Векторы транспозоны

Включение фрагмента чужеродной ДНК в вектор осуществляют по следующей схеме (рис 686) Многие плазмиды несут транспозоны [c.198]

Векторы на основе мобильных элементов (транспозонов). В 90-х годах стали использовать для трансформации растительных клеток векторы на основе мобильных элементов — последовательностей ДНК, имеющих специфическое строение и способных к транспозициям по геному. Какие преимущества дает применение таких векторов по сравнению с другими векторными конструкциями Метод основывается на том, [c.57]

Так, одним из первых было создано целое семейство векторов с транспозоном Тп9, позволяющим получать направленные делеции [c.295]

Как видим, наиболее хорошо изученные эукариотические транспозоны с успехом используют в качестве молекулярных векторов. Несомненно, более тщательное исследование транспозонов млекопитающих позволит создать и для них аналогичную векторную систему. [c.431]

Поскольку транспозоны не способны к автономной репликации, для переноса их из одной бактериальной клетки в другую необходим так называемый вектор (переносчик). Векторами могут служить плазмиды или бактериофаги. Следует упомянуть, чТо колифаг мю ( фаг-мута-тор ), подобно транспозону, обладает способностью внедряться в различные участки бактериальной хромосомы и вызывать мутации. По этой причине фаг мю был назван гигантским транспозоном , и его используют в повседневной практике получения мутантов Е. oli. [c.447]

Важным этапом работы по генетической трансформации растений является выделение и клонирование генов, создание на их основе векторов для переноса чужеродных генов из клеток-доноров в клетки-раципиенты. Использование плазмидных, транспозонных, вирусных, пневмобалли-стических и других векторных систем позволяет исследователям осуществлять трансформацию растительных генотипов и получать трансгенные (модифицированные) растения с заданными или близкими к ним свойствами и качественными характеристиками. [c.422]

Чтобы осуществить транспозонный мутагенез, т. е. ввести транспозоны в хромосому (и другие репликоны) бактериальной клетки, необходимо иметь донорную молекулу ДНК — переносчик, или вектор для доставки транспозона. В качестве векторов обычно используют фаги или плазмиды, которые можно легко элиминировать из бактер.т-реципиента. Приобретение клеткой устойчивости к антибиотику в этом случае связано с перемещением транспозона из молекулы-донора в бактериальную хромосому (или в какой-либо другой репликон, содержащийся в клетке). [c.110]

В качестве плазмидных векторов для доставки транспозонов используют температурочувствительные по репликации мутанты плазмид. Клетки, получившие такую плазмиду, содержащую транспозон, высевают на селективную среду и культивируют при повышенной температуре. В этих условиях плазмида элиминируется и устойчивость к антибиотику может возникать в результате перемещения транспозона в хромосому. Другой способ избавления от плазмидного вектора связан с использованием реципиента, несущего плазмиду той же группы несовместимости. В условиях, исключающих утрату клетками резидентной плазмиды, ведут отбор трансконъюгантов по признаку, детерминируемому транспозоном. Их появление может быть обусловлено перемещением Тп-элемента в хромосому бактерии. [c.111]

Для какой цели используют транспозонные векторы дрожал [c.371]

Использование транспозонов. Перенос генов с помощью транс--1030ННЫХ векторов, как и в случае использования ретровирусов, еет определенные преимущества. Здесь интеграция генов про-сходит с использованием сайт-специфических транспозаз, что т сохраняет чужеродные гены от перестроек и делает экспрес- ю и регуляцию внесенных генов более контролируемой. [c.417]

События интрамолекулярной коинтеграции, связанные с наличием в векторе транспозируемых элементов, приводят к образованию дочерних молекул, несущих делеции определенных участков. Такие делеции происходят с фиксированных мест транспозона в варьирующие места прилегающего участка ДНК, который в данном случае представляет собой клонированный фрагмент ДНК, предназначенный к секвенированию. С целью получения субклонов, несущих подобные делеции, были созданы различные специализированные вектора для секвенирования протяженных фрагментов ДНК, несущие в своем составе разные транспозоны. Учитывая то, что транспозиция происходит не с очень высокой частотой, для каждого типа векторов были разработаны соответствующие штаммы Е. oli, позволяющие в определенных условиях осуществлять поиск нужных субклонов, обычно по признаку летальности, т.е., в этом случае после транспозиции на чашке Петри вырастали только делеционные варианты исходного фрагмента ДНК. [c.295]

Однако все эти векторы и векторные системы имеют существенный недостаток. Поскольку проведение подобных делеционных процедур требует использования специальных штаммов Е. oli и весьма сложной схемы их выращивания, это служит некоторым препятствием к их широкому использованию. Другими отрицательными моментами, особенно для векторов, рассчитанных на клонирование крупных фрагментов ДНК, являются некоторая нестабильность вставки, трудности в ее реориентации, вызванной необходимостью читать другую цепь ДНК. Также для большинства транспозонов характерным является сосредоточение мест их внедрения у дистального конца вставки по сравнению со значительно меньшей частотой данных событий в центральной и проксимальной частях [Ahmed, Podemski, 1997]. [c.298]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология