Маркерный фермент

Таблица 12 Маркерные ферменты клеточных органелл

Что такое маркерные ферменты [c.68]

ПУТЕМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАРКЕРНЫХ ФЕРМЕНТОВ [c.234]

В качестве маркерных ферментов в полученных фракциях измеряют активности цитохромоксидазы (специфическая локализация — [c.411]

Как уже отмечалось, с внутренней мембраной митохондрий связаны ферменты дыхательной цепи. Кроме того, она обладает АТФ-азной активностью, связанной с механизмом окислительного фосфорилирования. Маркерным ферментом для идентификации внутренней мембраны митохондрий служит цитохромоксидаза. [c.198]

Мембранная фракция Маркерный фермент [c.222]

Какие требования предъявляют к маркерным ферментам Назовите маркерные ферменты различных мембранных структур клетки. [c.229]

Когда оценивают уровень секреции в периплазматическое пространство, эффективность образования сферопластов определяют по периплазматическим маркерным ферментам. Кроме того, контролируется степень лизиса клеток с помощью определения активности такого цитоплазматического фермента, как алкоголь-дегидрогеназа [49] (табл. 4.28). [c.133]

Ма" , К -АТФаза всегда обнаруживается в наружных плазматических мембранах клеток и является их маркерным ферментом. Она представляет собой интегральный белок, пересекающий мембрану насквозь, контактируя как с внеклеточной средой, так и с цитоплазмой. Гидролитический центр фермента обращен внутрь клетки. Изнутри осуществляется также и активация фермента натрием. Присутствие калия требуется снаружи. Как гидролитический центр, так и участки ионной активации располагаются в гидрофильном окружении в тех частях молекулы, которые выступают из фосфолипидного бислоя (рис. 8). [c.37]

Наиболее часто для оценки чистоты выделенных мембранных фракций используют методы исследования удельной активности ферментов, называемых маркерами. Маркерные ферменты должны быть локализованы в определенном типе мембранных структур и катализировать реакции, соответствующие специфическим функциям этих мембран. Кроме того, фермент можно использовать как маркер, если он прочно связан с мембраной и не подвергается активации или ингибированию при разделении мембранных фракций (табл. 17). Активность маркерных фермен- [c.222]

К и Н+, а также некоторые маркерные ферменты, например малатдегидрогеназа, цитохром с, т, е. мембрана полностью теряет свои барьерные свойства. [c.29]

Маркерные ферменты специфичны для определенного [c.234]

Определение активности маркерных ферментов. Фермент может служить маркером определенного типа мембран, если он прочно связан с мембраной, не инактивируется при выделении данной фракции и локализуется исключительно в данных органеллах. Хотя не все эти требования выполняются для большинства маркерных ферментов, изучение их поведения в процессе получения конкретной фракции позволяет довольно точно установить принадлежность выделенных мембран. [c.67]

Это же касается и аденилатциклазного комплекса, центр которого доступен для внутриклеточного субстрата Na+, К+-зависимой АТФ-азы, активируемой ионами Ма+ изнутри клетки, ионами К+ снаружи и расщепляющей внутриклеточный АТФ и т. д. Таким образом, маркерные ферменты клеточных мембран связаны с функционированием специализированного участка мембраны. [c.236]

Для определения происхождения той или иной субклеточной фракции или степени ее чистоты недостаточно использовать один тест, а желательно иметь подробное описание полученной фракции. В то же время, определяя активность маркерных ферментов, можно оценить степень загрязненности используемой фракции мембран примесями. [c.68]

Оценить трансформированный статус любых регенерированных Кт -побегов можно по нх способности к росту в присутствии селективного агента. Однако нетрансформированные организованные ткани, как правило, достаточно устойчивы к тем концентрациям антибиотиков, которые в норме подавляют рост каллуса. Таким образом, трансформированный фенотип должен быть подтвержден при тестировании активности маркерного фермента (например, NPT-II) и выявлении Т-ДНК, как описано в гл. 5 и 6. Однако, чтобы получить достаточное количество материала, необходимо размножить побеги, как описано в следующем разделе. [c.138]

Исходя из анализа активностей маркерных ферментов, был сделан вывод, что данная фракция соответствует эндоплазматическому ретикулуму. [c.105]

Биохимические и электронно-микроскопические исследования показали, что неспецифическая кислая фосфатаза, так же как и другие кислые гидролазы, локализуется главным образом в лизосомах. Поэтому она считается маркерным ферментом для лизосом (табл. 37). Поскольку лизосомы связаны своим происхождением с комплексе Гольджи, то, как и следовало ожидать, активность этого фермента выявляется также на внутренней мембране этого комплекса и цистерн гладкого эндоплазматического ретикулума. [c.181]

Сукцинатдегидрогеназа является 8Н-содержащим ферментом, прочно связанным с митохондриями (митохондриальный маркерный фермент). Поскольку он принадлежит к флавопротеидам, то обладает способностью переносить электроны без участия пиридиннуклеотидов. [c.213]

Чистоту выделенных мембранных фракций определяют по нескольким критериям. Часто применяется морфологическое определение с помощью электронной микроскопии (см. 3.11) в случае, если мембрана обнаруживает отчетливые морфологические признаки. Более конкретная оценка чистоты мембран осуществляется посредством определения удельной активности маркерных ферментов. [c.234]

Рис. 8-70. Электронная микрофотография двух срезов клетки, окрашенной для выявления кислой фосфатазы-маркерного фермента лизосом. Мембранные органеллы большего размера, содержащие электроноплотные прегргнитаты фосфата свинца, представляют собой лизосомы, а их разнообразная морфология отражает изменения количества и природы расщепляемых веществ. На верхнем фото показаны стрелками два маленьких пузырька, которые, вероятно, переносят гггдролазьг из аппарата Г ольджи. Нреципитаты образуются, когда ткань, зафиксированную глутаровым альдегидом (чтобы сохранить локализацию фермента) инкубируют с субстратом фосфатазы в присутствии ионов свинца. (С любезного

Следует указать, что количественная характеристика внутриклеточных органелл зачастую затруднена. Это обусловлено тем, что изопикнические точки различных органелл могут перекрываться, и фракционирование при одной и той же скорости седиментации приводит к оседанию фрагментов нескольких органелл. Трудности идентификации могут быть также связаны с тем, что различные ткани имеют разные маркеры для одних и тех же органелл. Например, маркерные ферменты одного типа мембран могут проявлять активность и в других типах мембран, например, 5 -нуклео-тидазой в основном обогащены плазматические мембраны, однако эта активность присутствует также в аппарате Гольджи и эндоплазматической сети. [c.236]

Определение активности маркерных ферментов плазматических мембран [c.239]

Определение маркерных ферментов микросом [c.244]

Определение активности глюкозо-6-фосфатазы. Фракция микросом состоит в основном из фрагментов эндоплазматического ретикулума (ЭР), а также других типов внутриклеточных мембран. В результате того, что мембраны ЭР неоднородны по плотности, создаются препятствия полному разделению фракций. В связи с этим при выделении и очистке плазматических мембран наибольшие неприятности доставляют мембранные пузырьки, происходящие из ЭР. Они являются самой распространенной примесью, причем их маркерные ферменты не однозначны для разных тканей. [c.244]

Определение маркерных ферментов митохондрий [c.247]

Наряду с активностью аспартатаминотрансферазы в каждом случае определяют активность малатдегидрогеназы — маркерного фермента матрикса митохондрий. [c.353]

Допамин-р-гидроксилаза, напротив, содержится только в адренэргических клетках и может рассматриваться как их специфический маркерный фермент. Это медьсодержащий фермент, локализованный главным образом в хромаффинных гранулах, т. е. катехоламиизапасающих везикулах мембраи (см. ниже). [c.218]

Наружная мембрана не содержит компоненты дыхательной цепи. С ней связаны ферменты, участвующие в удлинении молекул насыщенных жирных кислот, а также ферменты, катализирующие окисление, не связанное с синтезом АТФ, например моноаминоксвдаза и некоторые другие. Моноаминоксида-за может служить маркерным ферментом для идентификации наружной мембраны митохондрий. [c.198]

TOB контролируют на каждом этапе выделения и разделения мембран в исходном гомогенате и в каждой фракции с целью определения стадии осаждения и выхода исследуемых мембранных структур, а также потерь мембранных фракций. Гомогенность выделенного препарата мембран анализируют на основании увеличения активности маркерного фермента (-ов) в нем по сравнению с исходным гомогенатом клеток. Часто используют не один, а два-три мембранных маркера. Однако необходимо помнить, что и мембраны одного типа способны проявлять гетерогенность, связанную с асимметрией белкового, липидного и углеводного состава мембран, в результате чего фермент может находиться в латентной форме из-за нарушения ориентации мембраны и недоступности активного центра для субстрата, например, в обращенных мембранных везикулах. Наиболее легко из внзпрри-клеточных органелл идентифицируют митохондрии и ядра, затем — лизосомы и пероксисомы, наиболее трудно — плазматические мембраны и мембраны эндоплазматической сети. Сложность разделения последних обусловлена близостью величин диапазона плотностей этих структур, поэтому разделение по скорости седиментации осуществляется в том случае, если плазматические мембраны представлены крупными фрагментами. [c.223]

Для миелина характерен ограниченный набор ферментов. Маркерным ферментом миелина является 2,3-циклическая нуклео-тцд-З-фосфогцдролаза, 60% от активности этого фермента в мозге приходится на миелин. Относительно специфическим ферментом миелина является также гцдролаза эфиров холестерина, 70-80% его активности обнаружено в миелине. В поддержании [c.117]

К сожалению, многие маркерные ферменты (например, Ка, К-АТФаза, 5 -нуклеотидаза, сукцинатдегидрогеназа) при выделении или хранении могут терять активность. Кроме того, большинство встроенных в мембрану ферментов характеризуется асимметричной локализацией активного центра. По этой причине их активность в замкнутых фрагментах не удается определить из-за недоступности для субстрата. Это так называемая латентная активность фермента. Она может быть выявлена в присутствии низких концентраций детергента или ионофоров (типа ала-метицина), образующих крупные каналы в замкнутых мембранных везикулах. [c.67]

Различные ткани содержат различные количества маркерного фермента. Например, глюкозофосфатаза обнаруживается главным образом в эндоплазматическом ретикулуме печени и почек в дру- [c.67]

Пероксидазы животных и растительных тканей различаются по геминовой группе. Растительная пероксидаза содержит в качестве простетической группы протогемин (Fe -протопорфирин—красный гемин) животные лерок-сидазы, или вердопероксидазы, наоборот, содержат зеленый гемин. Особую роль играет пероксидаза хрена она используется в качестве метки антител, а также как маркерный фермент при изучении процессов транспорта и проницаемости в животных тканях. При этом очень подходящим оказался низкий молекулярный вес фермента (44 ООО). [c.218]

Есть мнение, что лизосомы нейронов формируются в области аппарата Гольджи, связанного с гладким ЭР. Наиболее широко используемым маркерным ферментом для идентификации ЭР служит глюкозо-6-фосфатаза (табл. 1). Часто в биохимической литературе встречается термин микросомы. Это мелкие частицы пузырькоподобной формы (30—180 нм), представляющие собой в основном фрагменты мембран ЭР, а также частично плазматической мембраны, аппарата Гольджи, лизосом, митохондриальных мембран. Образование везикулярных структур в результате гомогенизации присуще, по-видимому, всем мембранам. А большой разброс в величинах диаметров этих пузырьков затрудняет получение высокоочищенных препаратов в пер- [c.15]

Для микросом скелетных мышц, происходящих в основном из саркоплазматического ретикулума, наиболее удовлетворительным маркером является Са + — АТФ-аза. Для некоторых тканей вообще не найдено удовлетворительногд маркера микросом для неисчерченных мышц, для культуры эмбриональных фибробластов крысы и др. Наиболее легко из внутриклеточных органелл идентифицируются митохондрии и ядра. Для этих органелл установлено, что их изопикнические точки относительно постоянны в различных тканях и выше, чем плазматических мембран. Кроме того, мембраны митохондрий различных тканей имеют одни и те же маркерные ферменты. [c.237]

Вычитая из общей АТФ-азной активности активность в среде, содержащей оуабаин, получим значение активности маркерного фермента — оуабаинзависимой Na+, К+ — АТФ-азы. [c.242]

К маркерным ферментам плазматических мембран от- о,в носится также щелочная фосфатаза (щелочная фосфогидролаза моноэфиров ортофосфорной кис-лоты, и-нитрофенилфосфатаза). [c.243]

Какова функция мембранно-связанных ферментов на примере Ка+, К+ —АТФ-азы 2. Назовите маркерные ферменты а) длн плазматических мембран б) для митохондрий в) для ядер г) для микросом. 3. Какие требования предъявляются к ферментам-маркерам 4. Чем могут быть обусловлены артефакты при определении маркерных ферментов плазмати сских мембран 5. Примеси каких оргаиелл присутствуют во фракции плазматических мембран 6. На чем основано определение активности Na+, К+ — АТФ-азы, 5 -нуклеотидазы, щелочной фосфатазы [c.244]

К маркерным ферментам эндоплазматического ретикулума клеток печени относят глюкозо-6-фосфатазу, многие ферменты системы переноса электронов. В других тканях обнаружены незначительные количества глюкозо-6-фосфа-тазы, в связи с чем используют другие ферменты-маркеры для определения чистоты фракции (см. табл. 1). Кроме того, при определении глюкозо-6-фосфатазы могут возникнуть артефакты из-за активности кислой и щелочной фосфатаз, для чего необходимо применять их ингибиторы (фтористые соединения, ЭДТА). [c.244]

Какие трудности возникают при определении маркерных ферментов макросом 2. Чем могут быть обусловлены артефакты при определении маркерных ферментов микросом 3. Какие типы мембраи присутствуют во фракции микросом Как это устаиовнть Чем обусловлеио присутствие этих мембраи 4. На чем основано определение активности глюкозо-6-фосфатазы, НАД-Н-оксидазы, Са2+—АТФ-азы [c.247]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология