Элюент при использовании обращенной фаз

Рассмотрение принципа действия и особенностей использования аминокислотного анализатора начнем с того, что сформулируем представления об анализируемом препарате. Для наиболее интересного случая — анализа состава белка — им является смесь 20 природных аминокислот. Все компоненты этой смеси представляют одинаковый интерес, подлежат полному разделению и количественной оценке. Интервал. молекулярных масс простирается ог 75 (Gly) до 204 (Тгр), диапазон значений р1 — от 2,97 (Glu) до 10,76 (Arg). Различия в стеиени гидрофобности тоже выражены сильно от гидрофильных дикарбоновых и оксикислот до весьма гидрофобных, несущих довольно протял<енные алифатические и ароматические боковые группы. Заметим сразу, что такие различия должны облегчить задачу хроматографического разделенпя, но вряд лн позволят обойтись без ступенчатой смены элюентов. В обычных условиях хроматографии все алшнокислоты достаточно устойчивы, но следует обратить внимание с этой точки зрения и на предшествующий хроматографии этап исчерпывающего гидролиза белков и пептидов (от него будут зависеть и результаты анализа). Агрегация аминокислот маловероятна, за исключением возможности окисления цистеинов до цистинов. Не-специфическая сорбция за счет гидрофобных взаимодействий с материалом матрицы безусловно возможна, но здесь она будет использоваться в интересах фракционирования. [c.515]

На рис. 12 показана хроматограмма 23 аминокислот с полным разделением пиков. Использование градиентной элюции позволило добиться равномерного обострения пиков на всей хроматограмме, что существенно сократило время анализа по сравнению со стандартным методом. Этот успех тем более значителен, что смола Дауэкс 50X12 имеет большие удерживаемые объемы по сравнению с Дауэкс 50X8 (рис. 2), и поэтому при обычной ступенчатой элюции время анализа должно быть больше, чем у Спекмапа, Штейна и Мура [6]. С другой стороны, если одновременно с увеличением будет увеличиваться также и АК, то, казалось бы, увеличение числа поперечных связей не должно влиять на время анализа t при заданном Кв. Тем не менее даже при сохранении постоянства отношения К / АК увеличение степени сшитости ионообменной смолы нецелесообразно, поскольку при этом уменьшается коэффициент диффузии (Д,), что в соответствии с уравнением (30) должно привести к увеличению времени анализа. На последнее обстоятельство обратили внимание авторы работы [29], показав, что уменьшение коэффициентов диффузии (О,) требует для сохранения необходимой для разрешения ширины полос уменьшения диаметра частиц и повышения температуры колонки. Тем не менее Пье и Моррис пошли на применение сильносшитой смолы, так как хотели предотвратить сжатие смолы при использовании элюентов с большой концентрацией ионов натрия ( 2,4 п.). Использование градиентной элюции позволило упростить аппарат не только по сравнению со стандартной методикой Штейна и Мура, но и с аппаратом, использованным Гамильтоном. [c.162]

Использование буферных растворов с фиксированным pH (обычно 3,25 и 4,25 для кислых и нейтральных аминокислот и 5,28 для основных аминокислот) имеет определенные недостатки. На разделение за д рачивается много времени, поскольку создание оптимальных условий для разрешения аминокислот, которые элюируются непосредственно друг за другом, приводит к длительным промежуткам времени между пиками других аминокислот. При фиксированном режиме колонки и постоянной скорости потока элюента качество разрешения смежных амк. нокислот и общее время анализа являются функцией pH буфера и его изменения в процессе разделения. Поэтому следует обратить внимание на методы получения заданного непрерывного изменения pH вте кающего буферного раствора. [c.293]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология