система плазмидная трансформация

На эффективность хромосомной трансформации не влияет система рестрикции реципиентной клетки, так как одноцепочечные фрагменты ДНК не являются субстратом для рестриктаз, а в образуемом с хромосомной ДНК дуплексе одна из нитей модифицирована. Уровень плазмидной трансформации для клеток с нативной системой рестрикции-модификации снижается, причем тем больше, чем больше мест действия данной рестриктазы имеется на плазмидной ДНК. Эти данные указывают на то, что, хотя в клетку входят индивидуальные цепи плазмидной ДШС, они затем могут формировать двухцепочечные участки (см. рис. 10.3, г), которые уже чувствительны к действию рестриктаз. [c.237]

Развитие методов генной инженерии привело к разработке системы трансформации для дрожжей, что способствовало более глубокому изучению у них механизма рекомбинации. Гибридные плазмиды, содержащие участки дрожжевой ДНК с известными маркерами, клонированные на векторе Е. соИ, могут быть введены в клетки дрожжей. При этом может происходить встраивание плазмидной ДНК в хозяйскую хромосому за счет рекомбинации между гомологичными последовательностями хромосомы и участка дрожжевой ДНК, входящего в состав плазмиды. При использовании плазмидной ДНК в замкнутой кольцевой форме удается с заметной частотой отобрать трансформированные дрожжевые клетки. В то же время введение двухцепочечного разрыва в дрожжевую [c.150]

Особенности механизма плазмидной трансформации компетентных клеток В. subtilis, в частности, необходимость мультимерных форм плазмид, затрудняют клонирование фрагментов ДНК в составе гибридных плазмид в данной системе. Несомненно, получать in vitro мульти-мерные молекулы гибридных плазмид гораздо сложнее, чем мономерные. Поэтому было разработано несколько вариантов трансформации компетентных клеток В. subtilis, позволяющих использовать мономерные плазмиды. [c.237]

При работе с бифункциональными векторами может возникать ситуация, когда размноженные в Е. oli гибридные молекулы ДНК будут подвергаться атаке системой рестрикции В. subtilis, что приведет к снижению уровня плазмидной трансформации бацилл и появлению делеционных вариантов плазмид. В таких случаях необходимо использовать штаммы Ba illus, мутантные по системе рестрикции. [c.268]

Многочисленные эксперименты показали, что в зависимости от штамма S. erevisiae и типа векторной плазмиды оптимальные условия трансформации как протопластов, так и обработанных солевыми растворами клеток могут существенно различаться. В целом следует отметить, что наивысшего уровня плазмидной трансформации уцается достичь в системе протопластов дрожжей. Поэтому в тех случаях, когда необходимо получить представительную клонотеку гибридных плазмид и выявить в ней редко встречающиеся последовательности, предпочитают использовать протопласты. Эффективность плазмидной трансформации с помощью солевых методов на 1-2 порядка ниже, зато эти методы гораздо проще и дают высоковоспроизводимые результаты. Колонии трансформантов образуются на поверхности агаризованной среды, что позволяет осуществлять их перепечатку и т. п. Поэтому, когда не требуется максимальный уровень трансформации (например, при введении индивидуальной плазмиды, когда достаточно выделить несколько клонов), предпочитают проводить обработку клеток дрожжей растворами полиэтиленгаиколя и солей лития. [c.293]

С разработкой Т1-плазмидной системы трансформации растений у исследователей появилась возможность введения в них чужеродных генов с целью синтеза различных ценных белковых продуктов. Вначале большинство генов, вводимых в растительные ютетки, находились под транскрипционным контролем сильного конститутивного 358-промотора вируса мозаики цветной капусты или немного менее сильного конститутивного промотора гена нопалинсинтазы, содержащегося в некоторьгх Т-ДНК. Однако для получения растений с новыми полезными признаками часто бывает необходимо, чтобы специфические белки синтезировались только в определенной тка- [c.403]

Растительные клетки не содержат собственных плазмид. В этом случае в качестве основы для конструирования трансформирующих векторных систем в принципе могут использоваться независимо реплицирующиеся геномы различных растительных вирусов. Такие системы были созданы на основе генома вируса мозаики цветной капусты. Однако все наиболее соверщенные системы векторов растений получены на основе плазмид из семейства необычных бактериальных плазмид, носящих название pTi. Эти плазмиды образуют природную систему трансформации, с помощью которой осуществляется перенос сегаентов плазмидной ДНК в геномы разнообразных двудольных растений. [c.273]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология