Быстрое двухступенчатое замораживание

Глава 9. Быстрое двухступенчатое замораживание [c.64]

Двухступенчатая компрессионная машина. В некоторых случаях, например для быстрого замораживания водоносных слоев грунта и ряда технологических процессов, требуются более низкие температуры (от —40 до —60° С) . В этом случае получается отношение - >6- 8. С увели- [c.240]

Индол триптофана характеризуется большим изменением момента перехода при возбуждении (до АО). Поэтому положение максимума его спектра флуоресценции сильно зависит от подвижности диполей среды и может варьировать до 30 нм. Так как т для 6 -состояния триптофана составляет единицы наносекунд, то по этим данным можно судить о структурных перестройках в белке в наносекунд-ном временном диапазоне. Было показано (Э. А. Бурштейн), что белки обладают характерными двухступенчатыми кривыми зависимости положения спектра флуоресценции от температуры в области от —90 до 0°С. Сдвиги полосы флуоресценции на 4-9 нм в области от —90 до —20°С и на 5-12 нм в области от —20 до 0° (рис. Х.6) свидетельствуют о замораживании движений в белковой матрице в наносекундном диапазоне. Высушенные белки не дают этих спектральных сдвигов, что подчеркивает роль воды как необходимого фактора для появления подвижности белка (см. 4 гл. IX). Очевидно, замораживание быстрой релаксационной подвижности белка имеет кооперативный характер, причем белковые структуры и связанная вода замерзают как единая микрофаза. [c.269]

Согласно двухфакторной гипотезе криоповреждений быстрое охлаждение в отличие от медленного приводит к значительному переохлаждению клеток, в результате чего внутриклеточная кристаллизация становится неминуемой. Из этого, на первый взгляд, следует вывод о необходимости снизить скорость охлаждения до такого значения, при котором переохлаждение вплоть до полного затвердевания препарата не приводит к образованию внутриклеточных кристаллов. Однако возможен и альтернативный подход— быстрое двухступенчатое замораживание с остановкой при промежуточной температуре. Хотя при таком режиме замораживания внутриклеточные кристаллы могут зарождаться уже на протяжении первого этапа, при определенным образом подобранной температуре остановки (Гл, см. рис. 29) их размеры еще не достигают критического (летального для клетки) значения. Образовавшиеся внутриклеточные кристаллы на первом этапе охлаждения не повреждают клетку, но являются потенциально опасными для нее. Более глубокое охлаждение на первом-этапе при отсутствии температурной остановки привело бы к дальнейшему увеличению размеров внутриклеточных кристаллов и, следовательно, к гибели клеток. [c.65]

Д. Г. Виттингам (1982) получил высокую (около 80%) выживаемость эмбрионов мыши, используя режим охлаждения — отогрева, который можно считать промежуточным между первым и вторым указанными выше режимами. Он заключается в следующем образец охлаждается со скоростью 0,5—1°С/мин до температуры —40°С, а затем сразу погружается в жидкий азот. В отличие от первого, самого длительного режима замораживания этот способ для достижения высокой выживаемости требует, как и в случае быстрого двухступенчатого замораживания, быстрого отогрева. Все три описанные выше модификации способа низкотемпературного консервирования эмбрионов мыши практически отличаются друг от друга только режимом охлаждения. [c.72]

В последнее время для низкотемпературного консервирования биологических суспензий успешно применяют так называемые быстрые двухступенчатые программы замораживания. Они заключаются в следующем первоначально консервируемые образцы замораживают до умеренно низкой температуры —(25— 35)°С, затем их выдерживают при этой температуре определенное время, а после этого быстро охлаждают погружением в жидкий азот. В работе Дж. Фарранта и сотрудников (1974), например, показано что если замораживание суспензии тканевых лимфоцитов под защитой 10%-нога диметилсульфоксида до температуры жидкого азота проводить быстро, но ступенчато, выдерживая клетки при температуре —26°С в течение 10—15 мин, то после отогрева они практически полностью сохраняют функ- [c.64]

В Америке и Канаде до настоящего времени практикуют замораживание битой птицы в смеси метанола с водой или в растворе гликоля. Для этого тушки плотно упаковывают в фольгу. При быстром замораживании в жидкости (со скоростью 3 см]ч в поверхностных слоях) под кожей птицы образуются мелкие кристаллы льда, продукт имеет приятный товарный вид. Для промораживания более глубоких слоев ткани замораживание в жидкости теряет свои преимущества. Поэтому птицу обычно домораживают до готовности в потоке холодного воздуха. Подобного рода двухступенчатая комплексная установка смонтирована на Азовском рыбокомбинате для замораживания бычка (см., главу Ш). [c.48]

Дж. Фаррант и сотрудники (1976, 1977) с помощью двухступенчатой методики замораживания попытались установить взаимосвязь между выживаемостью клеток культуры ткани китайского хомячка и содержанием льда внутри клеток. О наличии льда судили косвенно по чувствительности клеток к медленному отогреву—и более прямым методом с помощью электронной микроскопии. Оказалось, что быстро замороженные до —196°С (режим а—б—в—з) клетки лишь незначительно изменяли раз- [c.64]

С. М. Виладсен (1977) показал, что эмбрионы коровы выживают, если их охладить до —30°С, выдержать при этой температуре 30 мин (или очень медленно охладить до —33°С), а затем перенести в жидкий азот. В 1980 г. М. Г. Вуд и соавторы установили, что эмбрионы мыши выживают после быстрого охлаждения до —(20—25) "С, 15-минутной выдержки при этой температуре и последующего погружения образцов в жидкий азот. При двухступенчатых программах замораживания эффективен уже не медленный, а быстрый отогрев (со скоростью 300—500°С/мин), т. е. отогрев на водяной бане при температуре +37°С. Как было указано ранее, при таком режиме замораживания по крайней мере в части клеток образуются внутриклеточные кристаллы льда. Однако температурная остановка предотвращает их летальное воздействие при последующем охлаждении. [c.72]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология