Метод бляшек окрашивание бляшек

В основе метода лежит заражение небольшого числа клеток в полном монослое. Вирус, образующийся в зараженных клетках, распространяется вертикально, заражая соседние клетки известны различные способы предотвращения дальнейшего распространения вируса. Дегенеративный эффект вирусов на клетки распространяется до тех пор, пока не обнаруживается видимая область погибших клеток (бляшка). Окрашивание клеточного пласта позволяет легко визуализировать бесцветные бляшки. [c.204]

Если нет возможности подсчитать бляшки сразу же после -окрашивания, следует иметь в виду, что они остаются видимыми по крайней мере в течение 48 ч, причем их размер не увеличивается при помещении в герметически закрытый контейнер в атмосфере 5%-ного СОг при 4°С. Если необходимо получить более стабильный препарат, применяют альтернативный метод окрашивания. В этом случае агаровое покрытие удаляют и фиксируют клеточный монослой буфером с формальдегидом [10% 38%-НОГО формальдегида (объем на объем) в РВ5] 2—3 мин. Затем клетки окрашивают 10 мин, добавляя в каждую чашку несколько миллилитров толуидинового синего (1%-ный водный раствор). После окрашивания краситель отмывают водой и чашки высушивают. Данный метод окрашивания применим и в том случае, если покрытие готовят на основе КМЦ. [c.180]

Хотя во всех описанных ниже методах в качестве тест-культуры взяты клетки Vero, однако можно использовать с этой целью ВНК-21, LL MK2, РК15 и другие линии клеток млекопитающих. Первый метод оптимален при исследовании большого числа образцов его легко адаптировать для работы с микропланшетами для титрования, как описано здесь, или с планшетами или чашками большего размера, например для определения морфологии бляшек. В этом случае для титрования используют карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ). Далее описан еще один метод, предполагающий использование агарозы и окрашивание клеток нейтральным красным. Он особенно полезен при работе с вирусными клонами, когда необходимо, чтобы бляшки содержали инфекционный вирус. [c.85]

Классический метод бляшек для определения инфекционности вирусов животных, впервые описанный Дюльбекко [15], заключается в адсорбции вируса на монослое чувствительных клеток с последующим добавлением содержащей агар культуральной среды, затвердевающей при охлаждении. После инкубации в течение определенного промежутка времени при окрашивании клеток нейтральным красным становятся видны бляшки. [c.116]

Число инфекционных вирионов определяют методом бляшек. Реовирус формирует бляшки на разнообразных клеточных культурах, но чаще всего для титрования используют Ь-клетки или обезьяньи клетки СУ-1. Вирусные бляшки под 1%-ным агаровым покрытием при 37°С образуются на 4—5 сут их выявляют прижизненным окрашиванием нейтральным красным или 0,01%-ным раствором кристаллического фиолетового после фиксации формалином и удаления агарового покрытия. Обычно при культивировании реовируса описанными выше методами отношение числа физических частиц к числу БОЕ составляет 20—50 1 заметное увеличение этого отношения свидетельствует об образовании ДИЧ, что сопровождается снижением выхода инфекционных вирионов. Как уже отмечалось, реовирус исключительно эффективно размножается в мышиных Ь-клетках, и в принципе можно получить 25 мг очищенного вируса из 1 л зараженной суспензионной культуры. На практике для штаммов первого (например, Ленг) и третьего (например, Диринг) серотипов выход составляет 3—10 мг/л, а для штаммов второго серотипа (например, Джонс) —2—5 мг/л. [c.207]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология