позволяет воссоздать трехмерную картину числа клеток, их объема и содержания в них ДНК. [c.140]

Условия сортировок определяются главным образом выбором верхнего и ннжыего порогов для светорассеяния и эмиссии флуоресценции вместе или по отдельности. В установке имеются две пробирки для сбора фракций (рис. 6.5), что позволяет проводить одновременную сортировку клеток по двум параметрам. Остальные клетки собираются в центральный резервуар. [c.191]

Аналоговые сигналы, производимые двумя ФЭУ (например, данные по светорассеянию и флуоресценции), собираются в осциллоскопе с памятью и представляются на его экране в виде двумерного графика, где каждая клетка представлена одной точкой (рис. 6.7, нижняя часть). Фокусы плотности на этих гистограммах могут представлять кластеры интересующих клеток, и могут быть задействованы пороговые системы для подсчета числа 1клеток или для запускания клеточного сортера, отбирающего клетки из интересующих областей дисплея. [c.195]

Рис. 6.7. Клетки РН1 (клетки кишечного эпителия эмбриона человека), окрашенные митрамицииом, как указано в тексте. На верхнем рисунке приведена зависимость числа клеток (ордината) от величины флуоресиснцпн (абсцисса). На нижнем рисунке те же клетки представлены в форме точечной цитограммы светорассеяние — по оси ординат, флуоресценция — по оси абсцисс (пороги флуоресцентного сигнала установлены шире, чем па верхнем рисунке). Данные получены с помощью Б. Д. Япг и Р. Силлар,

На рис. 20-2 показана картина, получаемая в режиме dot plot . По оси X отложена интенсивность светорассеяния, а по оси у — интенсивность флуоресценции иодистого пропидия (ИП). ИП связывается с ДНК и дает флуоресценцию в красной области. Здесь ИП использован для выявления мертвых клеток, так как он окрашивает только клетки с разрушенной мембраной. Каждая точка на рисунке представляет данные, полученные по одной частице, прошедшей через пучок лазера.Палевой картине выявляются три популяции частиц 1) эритроциты (и остатки ткани) соответствуют пятну слева внизу — они не окрашиваются ИП и слабо рассеивают свет 2) мертвые клетки локализованы в верхней части картины — они окрашиваются ИП 3) жизнеспособные лимфоциты соответствуют пятну, расположенному внизу правее эритроцитов они не окрашиваются ИП и рассеивают свет интенсивней, чем эритроциты. Рис. 20-2 (слева) демонстрирует очень полезное для цитофлуориметрии свойство клеток большинства типов, состоящее в том, что чаще всего мертвые клетки менее интенсивно рассеивают свет (переднее рассеяние света, ПРС), чем живые. Данные, касающиеся живых лимфоцитов, можно накапливать, регистрируя только [c.340]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология