Электрофокусирование в градиенте плотности

В настоящей главе рассматривается применение электрофокусирования на синтетических амфолитах-носителях, приводятся основные сведения о методе, даются подробные указания относительно фракционирования белков на препаративном уровне при стабилизации градиента pH с помощью градиента плотности, приводится описание аналитического фракционирования в полиакриламидном геле [c.297]

Градиент плотности широко применяется для стабилизации среды при электрофокусировании. По завершении опыта такой раствор можно собрать на коллектор для последующего анализа. Поэтому такое разделение может применяться как для аналитических, так и для препаративных целей. [c.302]

Существенным недостатком электрофокусирования в градиенте плотности является трудность детектирования амфолитов-образцов в присутствии амфолитов-носителей и сахарозы. Наиболее удобным методом обнаружения служит определение ферментативной активности. Правда, амфолиты-носители могут [c.313]

Рис. 4. Контрольное электрофокусирование в градиенте плотности на колонке объемом 110 мл в отсутствие образца.

Белки, подвергавшиеся электрофокусированию в градиенте плотности, перечислены в табл. 1. По-видимому, благодаря легкому детектированию наиболее подробно изучены окрашенные белки, включая металлопорфирины. Как уже отмечалось [c.314]

Для фракционирования ферментов в градиенте плотности Веллер [60] использовал чрезвычайно простой по конструкции прибор, в основу которого положена ячейка, приведенная на рис. 7. Электрофокусирование проводят в правой части объемом II мл. Непосредственно под рабочим раствором и в левом, уравновешивающем плече находится катодный электролит, содержащий 40% сахарозы. Для заполнения ячейки 14 мл катодного электролита помещают в и-образную трубку, а затем в рабочей камере последовательно наслаивают И фракций по мл, причем разница при замене концентрированного раствора разбавленным составляет 0,1 мл. Катод погружают в левую камеру, а анод — в правую предварительно поверх рабочего раствора наслаивают 1— [c.318]

Ряд вопросов постановки эксперимента при электрофокусировании в градиенте плотности, такие, как выбор температуры, концентрации и рН-диапазона амфолитов-носителей, сохраняют свое значение и при электрофокусировании в геле. Другие аспекты, свойственные только этому методу, требуют специального разбора. [c.327]

ЭЛЕКТРОФОКУСИРОВАНИЕ В ГРАДИЕНТАХ ПЛОТНОСТИ [c.131]

Изоэлектрическое фокусирование [42 — 45] в линейном градиенте pH позволяет разделить белки, характеризующиеся различными изоэлектрическими точками. Для создания градиента используют носители с цвнттер-ионными свойствами — алифатические полиаминополикарбоновые кислоты, имеющие М 200 — 700. При движении в градиенте pH суммарный заряд белка постоянно меняется, и в области pH, близких к изоэлектрической точке, становится равным нулю. Соответствующий белок фокусируется , образуя узкую зону. При препаративном фокусировании в колонке стабилизация градиента pH осуществляется с помощью градиента плотности используемого буферного раствора, однако чаще работают с плоскими слоями полиакриламидного или гранулированного геля. Опубликовано краткое сообщение о непрерьтном электрофокусировании без носителя [46]. Эффективность электрофокусирования высока. Так, возможно, например, разделить белки, различающиеся по ИЭТ лишь на 0,01 единицы pH. При разделении сыворотки образуется более 40 белковых полос. [c.351]

В приборе для электрофокусирования в градиенте плотности должен быть предусмотрен отвод образующихся газов из электродного пространства без нарушения градиента. Наиболее простым прибором такого типа является О-образная трубка. Одно плечо трубки заполнено раствором с градиентом плотности, здесь же в растворе помещается один из электродов, второй электрод находится в другом плече с раствором, уравновешивающим содержимое основного плеча. Более сложный прибор Вестерберга и Свенссона [24] состоит из двух концентрически расположенных отделений вспомогательного — внутреннего и рабочего — наружного. Поскольку для электрофокусирования в градиенте [c.302]

Рис. 2. Схема колонки конструкции Вестерберга и Свенссона для электрофокусирования в градиенте плотности.

Гис. 5. Электрофокусирование гемоглобина человека в градиенте плотности на колонке Вестерберга и Свенссона (время опыта 65 ч) [1]. [c.315]

Неоднократно с помощью электрофокусирования в градиенте плотности или в геле удавалось обнаружить ббльшую степень гетерогенности по сравнению с тем4 что было известно ранее [c.339]

Описание его действия приведено в тексте. У —фосфорная кислота 2 —градиенты pH и плотности (амфолит-носитель + сахароза) 3 электрофокусированные белки 4 — триэтаноламин 5 —клапан б — сливной кран. [c.241]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология