Конкурентные ингибиторы использование для изучения

Как было отмечено выше, изонитрилы также могут выступать в качестве окислительных субстратов нитрогеназы [140—142]. Они восстанавливаются в углеводороды, содержащие атом углерода изонитрильной группы, и первичные амины, образующиеся из фрагмента R—N. Изонитрилы, так же как и азот, присоединяются к атомам переходных металлов концом молекулы. При восстановлении связанного метилизонитрила в качестве основного продукта шестиэлектронной реакции образуется метан, тогда как при восстановлении некоординированной молекулы изонитрила процесс идет в основном до диметиламина — продукта пятиэлектронной реакции. Такое сочетание свойств делает изонитрилы превосходным субстратом при изучении как биологических нитрогеназ, так и модельных систем. При использовании в качестве катализатора комплекса молибден — цистеин состава 1 1 основными продуктами восстановления изонитрила борогидридом натрия являются этилен и этан [137]. Как и в случае ацетиленовых субстратов, экспериментальные данные согласуются с каталитической активностью мономерных молибденовых комплексов. Восстановление слабо ингибируется молекулярным азотом и более эффективно подавляется окисью углерода. Опыты с N2 показали, что азот как ингибитор этой реакции восстанавливается до аммиака и что молекулы N2 и RN связываются одними и теми же центрами, по-видимому, атомами молибдена. Кроме того, азот и окись углерода — конкурентные ингибиторы восстановления изонитрилов нитрогеназой, что убедительно показывает наличие у молибдена свойств, необходимых для связывания и восстановления субстратов. На рис. 49 [c.318]

Помимо изученных стадий, в реакциях аспартатаминотранс-феразы наблюдали более быстрые спектральные изменения, кинетику которых нельзя было проанализировать при использовании методики температурного скачка. С целью замедления скорости этих реакций было исследовано взаимодействие с ферментом некоторых модифицированных субстратов. Аналог субстратов — Ь-а-метиласпарагиновая кислота — является конкурентным ингибитором аминокислотных субстратов. Она не способна образовывать альдимин с пиридоксальфосфатом на ферменте. Однако из-за наличия метильной группы в а-положении трансаминирование протекать не может. ВСинетическое изучение этой системы комбинированным методом остановленной струи — температурного скачка обнаружило, что реакция протекает в три стадии [c.182]

Изучение характера действия а-амилаз позволяет обнаружить многие детали возможного типа связывания субстрата, а также выяснить возможные механизмы ферментативного действия [22, 23]. У фермента из поджелудочной железы свиньи область связывания субстрата имеет, по-видимому, пять подцентров, каждый из которых способен удерживать один остаток глюкозы. Расщепление цепи происходит По связи между остатками, связанными со вторым и третьим подцентра-ми (пронумерованными от восстанавливающего конца молекулы субстрата). При использовании различных 0-замещенных субстратов было найдено, что наличие оксиэтильных групп во многих частях молекулы субстрата не мешает проявлению каталитического действия фермента. Однако при использовании субстратов, содержащих оксиэтильную группу при С-2, С-3 или С-6 того остатка глюкозы, у которого происходит замещение, ферментативное действие блокируется. Лактон мальто-бионовой кислоты (4-глюкозильное производное 5-глюконолактона) является мощным ингибитором конкурентного типа. Следовательно, можно думать, что субстрат этого фермента имеет конформацию полукресла в переходном состоянии или в состоянии, близком к переходному. Френч и др. [23] высказали предположение, что фермент прочно удерживает глюкозильный остаток за счет образования водородных связей с гидроксильными группами при С-3 и С-6, а затем вызывает вращение вокруг связи С-2—С-3 путем точного захвата и смещения гидроксильной группы при С-2 [стадия а в уравнении (7-12)]. Таким образом, конфор- [c.101]

Основой метода послужило наблюдение Ландштейнера [113 , показавшего, что вещества простого строения, сходные или идентичные детерминантной иммунологической группе антигена, могут образовывать комплекс с антителом и тем самым конкурентно тормозить реакцию между антигеном и антителом. Предполах ают, что чем ниже концентрация вещества, способная вызывать торможение реакции преципитации, тем ближе сродство между ним и детерминантной группой антигена. При изучении групповых веществ крови можно применять как метод, основанный на торможении реакции гемагглютинации под действием специфической антисыворотки, так и метод, основанный на торможении преципитации растворимых в воде групповых веществ специфической преципитирующей антисывороткой. Если о степени торможения преципитации судить по количеству азота антител [114, 115]. то можно достичь более высокой точности, чем при использовании реакции торможения гемагглютинации с применением серии разведений ингибитора. Оба метода дают ценную информацию о структуре групповых веществ, однако метод торможения гемагглютинации требует меньшего количества групповых веществ, чем метод с использованием реакции торможения преципитации. Эти два метода определения структуры детерминантных групп групповых веществ крови обсуждаются Кабатом [116[ и Уоткинс и Морганом [117]. [c.179]

Транспортный механизм ингибируется двумя классами молекул. Первая группа состоит из анионов с таким же специфическим парциальным объемом, как у 1 , и включает перхлорат (СЮ 4), перре-нат (КеО 4) и пертехнетат (ТсО ). Эти анионы конкурируют с иодидом за переносчик концентрируются щитовидной железой. Радиоизотоп ТсО 4 часто применяют для изучения транспорта иодида у человека. В качестве примера молекул второй группы можно привести линейный анион тиоцианата (8С-Н ), который конкурентно тормозит транспорт 1 , но не концентрируется железой. Ингибиторы транспорта 1 позволяют оценить быструю диффузию обменивающегося из щитовидной железы и применяются для диагностики нарушений его органификации. После разового введения блокирующей дозы ингибитора транспорта количество аккумулированного I (обычно измеряемого с использованием Ч), покидающего железу, обнаруживает прямую зависимость от величины несвязанной или неоргани-фицированной (неорганической) фракции. У лиц с неполной органификацией в ответ на введение СЮ 4 высвобождается большечем у здоровых людей. [c.189]