Сефадексы и другие гранулированные гели

Справочник содержит сведения о различных сорбентах и хроматографических носителях, таких как ионообменные смолы, силикагель, окись алюминия, молекулярные сита, активные угли, целлюлозы, сефадексы и другие гранулированные гели, твердые носители для газо-жидкостной хроматографии. В книге обобщены данные о промышленных образцах материалов, выпускаемых в СССР, США, Англии, Франции, Швейцарии Японии, ФРГ, ГДР, Венгрии, Чехословакии и других странах (отражена продукция примерно 200 фирм). Вместе с перечнем марок сорбентов и носителей приведены основные сведения, необходимые для наиболее рационального использования. [c.2]

Сефадексы и другие гранулированные гели [c.160]

Эккере [33] применил этот принцип к гель-хроматографии и предложил для очень пористых гелей механизм ограниченной диффузии. (В отличие от других типов геля для сефадекса 0-200 коэффициент распределения между фазой геля и элюентом в равновесном состоянии значительно отличался от значения Кв., определенного на колонке.) Согласно новому принципу, объемы выхода макромолекул (белков) с гранулированного геля агара или сефадекса 0-200 определяются скоростью их диффузии в фазу геля. Вследствие медленной диффузии крупные молекулы проникают в гель не столь глубоко, как мелкие, н поэтому вымываются с колонки гораздо раньше. Вновь применив уравнение Ренкина [32], Эккере связал величину /(( , характеризующую поведение макромолекул в геле, с величиной г Я, где г — радиус частиц белка [c.120]

Методы с применением тонких слоев гранулированных гелей как поддерживающей среды сохраняют все преимущества описанного выше ИЭФ в геле и, кроме того, обладают рядом других полезных качеств. Так, в гранулированных гелях не возникают артефакты, связанные с полимеризацией, а эффект молекулярного сита не влияет на процесс фокусирования. Поэтому в таких гелях удается легко разделять и белки с большой молекулярной массой. Есть примеры использования для тонкослойного ИЭФ сефадексов 0-75 и 0-200, а также биогеля Р 60 [288, 1051, 1052]. [c.160]

Кроме очевидного удобства внесения препарата (в любой точке градиента pH), обнаружения и элюции белков, что обусловлено горизонтальным расположением и открытой поверхностью геля, подчеркнем относительную нечувствительность рассматриваемого метода к возможности выпадения в осадок некоторых белков вблизи их изоэлектрической точки. В описанной системе эти осадки будут уходить на дно слоя геля, освобождая его сечение для свободного протекания тока и миграции других белков. При извлечении сефадекса из секции осадок можно собрать вместе с гелем, перенести в колонку и в ходе элюции снова растворить, использовав для этого подходящий буфер или солевой раствор. Возможность примириться с выпадением осадков особенно ценна на ранних стадиях очистки, когда очищаемый белок может составлять лишь малую долю всей белковой смеси. Допуская выпадение в осадок балластных белков, можно значительно увеличить загрузку геля н повысить выход нужного белка. Практика показывает, что для узких диапазонов pH загрузку гранулированного геля при ИЭФ можно довести в случае одного основного белка до 2—4 мг на 1 мл объема геля, а для смеси белков — до 5—10 мг/мл. Прн объеме геля в 80 мл это составляет внушительную величину общей загрузки — до 800 мг белковой смеси. [c.66]

Другой метод предложил Радола (Radola, 1974). В нем применяется очень простой прибор, а для стабилизации среды используются гранулированные гели, например сефадекс G-75, очищенный от заряженных примесей, которые могут помешать образованию градиента pH. Пластинку для ИЭФ приготовляют из тонкого слоя набухшего сефадекса, испаряя воду до тех пор, пока гель не приобретет нужную консистенцию. [c.136]

Отличительная особенность метода состоит в том, что ИЭФ-белков происходит в водном растворе амфолитов, находящемся между гранулами набухшего сефадекса или другого инертного гидрофильного и гранулированного геля. Назначение геля состоит в подавлении возникновения конвекционных токов в жидкости. Вместе с тем, он достаточно мелкопорист для того, чтобы-внутренний объем гранул оставался недоступным для белков. Относительно толстый, но ровный и открытый слой такого гранулированного геля располагается горизонтально. ИЭФ можно-производить с помощью приборов для электрофореза в горизонтальных пластинах, например типа Мультифор . [c.61]

Все применяемые в гель-хроматографии наполнители колонок традиционно делят на мягкие, полужесткие и жесткие гели [101]. Емкость геля может быть охарактеризована отношением У /У , которое лежит в диапазоне от 0,5 для жестких гелей до 2-3 для мягких гелей. Для мягких гелей характерна, с одной стороны, высокая эффективность и емкость при низких скоростях потока, с другой — высокая степень набухаемости в водных средах и увеличение объема пор при набухании. Соответственно повышение скорости подвижной фазы вызывает деформацию мяг-Ю1Х гелей. Они сжимаются, снижается их емкость. Из коммерческих мягких гелей для гель-фильтрации чаще всего применяют декстрановые гели, названные сефадек-сами. Сефадексы — гранулированные поперечно-сшитые декстраны (полисахариды), имеющие в набухшем состоянии гелевую структуру, обладают сильными гидрофильными свойствами. Неионообменные сефадексы содержат все же небольшое количество гидроксильных групп, определяющих адсорбционную емкость сефадексов порядка [c.209]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология