Ингибиторы РНКазы

Экстракцию РНК из рибосом проводят методом фенольной депротеинизации. Процедуру выделения рекомендуется проводить в присутствии ингибиторов РНКаз, поскольку высокополимерные рибосомные РНК могут подвергаться расщеплению нуклеазами. [c.170]

Экстракция РНК. К суспензии рибосом добавляют ингибитор РНКаз гепарин (можно использовать также диэтилпирокарбонат, по-ливинилсульфат) из расчета 0,5 мг на 1 мл и равный объем фенола. Смесь встряхивают 30 мин и центрифугируют на холоде 30 мин при 600—1000 . При помощи шприца отбирают верхний водный - слой и добавляют к нему снова фенол (1/2 объема). После интенсивного встряхивания и центрифугирования водный слой переносят в делительную воронку и добавляют равный объем смеси хлороформа с эфиром I 1 После встряхивания и отстаивания собирают водный слой и осаждают из него РНК, приливая в тройной объем охлажденного этилового спирта. Раствор оставляют на несколько часов при —20°С. Осадок рибосомной РНК собирают центрифугированием на холоде (3000 g, 20 мин), растворяют в небольшом объеме ацетатного буфера и повторяют осаждение спиртом. Осадок рибосомной РНК после центрифугирования высушивают или хранят в этаноле при —20°С. [c.171]

Необходимо помнить, что трис-буферы нельзя эффективно обработать ДЭПКом, и их необходимо автоклавировать. Чувствительные к нагреванию реактивы (такие, как нуклеотиды) следует готовить на стерильной, обработанной ДЭПКом воде, и работать с ними надо в стерильных условиях. Для эффективного подавления активности РНКазы используют ингибитор из плаценты (РНКазин), при этом полностью сохраняется активность РНК-полимеразы. Необходимо помнить о том, что широко используемый ингибитор РНКазы ванадил-нуклеотидный [c.19]

Весной 1967 г. я обратил внимание на статью Г. Лоуфорда и соавт. (Канада), в которой сообщалось о выделении полисом из клеточных ядер с помощью экстракции в присутствии ингибитора РНКазы из цитоплазмы печени крысы. Анализ рисунков статьи вызвал у меня подозрение, что полученные автором полисомы вряд ли являются на самом деле полисомами, а, возможно, соответствуют искомым нами частицам. Наиболее же важным для нас было сообщение об использовании ингибитора РНКазы. [c.200]

Наш метод выделения гяРНК из ядер печени крысы, включающий длительные экстракции разбавленными солевыми растворами при pH 7,8—8,0, базируется на слабом РНКазном гидролизе исходных комплексов, что ведет к их отщеплению от ядерного скелета. Очень слабая РНКазная деградация идет, очевидно, даже в присутствии ингибитора РНКазы. Именно поэтому наш метод оказался не эффективным при работе с ядрами, лишенными заметной РНКаз-ной активности (например, клетки Не Ьа). Тогда, однако, удавалось извлечь 308-частицы, если экстрагировать ядра не при 0°, а при 30°. [c.219]

Плацентный ингибитор РНКазы. Плацентный ингибитор РНКазы производится различными фирмами, в том числе и фирмой Promega Biote In . [c.146]

Если опылять растения такой мужски стерильной линии пыльцой специально подобранной линии традиционной селекции, дающей при скрещивании гетерозисное потомство, то действительно можно без проблем получить гибридные семена, поскольку самоопыление материнских форм исключено. Однако само гетерозисное потомство получится мужски стерильным, что совсем нежелательно. Поэтому в качестве опылителя используют такую же линию, но несущую трансген barstar от той же бактерии Ba illus amyloliquefa iens. Этот ген кодирует образование фермента-ингибитора РНКаз, благодаря чему у гибридов восстанавливается фертильность пыльцы. Именно используя систему трансгенных линий с этими двумя бактериальными генами, удалось создать целый ряд коммерческих сортов рапса, которые представляют собой гетерозисные гибриды F1. [c.54]

После растворения сердцевин (осадок нужно ресуспендировать осторожно) в соответствующем объеме реакционной смеси для инициации синтеза РНК добавляют 1 М Mg b до конечной концентрации 13 мМ. Реакционную смесь инкубируют при 37°С при осторожном перемешивании. За ходом реакции можно следить, отбирая через каждый час небольшие аликвоты (по 10 мкл) реакционной смеси и измеряя включение РН]-иТР в кислотонерастворимый материал. Через 4—6 ч синтез РНК прекращается, что обусловлено истощением субстратов, а не инактивацией вирионной транскриптазы. Поэтому после 5 ч синтеза РНК сердцевины осаждают центрифугированием 20 мин при 30 000 g и 4°С, собирают супернатант, содержащий мРНК, сердцевины ресуспендируют в свежей реакционной смеси и проводят синтез РНК еще в течение 5 ч (следует отметить, что если в качестве ингибитора РНКазы используют бентонит или макалоид, осаждающиеся при центрифугировании вместе с вирусными сердцевинами, то их не нужно вносить в реакционную смесь при повторной постановке реакции). [c.214]

Наконец, в ряде с 1учаев в клетках плазмоцитом активность нуклеаз ниже, чем в селезенке или лимфоузлах иммунизированных животных, а в некоторых из них, по-видимому, даже содержится ингибитор РНКазы (см. Сидорова, 1974), что представляет известные преимущества при фракционировании клеток и выделении из них полирибосом. Все это сделало плазмоцитомы основным объектом при изучении механизмов синтеза и сборки полипептидных цепей иммуноглобулинов. [c.69]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология