Маркеры для определения величин

При разделении нуклеиновых кислот используют те же методы, что и при фракционировании белков, однако имеются ограничения, обусловленные большим диапазоном величин молекулярной массы (2-10 —Ы0 ° Да), отклонениями от глобулярной формы, различиями в четвертичной структуре (двухнитевые, однонитевые, кольцевые), значительным отрицательным зарядом в нейтральной области pH. Поэтому методы гель-фильтрации и ионообменной хроматографии не получили широкого распространения при фракционировании нуклеиновых кислот и значительно уступают ультрацентрифугированию и электрофоретическому разделению в геле агарозы, полиакриламидном геле или их смеси. Поскольку величина отрицательного заряда нуклеиновых кислот и продуктов их расщепления мало зависит от pH, а отношение заряда к молекулярной массе сохраняется практически неизменным, разделение нуклеиновых кислот при электрофорезе определяется не их зарядом, а размером молекул. При наличии маркеров с известной молекулярной массой возможно определение молекулярной массы препаратов нуклеиновых кислот и их фрагментов. [c.171]

Скорость переноса хромосомных маркеров зависит от температуры, но в стандартных условиях скрещивания является величиной постоянной. Каждый генетический детерминант донора попадает в реципиентную клетку через определенное время после начала скрещивания. [c.186]

Это соотношение подсказывает простой способ определения константы седиментации исследуемых молекул путем сопоставления их с маркером — веществом такой же природы (белок, ДНК или РНК), но с известным значением Sjo.w. Оба эти вещества надо, предварительно смешав, разделить зонально-скоростным центрифугированием в изокинетическом градиенте плотности, а затем по соотношению расстояний, пройденных их зонами от мениска, рассчитать искомую величину S2o,w = S2o, m(///m). Буквой м обозначен маркерный препарат. Для цилиндрической части пробирки отношение расстояний от мениска можно заменить отношением соответствующих им объемов. Опорожнять пробирку в этом случае удобнее, начиная с мениска (см. ниже). Объемы нередко заменяют числом капель. При этом следует проявлять осторожность, так как объем падающей в коллектор капли зависит от поверхностного натяжения и плотности жидкости, а они неодинаковы на разных участках градиента плотности. [c.205]

Доказательство наличия отбора. Как отмечалось, оценки притока генов, полученные для генов, испытывающих в африканских популящ1ях давление отбора, можцо использовать для определения того, изменились ли интенсивность и направление отбора в новом месте обитания африканских негров. В нескольких работах были получены более высокие оценки притока генов белых для трех генетических маркеров гена серповидноклеточности (Hb S), аллеля африканского варианта G6PD (GD ) и аллеля гаптоглобина НрЧ Как отмечалось в разд. 6.2, на аллели Hb S и Gd в Африке действует отбор, связанный с тропической малярией гаптоглобин является белком, участвующим в переносе гемоглобина. Определенные величины притока генов для этих аллелей были достоверно выше, чем соответствующие оценки, полученные на основе частот систем групп крови Dufiy и АВО они варьировали приблизительно от 0,49 (Gd , Сиэтл, северо-запад США) до 0,17 (GD , Мемфис, юг США). Эти результаты указывают на то, что в Соединенных Штатах-стране, где малярии нет,-против этих генов идет отбор. Из-за отсутствия необходимых данных интенсивность этого отбора не может быть точно определена. Для доказательства существования отбора в отношении генов, для которых [c.366]

Подготовку колонки и проведение процесса хроматографии см. на с. 102. Все операции можно осуществлять при комнатной температуре. После определения свободного объема Vo через колонку последовательно пропускают растворы соответствующих белков- маркеров (по 3—4 мг в объеме 0,5—1 мл) . Белки удобно наносить последовательно в порядке уменьшения их молекулярной массы с интервалом, зависящим от размера колонки. Для колонки 1,5x50 см он равен 20 мл (объем собираемого элюата между нанесением отдельных образцов составляет 20 мл). Во время нанесения белков колонку перекрывают. Элюат, вытекающий из колонки со скоростью 15-20 мл/ч, собирают небольшими порциями (1—3 мл). Строят профиль элюции отдельных белковых фракций (с. 108). Затем строят график зависимости отношения объема выхода белка к свободному объему колонки Ve/Vo или величины Kav от логарифма молекулярной массы белков. [c.117]

С помощью АСОИЗ проводят предварительную (рутинную) обработку изображения и вычисляют поля каких-либо величин (фотопроводимости, шероховатости, показателей преломления и т.п.), связанных с оптикофизическими характеристиками объекта функциональными или корреляционными зависимостями. Основные задачи рутинной обработки, решаемые в реальном масштабе времени с помощью встроенных ЛСМ процессоров и блоков постоянной памяти измерение размеров и координат объектов зрения (обычно с помощью маркера, перемещаемого оператором), вывод на экран яркостных профилей вдоль любой строки изображения, выделение на изображении линий равного уровня яркости (изофат), вывод гистофамм распределения яркостей по элементам изображения, выполнение арифметических операций под двумя изображениями (одно из которых обычно принимается эталонным), двухмерное дифференцирование и корреляционная обработка изображений, их цифровая пространственная фильтрация и т.д. Обычно эти операции выполняются в интерактивном режиме по воле оператора. Задачи вычисления полей физических величин, распознавания образов (определение типа, классификация дефектов) и тому подобное решаются с помощью персональной ЭВМ, связанной с ЛСМ. [c.519]

Величины, полученные различными авторами, согласуются по порядку. Постоянные скорости, определенные Маркером и сотрудниками также качественно согласуются с величинами, помещенными в таблице. В пределах точности экспериментальных данных графики зависимостей lgii/2 и lg(l/ii/2) от А Г для образцов Z>66 и Z)76 являются линейными, но несколько различаются по наклону. [c.232]

Его разрешающая способность на несколько порядков выше разрешающей способности методов обнаружения генных мутаций in vivo, так как в данном случае объектом (единицей) экспериментального изучения является не особь, а отдельная клетка. Кроме того, мутанты можно клонировать и подвергать всевозможным биохимическим исследованиям. Однако на практике этот метод пока встречается с определенными трудностями. Так, например, селективные системы созданы только для очень небольшого числа биохимических маркеров некоторые вариантные клетки могут возникать не в результате мутаций, а по каким-то иным причинам экстраполяция же величин, полученных для очень искусственных условий эксперимента in vitro на ткани живого организма, всегда представляет трудную задачу. [c.234]

Оценка притока генов белой расы в популяцию американских негров. Американские негры произошли от рабов, завезенных в США из Западной Африки (Нигерии, Сенегала, Гамбии, Кот-Дивуара, Либерии и др.). В этих предковых популяциях частоты большинства генетических маркеров обнаруживают ярко выраженную изменчивость. То же самое справедливо и для белого населения Америки, которое произошло от иммигрантов из различных областей Северной, Западной, Центральной и Южной Европы. Возможно, что гены, внесенные в генофонд американских негров, не являются несмещенной и случайной выборкой генов всего белого населения США. Некоторые группы белого населения могли принимать более активное участие в аутбри-динге по сравнению с другими группами. Все же тщательное выявление возможных отклонений способствует определению правильного порядка величины притока генов [1857]. [c.366]

TOB контролируют на каждом этапе выделения и разделения мембран в исходном гомогенате и в каждой фракции с целью определения стадии осаждения и выхода исследуемых мембранных структур, а также потерь мембранных фракций. Гомогенность выделенного препарата мембран анализируют на основании увеличения активности маркерного фермента (-ов) в нем по сравнению с исходным гомогенатом клеток. Часто используют не один, а два-три мембранных маркера. Однако необходимо помнить, что и мембраны одного типа способны проявлять гетерогенность, связанную с асимметрией белкового, липидного и углеводного состава мембран, в результате чего фермент может находиться в латентной форме из-за нарушения ориентации мембраны и недоступности активного центра для субстрата, например, в обращенных мембранных везикулах. Наиболее легко из внзпрри-клеточных органелл идентифицируют митохондрии и ядра, затем — лизосомы и пероксисомы, наиболее трудно — плазматические мембраны и мембраны эндоплазматической сети. Сложность разделения последних обусловлена близостью величин диапазона плотностей этих структур, поэтому разделение по скорости седиментации осуществляется в том случае, если плазматические мембраны представлены крупными фрагментами. [c.223]

Анализ полученных результатов. При определении молекулярных масс методом гель-фильтрации для конкретной хроматографической колонки предварительно строят градуировочный график. На оси абсцисс откладывают объем элюирования или связанные с ним параметры, а на оси ординат молекулярную массу (в логарифмической шкале) известных белков. Наборы белков-маркеров фирмы РЬагтас1а включают рибонуклеа-зу М 13 700), химотрипсиноген А М 25 000), овальбумин (УИ 43 000), альбумин (М 67 000) или альдолазу М 158 000), каталазу М 232 000), ферритин (М 440 000), тироглобулин (М 669000). Часто в расчетах используют величину Ус, однако более удобен коэффициент распределения Kav между жидкой фазой и фазой геля, поскольку этот параметр не зависит от объема колонки [c.24]

Определение чистоты и качества иолученного препарата митохондрий. Определение чистоты и качества полученной фракции митохондрий можно проводить различными путями 1) по величинам дыхательного контроля по Чансу - Вилльямсу (ДК) и отношения АДФ/0 2) путем определения ферментативной активности фракции (по наличию активности ферментов-маркеров митохондрий и отсутствию активности ферментов-маркеров, свидетельствующих о наличии немитохондриальных компонентов) [c.17]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология