Методы спонтанного связывания

Сыворотку инкубируют в стандартных условиях с меченым гормоном, а затем хроматографируют. При этом получают три пика радиоактивности пик связанного с белком гормона, пик свободного гормона, а между ними пик свободного 12 , образовавшегося при фотохимическом разложении гормона. Результаты количественного определения отлично совпадают с данными, полученными другими методами эти результаты были подтверждены на многих сотнях случаев [113, 114]. Многократно было описано также разделение иодированных аминокислот, продуктов их ассоциации с белками и неорганического иода (см. литературу к гл. IV, приложение II). Этот прием использовался для количественного определения 1 -тиро-нина и I -тироксина [115—117]. Для определения немеченого тироксина сыворотку вначале депротеини-зируют, а затем прибавляют определенное количество тироксинсвязывающей фракции глобулинов. Потом инкубируют с определенным количеством меченого тироксина и определяют распределение активности на сефадексе G-25. Таким путем можно оценить количество первоначально присутствовавшего в среде тироксина, поскольку он конкурирует с радиоактивным гормоном за связывание с глобулином [118]. В настоящее время разработан метод разделения и определения гормонов щитовидной железы, позволяющий обнаруживать количества порядка одного нанограмма [119]. С другой стороны, высказано критическое мнение, что следует очень тщательно учитывать спонтанную деградацию тироксина, влияние размеров колонки и необратимую адсорбцию тироксина [120]. [c.227]

Рассмотрим теперь вопрос о распознавании на молекулярном уровне. Этим свойством обладают структуры, обеспечивающие, в частности, выявление отрицательных ионов с помощью природных ферментов. Простейшим методом моделирования такого механизма является введение в полимер гидрофобных боковых цепей. Такие боковые цепи в результате гидрофобного взаимодействия в водном растворе спонтанно образуют агрегаты (полимерные мицеллы), которые избирательно захватывают находящиеся в растворе гидрофобные субстраты. Этот метод очень легко реализуется в мицеллах и эмульсиях, однако при этом захватьтаются все гидрофобные вещества без разбора, что, конечно, является лишь упрощенным подобием ферментативного действия, поскольку природные ферменты, осуществляя свои функции, с очень высокой точностью сорбируют группы строго определенной структуры. Пока в литературе нет данных о синтезе полимеров или использовании катализаторов на полимерной основе специально для связывания веществ определенного типа. [c.99]

Космиды довольно часто нестабильны и спонтанно перестраиваются или становятся меньше (это может происходило в 1—5% случаев). Чем это объясняется, установить трудно, и можно допустить любую из нескольких причин наличие кп-вертированных дупликаций, области гомологии в эукариотической ДНК с сильными прокариотическими промоторами, операторными участками и сайтами связывания репрессоров [7]. Мы идентифицировали космиды, обусловливающие замедление роста клеток-хозяев при выращивании культур, по-видимому, будет происходить обогащение клональной библиотеки делеционными производными космид, не влияющими на рост клеток. На практике мало что можно сделать с нестабильными космидами, за исключением попыток выделить и хранить полноразмерные молекулы из культуры, обогащенной делеционными вариантами. Для этого можно использовать упаковку in vivo и суперинфекцию на чашках (разд. 2.2.8.3—2.2.8.6). Препараты, полученные из фаголизатов, будут обогащены полномерными космидами, поскольку только такие космиды укладываются в рамки ограничений по размеру, характерных для реакции упаковки. Однако при этом могут быть упакованы и мультимеры делеционных производных, так что этот метод может оказаться неэффективным. [c.71]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология