Культивирование клеток камера

Таким образом, оптимальным условием культивирования клеток вне организма и воспроизведения зеркального ЦПЭ было вращение камер в барабане со скоростью 24—25 об/ч. При такой скорости вращения клетки в колбах равномерно смываются средой без гидродинамического воздействия, не подсыхают, на достаточное время соприкасаются с газовой фазой среды культивации, своевременно смываются с поверхности монослоя продукты метаболизма, тормозящие рост и деление клеток. Все эти моменты отражены в известных руководствах по культивированию клеток вне организма. [c.27]

Перед заполнением капилляров клетки дважды отмывали питательной средой при прежнем режиме и ресуспензировали в равном объеме среды. Полученную взвесь насасывали с помощью гибкой резиновой трубки с небольшим отверстием на конце (можно использовать трубки из системы для переливания крови) в капилляры из тонкого стекла длиной 10 см и диаметром 0,7 мм. Осторожно запаивали один конец капилляра и помещали этим концом вниз в центрифужные пробирки. Для осаждения лейкоцитов капилляры в дентрифужных пробирках центрифугировали в течение 4 мин при 750 об/мин. Затем часть капилляра с лейкоцитами нарезали резчиком для вскрытия ампул на отрезки длиной 4 мм и помещали в каперы для культивирования. В качестве камер использовали стеклянные чашки диаметром 10 мм и высотой 8 мм с плоским дном. Капилляры прикрепляли к дну камеры вазелином таким образом, чтобы клетки мигрировали с обоих концов капилляра. Затем камеру заполняли питательной средой (без добавления сыворотки) с раствором аллергена. Контрольные капилляры помещали в камеру с питательной средой без аллергена. Чашки укладывали в штатив из оргстекла с крышкой и инкубировали в течение 24 ч при -f-37° . В качестве аллергена использовали сульфат бериллия. Исходный 1 % раствор был приготовлен на физиологическом растворе, который ех tempore разводили питательной средой до получения необходимой рабочей концентрации. [c.205]

Для культивирования вируса классической чумы птиц FPV использовали клетки фибробластов эмбриона кур 8—11-дневного возраста. Яйца мыли в проточной воде с мылом, затем скорлупу несколько раз обрабатывали спиртом, обжигали тупой конец яйца и обеззараживали йодом. Скорлупу над воздушным пространством срезали ножницами. Извлекали зародыш, удаляли глаза, клюв, лапки и крылья, а тело промывали раствором Хенкса. Суспеи 1гю клеток готовили путем механического измельчения зародыша с последующей трипсинизацией ткани. Готовили взвесь клеток фибробластов из расчета 300 ООО клеток на 1 мл среды и заливали по 5 мл в камеры. В качестве питательной среды использовали среду 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота. [c.39]

Одпим из существенных моментов воспроизведений зеркального ЦПЭ является вращение камер с культурами со скоростью 24—25 об/ч. Вращение сосудов при культивировании клеток с этой скоростью — оптимальный реишм выращивания клеток вне организма. При такой скорости вращения барабана клетки в камерах равномерно омываются средой без гидродинамического воздействия, пе подсыхают, на достаточное время соприкасаются с газовой фазой среды культивации, своевременно смываются с поверхности монослоя продукты метабо.тизма, тормозящие рост и деление клеток. Как отмечалось выше, нам ие удалось заменить вращение другим способом оптимального культивирования культуры клеток при использовании камер разных конструкций. Вполне может быть, что это условие воспроизведення зеркального ЦПЭ каким-то образом связано с усилением сигнал а, например, в момент смепы культуральной среды кислородом воздуха. Такое предположение тем более вероятно, если в основе механизма взаимодействия рассматривать излучение. При использовании фотоэлектронного умножителя (ФЭУ-130) проведены предварительные исследования интенсивности излучения монослоя клеток 1) без каких-либо воздействий (контроль) 2) пораженного сулемой 3) подвергавшегося периодическому вращению на нашем барабане со скоростью 25 об/ч 4) пораженного различными дозами сулемы и одновременно периодически вращавшемся в барабане. [c.104]

Существует несколько вариантов метода непосредственного подсчета микробов под. микроскопом. При некоторых из них, например подсчете в камера , учитывают клетки непосредствелно в жидтфсти в других, например методе Брида, Дрейера — Королева, -микроскопируют высушенный, фиксированный и окрашенный препарат. Имеется также вариант (м етод микрокультур), представляющий как бы сочетание метода непосредственного подсчета микробов с методом культивирования. [c.326]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология