Маркерные ферменты органелл

Таблица 12 Маркерные ферменты клеточных органелл

Рис. 8-70. Электронная микрофотография двух срезов клетки, окрашенной для выявления кислой фосфатазы-маркерного фермента лизосом. Мембранные органеллы большего размера, содержащие электроноплотные прегргнитаты фосфата свинца, представляют собой лизосомы, а их разнообразная морфология отражает изменения количества и природы расщепляемых веществ. На верхнем фото показаны стрелками два маленьких пузырька, которые, вероятно, переносят гггдролазьг из аппарата Г ольджи. Нреципитаты образуются, когда ткань, зафиксированную глутаровым альдегидом (чтобы сохранить локализацию фермента) инкубируют с субстратом фосфатазы в присутствии ионов свинца. (С любезного

Определение активности маркерных ферментов. Фермент может служить маркером определенного типа мембран, если он прочно связан с мембраной, не инактивируется при выделении данной фракции и локализуется исключительно в данных органеллах. Хотя не все эти требования выполняются для большинства маркерных ферментов, изучение их поведения в процессе получения конкретной фракции позволяет довольно точно установить принадлежность выделенных мембран. [c.67]

Следует указать, что количественная характеристика внутриклеточных органелл зачастую затруднена. Это обусловлено тем, что изопикнические точки различных органелл могут перекрываться, и фракционирование при одной и той же скорости седиментации приводит к оседанию фрагментов нескольких органелл. Трудности идентификации могут быть также связаны с тем, что различные ткани имеют разные маркеры для одних и тех же органелл. Например, маркерные ферменты одного типа мембран могут проявлять активность и в других типах мембран, например, 5 -нуклео-тидазой в основном обогащены плазматические мембраны, однако эта активность присутствует также в аппарате Гольджи и эндоплазматической сети. [c.236]

При выделении органелл и последующей работе с ними опираются на маркерные структ)фы, топологически привязанные или ассоциирующиеся с ними Чаще всего такими маркерами являются ферменты (таблица 12) [c.135]

TOB контролируют на каждом этапе выделения и разделения мембран в исходном гомогенате и в каждой фракции с целью определения стадии осаждения и выхода исследуемых мембранных структур, а также потерь мембранных фракций. Гомогенность выделенного препарата мембран анализируют на основании увеличения активности маркерного фермента (-ов) в нем по сравнению с исходным гомогенатом клеток. Часто используют не один, а два-три мембранных маркера. Однако необходимо помнить, что и мембраны одного типа способны проявлять гетерогенность, связанную с асимметрией белкового, липидного и углеводного состава мембран, в результате чего фермент может находиться в латентной форме из-за нарушения ориентации мембраны и недоступности активного центра для субстрата, например, в обращенных мембранных везикулах. Наиболее легко из внзпрри-клеточных органелл идентифицируют митохондрии и ядра, затем — лизосомы и пероксисомы, наиболее трудно — плазматические мембраны и мембраны эндоплазматической сети. Сложность разделения последних обусловлена близостью величин диапазона плотностей этих структур, поэтому разделение по скорости седиментации осуществляется в том случае, если плазматические мембраны представлены крупными фрагментами. [c.223]

Для микросом скелетных мышц, происходящих в основном из саркоплазматического ретикулума, наиболее удовлетворительным маркером является Са + — АТФ-аза. Для некоторых тканей вообще не найдено удовлетворительногд маркера микросом для неисчерченных мышц, для культуры эмбриональных фибробластов крысы и др. Наиболее легко из внутриклеточных органелл идентифицируются митохондрии и ядра. Для этих органелл установлено, что их изопикнические точки относительно постоянны в различных тканях и выше, чем плазматических мембран. Кроме того, мембраны митохондрий различных тканей имеют одни и те же маркерные ферменты. [c.237]

Примеси каких органелл присутствуют во фракции митохондрий Как это установить Чем обусловлено присутствие этих примесей 2. Чем могут быть обусловлены артефакты при определении маркерных ферментов митохондрий 3. На чем основано определение активности цито-хромоксидазы, сукцинатдегидрогеназы, моноаминоксидазы Какую роль выполняют этн ферменты в мембранах мнтохондрнй [c.253]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология