Субстраты фосфатаз

Рис. 92. Ингибирование субстратом гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой

На рис. 93 проведен подобный анализ экспериментальных данных для гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой (см. рис. 92) [9]. В этом случае экспериментальные данные можно привести к линейному виду, полагая п = 3. Таким образом, неактивный фермент-субстратный комплекс в реакции гидролиза монофенилфосфата имеет состав Е54. Наконец, из отрезков, отсекаемых полученной прямой (рис. 93) на координатных осях, можно определить значения Кв и V, характеризующие ферментативную реакцию, не осложненную ингибированием при избытке субстрата. [c.239]

Рис. 93. Итеративная линеаризация экспериментальных данных [9] по кинетике гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой, в условиях ингибирования ферментативной реакции (6.90) субстратом с образованием неактивного комплекса Е5

При изучении кинетики гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой, было найдено, что субстрат [c.119]

Влияние концентрации субстрата на скорость гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой. Условия опыта pH 10,0 37° С [Е о = 410-з мг/мл [c.120]

Рис. 59. Ингибирование субстратом гидролиза монофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой. Пунктирная кривая является теоретической при условии образования неактивного фермент-субстратного комплекса состава ЕЗа

Вещество, с которым реагирует фермент, называется его субстратом, например в случае фосфатаз субстратом является группа R. [c.509]

ФЕРМЕНТНЫЕ СУБСТРАТЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ФОСФАТАЗ [c.642]

Принципиальная идея здесь заключается в том, что ферментный субстрат следует превратить в окрашенный продукт, В случае щелочной фосфатазы обычно используют п-нитрофенилфосфат или аналогичный ароматический фосфат [c.597]

Третий общий способ сопряжения гидролиза АТР с последовательностью синтетических реакций состоит в переносе концевой фосфатной группы от АТР к одной из гидроксильных групп субстрата. Затем, после того как субстрат принял участие в синтетической реакции, фосфат удаляется действием фосфатазы. Наглядным примером может служить активация сульфата [уравнение (11-4)] [4]. [c.463]

Известно несколько типов протеинкиназ, активируемых различными эффекторами. Субстраты протеинкиназ —огромное количество белков, фосфорилирование которых приводит к изменению их активности. Более того, обнаружены протеинфосфатазы, которые, осуществляя гидролиз фосфатной группы, возвращают белковую молекулу в исходное состояние. Во многих случаях мишенью действия киназ являются другие киназы, которые фосфорилируют фосфатазы, в свою очередь регулируя их функцию. Таким образом, регуляция метаболизма имеет каскадный характер. [c.318]

Если металл участвует в переносе атома или группы атомов, то необходимо лигандное замещение. Активные промежуточные соединения в реакциях замещения простых хелатных соединений металлов предположительно имеют свободные координационные связи или искаженную координационную сферу. По-видимому, такие структуры фигурируют в Со(П)-карбоангидразе, карбоксипептидазе и фосфатазе до присоединения субстрата. Особая активность и в этих ферментах определяется тем, что их комплексы деформируются легче, чем комплексы остальных металлов первого переходного ряда. [c.416]

Добавляют второе антитело, которое специфически связывается с первым антителом и не взаимодействует с маркерной молекулой (рис. 9.1, В). К этому антителу присоединен фермент (например, шелочная фосфатаза, пероксидаза или уреаза), катализирующий превращение неокрашенного субстрата в ок- [c.183]

В зависимости от природы гидролизуемых субстратов фосфатазы разделяют на три подгруппы —гид р о л а з ы фосфо-моноэфиров, гидролазы фосфодиэфиров и гидролазы трифосфо моноэфиро в. [c.67]

Рис. 8-70. Электронная микрофотография двух срезов клетки, окрашенной для выявления кислой фосфатазы-маркерного фермента лизосом. Мембранные органеллы большего размера, содержащие электроноплотные прегргнитаты фосфата свинца, представляют собой лизосомы, а их разнообразная морфология отражает изменения количества и природы расщепляемых веществ. На верхнем фото показаны стрелками два маленьких пузырька, которые, вероятно, переносят гггдролазьг из аппарата Г ольджи. Нреципитаты образуются, когда ткань, зафиксированную глутаровым альдегидом (чтобы сохранить локализацию фермента) инкубируют с субстратом фосфатазы в присутствии ионов свинца. (С любезного

Ферменты, используемые в ИФА в качестве маркеров, должны отвечать ряду требований иметь высокую активность и стабильность в условиях анализа чувствительный и простой метод определения продуктов или субстратов ферментативной реакции сохранять активность и стабильность после конъюгирования с антителами быть доступным при высокой степени чистоты. Непременным условием является отсутствие фермента и его ингибиторов в исследуемых биологических жидкостях. Всем этим требованиям отвечают наиболее часто применяемые в ИФА пероксидаза и щелочная фосфатаза. [c.317]

Для щелочной фосфатазы 4-нитрофенилфосфат 10 мг субстрата растворяют в 10 мл буфера, который готовят следующим образом 97 мл диэтаноламина смешивают с 800 мл воды, добавляют 0,2 г NaNs, 0,1 г Mg l2-6H20 и доводят pH до 9,8 с помощью 1 н. раствора НС1 общий объем доводят до 1 л и хранят в темноте при комнатной температуре. [c.319]

Субстраты для выбранного фермента Любой фермент(например лактатд и ги д рогеназа, креатинкеназа, щелочная фосфатаза) Реагент может быть очень чувствительным и спечествительным [c.73]

Большое число Ф. п] ставлены неспецифич. ферментами, способными расщеплять разнообразные соед. (моноэфиры фосфорной и тиофосфорной к-т, сфамиды и полифосфаты). Нек-рые Ф., напр., глюкозо-6-фосфатаза и фруктозо-бис-фосфатаза проявляют избират. специфичность к субстрату. [c.125]

Бром-З-индолилфосфат натрия можно использовать в гистохимии в качестве субстрата для определения фосфатаз биологических тканей ]. Синтез этого соединения в литературе не описан. [c.36]

Наиболее часто в качестве меток используют два фермента —щелочную фосфатазу (ЩФ) и пероксидазу хрена (ПХ). Выбор зависит от возможности оптического детектирования превращения субстратов этих ферментов и от легкости соединения фермента без потери активности. Щелочная фосфатаза представляет димерный гликопротеин с молекулярной массой 140 ООО, содержаний много свободных аминокислот для соединения. Аналогично пероксидаза хрена содержит четыре лизнновых остатка для соединения и имеет молекулярную массу 44000. В некоторых случаях для соединения можно использовать углеводные остатки. [c.594]

Функционирование многих фермеитов связано с участием Mg +, причем самую обширную самостоятельную группу представляют фосфотрансферазы (гл. 3, разд. Б,5), для которых Mg АТР может рассматриваться как субстрат. К числу Mg +-зависимых ферментов принадлежат фосфатазы и другие ферменты, катализирующие перенос фосфатных групп. Особая функция магния связана с его участием в фотосинтезе в качестве компонента хлорофилла. [c.130]

Несомненно, что с химической точки зрения Zn + в ферментах выполняет роль льюисовской кислоты, создающей локализованный центр положительного заряда вблизи нуклеофильного центра субстрата . Эта функция иона металла обсуждается в разд. Г,4 при рассмотрении карбоксипептидазы (рис. 7-3). Ионы цинка необходимы также для функционирования термолизина (разд. Г,4), дипептидаз, щелочной фосфатазы (разд. Д,1), РНК-полимераз, ДНК-полимераз , карбоангидразы (рис. 7-8), альдолаз класса П (разд. К,2, в), некоторых алкогольдегидрогеназ (гл. 8, разд. 3,2) и супероксид-дисмутазы (дополнение 10-3). Известно, что цинк связывается и с гексамерами инсулина (рис. 4-13,В). [c.142]

Все фосфатные мостикн неустойчивы в присутствии щелочи, например 0,25 н. NaOH при 25° [237]. Селективное расщепление различных соединений было достигнуто использованием фосфатаз, которые в простых субстратах специфичны по отношению к различным фосфатным связям [237]. Фосфатные группы, образующие межцепочечные мостики, после превращения в моноэфиры можно выделить в виде неорганического соединения действием фосфомоноэстераз растительного или животного происхождения. [c.175]

Молекулярный механизм действия металлов в энзиматическом катализе, или роль металлов в активировании ферментами. В ряде случаев ионы металлов (Со , Mg , Zn , Fe ) выполняют функции простетических групп ферментов, или служат акцепторами и донаторами электронов, или выступают в качестве электрофилов либо нуклеофилов, сохраняя реактивные группы в необходимой ориентации. В других случаях они способствуют присоединению субстрата к активному центру и образованию фермент-субстратного комплекса. Например, ионы Mg через отрицательно заряженную фосфатную группу обеспечивают присоединение монофосфатных эфиров органических веществ к активному центру фосфатаз, катализирующих гидролиз этих соединений. Иногда металл соединяется с субстратом, образуя истинный субстрат, на который действует фермент. В частности, ионы Mg активируют креатинфосфокиназу благодаря образованию истинного субстрата—магниевой соли АТФ. Наконец, имеются экспериментальные доказательства прямого участия металлов (например, ионов Са [c.146]

Гидролазы. В класс гидролаз входит большая группа ферментов, катализирующих расщепление внутримолекулярных связей органических веществ при участии молекулы воды. Наименование их составляют по форме субстрат-гидролаза . К ним относятся зстеразы —ферменты, катализирующие реакции гидролиза и синтеза сложных эфиров гликозидазы, ускоряющие разрыв гликозидных связей фосфатазы и пептидгидролазы, катализирующие гидролиз фосфоангидридных и пептидных связей ами-дазы, ускоряющие разрыв амидных связей, отличных от пептидных, и др. [c.161]

Центральную роль в превращениях глюкозы и саморегуляции углеводного обмена в печени играет глюкозо-6-фосфат. Он резко тормозит фосфоролитическое расщепление гликогена, активирует ферментативный перенос глюкозы с уридиндифосфоглюкозы на молекулу синтезирующегося гликогена, является субстратом для дальнейших гликолитических превращений, а также окисления глюкозы, в том числе по пентозофосфатному пути. Наконец, расщепление глюкозо-6-фосфата фосфатазой обеспечивает поступление в кровь свободной глюкозы, доставляемой током крови во все органы и ткани (рис. 16.1). [c.553]

Отсутствие, нарушение экскреции или инактивация фер-ментрв,ответственных за гидролитическое расщепление углеводных, белковых и жировых субстратов, которые являются источником энергии для организма, приводят к многообразным в своих проявлениях расстройствам процесса пищеварения. Введение лечебных доз ферментных препаратов, содержащих амилазу, протеиназу, липазу, лактазу, инвертазу, целлюлазу, пектиназу, фосфатазу и другие, призвано компенсировать врожденный или приобретенный ферментный дефицит, имеющий место при той или иной патологии [2, 65]. [c.171]

Д. Добавление конъюгата антитело к дигоксигенину — щелочная фосфатаза отмывание добавление субстрата [c.197]

Чтобы определить, произошло ли лигирование, 5 -конец зонда X метят биотином, а З -конец зонда V — дигоксигенином, низкомолекулярным соединением, связывающимся с соответствующим антителом. После гибридизации и лигирования проводят денатурацию ДНК для высвобождения гибридизовавшегося зонда и переносят смесь в небольшую пластиковую лунку, покрытую стрептавидином. Лунку промывают, чтобы удалить весь материал, кроме связавшегося со стрептавидином биотинилированного зонда. Затем добавляют в лунку антитела к дигоксигенину, предварительно соединенные со щелочной фосфатазой. После промывания, в ходе которого происходит удаление несвязанного конъюгата, добавляют бесцветный хромогенный субстрат. Окрашивание раствора в лунке свидетельствует о связывании антитела к дигоксигенину с зондом, меченным дигоксигенином, т. е. о том, что этот зонд был лигирован с зондом, меченным биотином. Если же окрашивания не происходит, значит лигирования не было. [c.198]

Ингибитор щелочной фосфатазы. Субстрат ДНК-зависимой РНК-полимера-зы Е. соН (К 3,8-10 М). Гидрол. фосфодиэстеразой змеиного яда. Не реагирует с гексокиназой. Переносится митохондриальной ATP/ADP-трансло-казой. Мощный ингибитор АТР-на-правляемого транспорта электронов. [c.214]

Фосфатазы отличаются одна от другой по субстрату, на который они действуют. Поэтому их делят на монофосфатазы, гидролизующие моноэфиры фосфорной кислоты (глюкозо-1-фосфат, глюкозо-6-фосфат и так далее) и дифосфатазы, расщепляющие диэфиры фосфорной кислоты. Известны такие ферменты, как фитаза, которая отщепляет остатки [c.76]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология