Элюирование коферментами

Аффинная хроматография (хроматография по сродству). Основана аффинная хроматография на принципе избирательного взаимодействия белков (или других макромолекул) с закрепленными (иммобилизованными) на носителе специфическими веществами-лигандами, которыми могут быть субстраты или коферменты (когда выделяют какой-либо фермент), антигены (или антитела), гормоны или рецепторы и т. д. Благодаря высокой специфичности белков к иммобилизованному лиганду, связанному с носителем (которым заполняют хроматографическую колонку), присоединяется только один какой-либо белок из смеси. Снятие с колонки этого белка осуществляют элюированием буферными смесями с измененным pH или [c.29]

Биомасса дрожжей богата коферментом НАД (никотинамид-адениннуклеотид). Препарат НАД, необходимый для работы в биохимических лабораториях, можно получить из экстракта хлебопекарных дрожжей. Экстракцию ведут водой (82—85°С) в присутствии препарата аэросила А-300. Затем фильтрат, о.хлажден-ный до температуры 25—30°С, pH которого 6,0—6,1, пропускают через ионообменные смолы КУ-23 (Н+-форма). НАД элюируют 0,005 н. соляной кислотой. Полученный элюат еще раз пропускают через колонку с АН-231 (С1 -форма) и затем элюируют дистиллированной водой. Для дальнейшей очистки полученный раствор НАД пропускают через колонку с КУ-23 (Н+-форма) и только после элюирования 0,1 н. раствором аммоний-ацетатного буфера (pH 5,8—5,9) получают раствор, содержащий 95—99% пиридиновых коферментов, из которых 62—65% составляет активный кофермент НАД. Выход НАД при такой обработке составляет 50—60%. [c.203]

С аффинной хроматографией во многом сходна хроматография, при которой в качестве лигандов используются красители (голубая, зеленая или красная сефароза), а также хроматография на гидрофобных лигандах, где носителем является октил- или фе-нилсефароза. В первом случае в качестве иммобилизованного лиганда используют органический краситель, являющийся аналогом субстрата, кофермента или аллостерического эффектора. Элюирование обычно осуществляют солевым раствором увеличивающейся концентрации. [c.70]

Ферментный термистор успешно применяют в качестве инструмента специфического контроля в гель-фильтрации, ионообменной и аффинной хроматографии [11]. Поскольку ферментный термистор можно использовать для непрерывного определения активности ферментов непосредственно в неочищенных пробах, с его помощью можно идентифицировать и локализовать отдельные компоненты сложной хроматограммы, например на начальных стадиях процесса очистки фермента (рис. 29.4). Кроме того, в аффинной хроматографии при элюировании ферментам часто сопутствуют их коферменты, сильно поглощающие в УФ-области, что затрудняет непрерывный контроль за содержанием фермента по УФ-спектрам или спектрофотометрически регистрируемым изменениям концентрации NAD(P)H. Таким образом, в аффинной хроматографии калориметрическое определение активности элюированного фермента имеет определенные преимущества. [c.467]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология