Позитивное контрастирование

Позитивное контрастирование заключается во введении тяжелых атомов в образец. Это можно сделать с помощью специфического химического комплекса (например, связывания ионов уранила с ДНК или фиксации осмием липидных бислоев). Но чаще всего применяют способ оттенения. С раскаленной проволоки, которая служит источником тяжелых атомов, вольфрам (или другой тяжелый металл) напыляют на образец. Тяжелые атомы осаждаются на поверхности как образца, так и пленки-подложки, которые расположены на поддерживающей их сетке. Если напыление ведется под фиксированным углом, атомы металла накапливаются перед образцом, тогда как непосредственно за исследуемым объектом, там, куда на пленку-подложку не попадают атомы металла, образуется тень (рис. 10.1, А). Размер тени определяется высотой образца. Иногда образец вращают и при этом напыляют металл под малым углом. В этом случае тень не образуется, но избыток металла скапливается вблизи характерных вертикальных поверхностей структур, что и позволяет выявлять их при наблюдении. [c.178]

Метод позитивного контрастирования для большинства макромолекул применяется относительно редко, поскольку обычно бывает невозможно присоединить достаточно большое число тяжелых атомов для получения хорошего контраста, хотя такая возможность имеется для очень больших молекул и структур, таких. [c.75]

Позитивное контрастирование. Оно основано на присоединении различного количества контрастирующего агента к отдельным элементам структуры объекта, в результате чего и создается контрастность препарата. [c.189]

Применяют также метод позитивного контрастирования , при к-ром атомы тяжелых металлов вводят в изучаемый объект неравномерно в кристаллич. и аморфные области благодаря разной скорости диффузии атомов из р-ра или газообразного состояния (тяжелые атомы сосредоточиваются преимущественно в аморфных областях). [c.475]

Распластывание по Кляйншмидту с позитивным контрастированием и круговым напылением [c.77]

Вероятно, наиболее эффектным методом приготовления образцов из разработанных за последние десять лет является методика Клянншмидта, позволяющая наблюдать молекулы ДНК. Основными достоинствами метода служат отсутствие артефактов, происходящих при высушивании, и получение исключительно контрастного изображения. Эта методика в настоящее время применяется почти в каждой биохимической лаборатории, причем для овладения ею достаточно всего лишь несколько часов. Каплю раствора ДНК в 0,5—1,0 М ацетате аммония, содержащем 0,1 мг/мл цитохрома с, наносят на стеклянную пластинку таким образом, чтобы она стекала по пластинке на поверхность 0,15— 0,25 М ацетата аммония (рис. 3-14). Когда капля достигает поверхности, по поверхности начинает распространяться пленка денатурированного цитохрома с. Эта пленка содержит некоторое количество вытянутых молекул ДНК, связанных с толстым слоем <100—200 А) денатурированного цитохрома с. Если поверхности пленки денатурированного белка коснуться сеткой, то к ней прилипнет капля, содержащая часть пленки. Если сетку с прилипшей каплей погрузить в спирт, водная фаза будет удалена, а пленка плотно свяжется с пленкой-подложкой на сетке. Используемая в настоящее время методика включает предварительное позитивное контрастирование уранилацетатом белок, адсорбированный ДНК, будет окрашиваться так же, как образующая фон пленка, однако избыток белка позволяет получить хороший контраст. Контраст еще более увеличивается (или создается, если не применялось окрашивание) при напылении металла (обычно платины) под очень малым углом при одновременном вращении образца. Поскольку ДНК в образце покрыта пленкой белка, металл будет накапливаться у комплекса ДНК — белок подобно тому, как у забора наметает сугроб снега, однако это происходит со всех сторон, так как образец при напылении вращается. В результате получается исключительный контраст (рис. 3-15). Этот метод можно использовать для определения длины ДНК, а также для установления, является ли она кольцевой или же сверхспира-лизованной. В некоторых условиях (обычно при добавлении к [c.77]

Недавно был разработан еще один вариант метода Кляйп-шмидта, в котором цитохром с заменен хлоридом бензалкония — поверхностно-активным веществом, которое также образует пленку, способную прилипать к ДНК. На ДНК напыляют платину, но в связи с тем, что ДНК здесь не покрыта слоем белка, она выглядит гораздо уже, чем с применением цитохрома с. Позитивное контрастирование проводится так же, однако атомы урана связываются непосредственно с ДНК. Эта процедура дает гораздо лучшее разрешение макромолекул (например, РНК-полиме-разы), связанных с ДНК, и, вероятно, этот метод ждет большое будущее (рис. 3-17). [c.82]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология