Цитотоксические клетки тесты

Для клеточных реакций подбор концентрации, не оказывающей цитотоксического действия, осуществляют по общепринятому в иммунологии методу подбора рабочей дозы антигена, т. е. путем постановки серии анализов с клетками здорового субъекта и с различными концентрациями химического аллергена. Рабочая концентрация не должна изменять спонтанного (нормального) уровня реактивности клеток—агломерации, амебоидной активности, дегрануля ции, степени миграции, бласт-трансформации и т. д. Цитотоксическое действие может быть также связано с изменением pH среды под влиянием химического аллергена, поэтому необходимо проверять pH его раствора и по возможности доводить его до нейтрального. Цитотоксический эффект химического аллергена должен быть проверен и при постановке серологических анализов, связанных с употреблением клеточных элементов в качестве индикаторной системы. Так, при применении в реакциях базофилов и тучных клеток животных-доноров (варианты пассивного теста по Шелли) требования к подбору рабочей концентрации аллергена остаются такими же, как и при клеточных реакциях. В реакциях, в которые вводят эритроциты (РПГА, РСК, РПК), допустимо использование концентрации аллергена, оказывающей слабый цитотоксический эффект, если меньшая значительно ниже рабочей дозы [c.167]

Цитотоксические Т-клетки, как и Т-хелперы, распознают не собственно чужеродный антиген, а его комплекс с молекулами МНС. Однако о1раничения в данном случае касаются молекул I класса. Это заключение было сделано по результатам достаточно простых, но демонстративных опытов. Мышей с определенным гаплотипом иммунизировали одним из вирусов (рис. 7.9). От примированных животных получали Т-клетки, которые использовали в цитотоксическом тесте с клетками-мишенями. В тех случаях, когда [c.169]

Мышей с определенной характеристикой по локусу К или D иммунизировали одним из вирусов (условно вирусом А). От примированных животных получали Т-клетки, которые использовали в цитотоксическом тесте с клетками-мишенями, зараженными вирусом и относящимися по характеру локуса К (или D) либо к донору Т-клеток, либо к его аллельному варианту. Цитотоксическую реакцию оценивали по интенсивности выделения Сг из клеток-мишеней. Примированные Т-киллеры гаплотипа не дают реакции с генетически идентичными, интактными клетками-мишенями (1). Нет реакции и при заражении клеток-мишеней вирусом, отличающимся от вируса использованного при иммунизации (2). Цитотоксическая реакция положительная, если генетически идентичные Т-кил-лерам клетки-мишени заражают гомологичным вирусом (3). В то же время при использовании клеток-мишеней, отличающихся по локусу К от Т-киллеров, цитотоксическая реакция не развивается даже при наличии гомологичного вируса у клеток-мишеней (К" против К или К против К — 4,5). Аналогичные отношения выяапены для локуса D. В то же время генетические ограничения не проявляются по генам, контролирующим молекулы П класса. Из этих опытов следует, что Т-киллеры распознают как собственные молекулы I класса, так и чужеродный вирусный антиген [c.171]

ИФМ имеет ряд существенных преимуществ перед цитоток-сическими тестами, ELISA и РИА. Во-первых, с помощью ИФМ можно определять молекулы, присутствующие на клеточных поверхностях с плотностью до нескольких тысяч копий на клетку. Во многих случаях, когда методы ELISA на клеточных поверхностях, цитотоксические тесты или РИА оказываются недостаточно чувствительными, антигены плазматической мембраны удается определить с помощью ИФМ. Во-вторых, при исследовании ИФМ имеется возможность достаточно просто детектировать антитела практически всех классов иммуноглобулинов. Например, в настоящее время имеется несколько видов мышиных МА против каппа-легких цепей иммуноглобулинов крыс. Поскольку от 90 до 95% всех иммуноглобулинов крыс содержат каппа-легкую цепь, эти МА существенно улучшают возможности скрининга. В отличие от этого в цитотоксических тестах желательно, чтобы МА принадлежали к классу IgM, так как при этом фиксация комплемента обеспечивается с наибольшей эффективностью. В-третьих, при проведении ИФМ на проточном флуорометрическом клеточном сортере (ПФКС) для каждого определения связывания антител анализируется большое число клеток. Если для каждого образца имеется возможность просчитывать 5—10-10 клеток, то значительно уменьшается вероятность ошибок. [c.179]

Описанный метод был применен для детектирования новых антигенов на фибробластах, трансфецированных клонированными Я-2-генами (табл. 12-2). Мы обычно используем этот метод для Н-2- и 1а-типирования стимулированных Кон-А спленоцитов, которые также применяются как клетки-мишени для цитотоксических Т-клеток. Очень удобно, что эти клетки можно оставлять на холоду в течение ночи перед проведением теста связывания (табл. 12-3). Для стандартного Н-2- и 1а-типирова-ния мышей-беккроссов мы хирургически удаляем два или четыре шейных лимфатических узла и готовим клеточную суспензию. Эту суспензию можно разделить как минимум на пять порций в зависимости от набора моноклональных антител, которые будут использоваться для тестирования (если ожидают результат о наличии или отсутствии антигена, то нет необходимости считать клетки) (табл. 12-4). [c.228]

Использование аллореактивных хелперных клонов позволяет разработать хелперный тест, обладающий следующими характеристиками 1) активация В-клеток происходит в культурах, которые не содержат специфических цитотоксических предшественников, и, следовательно, в этих культурах не возникает цитотоксической (супрессорной) активности 2) к пролиферации и синтезу антител индуцируется большая часть В-клеток 3) В-клетки активируются независимо от специфичности вырабатываемых ими антител и в отсутствие чужеродных антигенов. [c.278]

Подготовка клеток-киллеров. После завершения процедуры рестимуляции in vitro отвечающие клетки промывают и ре-Ьуспендируют таким образом, чтобы их максимальная концентрация в цитотоксическом тесте в момент внесения в культуру соответствовала значению 1—1,2-10 . Исходя из этой концентрации, готовят серийные трехкратные разведения. [c.506]

Одна из предложенных модификаций (Berno o et al., 1976) основана на том, что антисыворотки к Рг-микроглобулину способны блокировать лимфоцитолиз, вызываемый антителами ан-ти-HLA. По этой методике антигены HLA-A, -В и -С маскируются птичьими антителами к 2-микpoглoбyлинy человека или F(ab ) 2-фрагментами кроличьих антител той же специфичности. Обработанные таким образом клетки не связывают комплемент и не реагируют с антителами анти-HLA (А, В, С) при 20°С, но могут вступать в цитотоксическую реакцию с антителами другой специфичности (не анти-HLA). Этот модифицированный тест [c.238]

Выяснив распределение клеток по фракциям, соседние фракции объединяют в соответствии с поставленной задачей и проводят тесты на функциональную активность. При изучении иммунного ответа in vitro [в частности, при определении хелперов или предшественников антителообразующих клеток (АОК)] в полученных фракциях различиями по количеству эритроцитов можно пренебречь, так как для иммунизации их добавляют в избытке. Однако перед постановкой других тестов [например, при оценке цитотоксической активности клеток или их участия в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (Elliott et al., 1975)] эритроциты нужно удалить. Для этого клетки ресуспендируют в гемолитическом буфере (0,01М КНСОз, [c.261]

Как установлено, в подобных смешанных культурах возможна стимуляция Тх-клеток D4 , в результате которой они пролиферируют и выделяют эффекторные цитокины. В тех же культурах образуются Тц-клетки DS" их цитотоксическую активность можно определить в тесте с высвобождением Сг (см. рис. 29.26). Тц-клетки могут быть также получены при культивировании лимфоцитов в присутствии ИЛ-2 для увеличения популяции эффекторных клеток, образовавшихся in vivo. Активность Тц-клеток следует отличать от активности нормальных киллеров (НК) для их дифференциации возросшую популяцию лимфоцитов исследуют с использованием соответствующих стандартных культур. [c.383]

Для определения антигенспецифичных Т-клеток часто используют тест стимуляции лимфоцитов - пролиферативный ответ Т-клеток на антиген, выявляемый по включению ими Н-тимидина (рис. 29.25). Цитотоксическую активность клеточных популяций обычно определяют по их способности лизировать клетки-мишени (например, инфицированные вирусами, опухолевые или аллогенные клетки). Количественно лизис клеток-мишеней определяют при помоши теста с высвобождением меченого хрома (рис. 29.26). [c.542]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология