Белки денатурированные

Сильнощелочные или сильнокислые среды также оказывают мощное воздействие на поведение белков. В этих условиях кислые или основные группы макромолекулы ионизируются в такой степени, что а-спираль переходит в разупорядоченный клубок. Этот процесс также называется денатурацией белка. Кроме того, денатурировать белок можно повышением температуры (вследствие интенсивных тепловых колебаний цепи спираль разрывается) или добавлением мочевины (ослабляется гидрофобное взаимодействие, поддерживающее упорядоченную структуру белка). Денатурированный белок утрачивает свои специфические функции (например, фермент становится неактивным), его растворимость в воде уменьшается и происходит коагуляция. [c.69]

Заряженные частицы перемещаются в растворе под влиянием электрического поля с различной скоростью. Уже в первой половине нашего столетия для этого явления было введено понятие "электрофорез" или "электрический перенос". Различие скоростей перемещения может быть обусловлено двумя причинами (а) различные молекулы несут на себе различные заряды и поэтому при наложении электрического поля могут ускоряться в различной степени (б) их перемещению препятствует различающееся по величине сопротивление трения. В простейшем случае разделительная среда (раствор электролита) находится в трубке. Из-за отвода Джоулева тепла на практике зачастую наблюдается искажение зон за счет различных плотностей электролита и конвекционных потоков. В случае классического электрофореза применяются гели или полоски бумаги, пропитанные электролитами для того, чтобы уменьшить помехи, вызванные конвекцией, а также чтобы увеличить сопротивление трения макро-молекул с незначительными различиями в зарядах и тем самым усилить эффект разделения. Использование полиакриламидного гель-электрофореза (ПААГ-электрофореза) позволяет проводить эффективное разделение молекул ДНК и белков. Благодаря изменению степени сшивания геля может быть оптимизирована производительность разделения. При использовании гель-электрофореза белков, денатурированных додецилсульфатом натрия (ДДСН), возможно непосредственное определение их молекулярной массы. Разделение в этом случае основано исключительно на затруднении миграции пробы через гель (без геля все денатурированные додецилсульфатом натрия белки перемещаются с одинаковой скоростью). [c.5]

Для крупных частиц с радиусом большим, чем размер двойного электрического слоя, подвижность частиц близкого состава не зависит от их размеров, что затрудняет разделение больших молекул при электрофорезе, поскольку скорость перемещения молекул ДНК и белков, денатурированных ДДСН, в чистом растворителе идентична. Разделение достигается лишь тогда, когда миграция обусловлена молекулярно-ситовым эффектом (например, в гелях). [c.9]

КГЭ применялся почти исключительно для разделения молекул ДНК, поскольку чувствительное определение белков в гельзаполненных капиллярах невозможно из-за поглощения самого полиакриламида в области относительно коротких УФ-лучей (<250 нм). Взаимодействия белков с гелями также могут играть определенную роль, так что до настоящего времени в гельзаполненных капиллярах описано только успешное разделение белков, денатурированных ДДСН. [c.101]

Для опыта в геле требуется обычно 10 мкг белка. Это количество может быть еще более снижено, если окрашивание геля вести длительное время. Для нахождения связи между электрофоретической подвижностью и молекулярными весами различных белков используют два способа либо несколько белков, денатурированных натрийдодецилсульфатом, смешивают и наносят вместе на один гель, либо белки под-вергают электрофорезу одновременно, но на разных гелях. Оба способа дают идентичные результаты. [c.420]

Физические агенты. Денатурация белков может осуществляться и за счет действия различных физических агентов. Наиболее общим и наиболее изученным денатурирующим воздействием является нагревание. Тепловое движение полипептидных цепей вызывает как разрыв водородных связей между ними, так и нарушение взаимодействия гидрофобных групп. При постепенном повышении температуры можно наблюдать иногда признаки ступенчатого, скачкообразного течения процесса денатурации. По-видимому, процесс разрушения водородных связей в нативных молекулах имеет кооперативный характер, что позволяет говорить о температуре и теплоте плавления а-спиральных участков у ряда белков. Денатурированные нагреванием белки легко агрегируют и выпадают в осадок, хотя коагуляция представляет собой вторичное явление. Вероятно, коагуляция является результатом возникновения дополнительных дисульфидных мостиков, солеобразных и вторичных водородных связей между различными молекулами. То, что коагуляция тесно связана с образованием дисульфидных связей, подтверждается тем фактом, что д-хлормеркурибензоат ингибирует свертывание. В свою очередь коллаген, не содержащий сульфгидрильных групп, при нагревании превращается в растворимую желатину. [c.186]

Дл1я белка типа яичного альбумина сомнительно, чтобы существовало равновесие между находящимися в пленке денатурированными молекулами и раствором белка денатурированные молекулы настолько нерастворимы, что они уже не могут вернуться в жидкость. Поэтому нельзя прилагать к таким системам уравнение адсорбции Гиббса. [c.237]

В своей недавно опубликованной работе А. Г. Пасынский и Р. С. Черняк [Биохимия, 17, 198, 1952) показали, что в присутствии концентрированных растворов мочевины окисляемость сульфгидрильных групп железосинеродистым калием значительно повышается. Авторы считают, что разрыв водородных связей, происходящий под влиянием мочевины, освобождает и водород сульф-гидриль 1ых групп, в результате чего этот водород становится более доступным для действия окислителей. По мнению авторов повышенную окисляемость сульфгидрильных групп белков, денатурированных мочевиной, нельзя поэтому рассматривать непременно как следствие структурных изменений белковых глобул. — Ярн.и. ред, [c.149]

Антигенам,и являются, как правило, чужеродные для реципиента вещества, к которым принадлежат белки, полисахариды, нуклеиновые кислоты и их кохмплексы. Изменяя путем химической модификации природные биополимеры, можно получить так называемые конъюгированные антигены. Конъюгированные антигены могут быть получены на основе белков, принадлежащих самому реципиенту. Аутологичные белки, денатурированные физическими или химическими методами, также приобретают антигенные свойства. [c.20]

Кроме рассмотренных свойств, белки обладают способностью денатурироваться. При денатурации гидрофильные коллоиды — белки — становятся гидрофобными, теряют стойкость и вследствие этого легко коагулируют. Такая типичная денатурация происходит при нагревании белков. Денатурированные белки, т. е. утратившие свои естественные свойства (выпали в осадок), сгюсобиы адсорбировать красители. По поглощению красителя можно определить начало денатурации, хотя внешиа белки могут казаться неизменными. [c.53]

НОМ электрофорезе нативного белка (при наличии достаточного количества препарата) можно обнаружить как основные, так и минорные белковые примеси. В двумерном варианте (по О Фаррелу) в одном направлении проводят разделение денатурированных белков в соответствии с их значениями р1 (в присутствии мочевины) в градиенте pH, который создается полимеризованными амфолитами. Во втором направлении белки, денатурированные с помощью додещшсульфата натрия, разделяют в соответствии с размерами протомеров (если белок является олигомером). [c.71]

Для проявления иммуноблотов используют и другой индикаторный фермент — щелочную фосфатазу (фосфогидролазу моноэфиров фосфорной кислоты, КФ 3.1.3.1) (Turner, 1983 O onner, 1982). В работе (Muilerman et al., 1982) описано также использование и визуализация фосфодиэстеразы I из печени крысы (КФ 3.1.4.1), как нативной, так и обработанной ДСН, в сочетании с двухцентровым иммуноанализом. Авторы этой работы предлагают интересные возможности ферментативного окрашивания зон после переноса (с использованием неочищенной антисыворотки против индикаторного фермента) для смесей белков, денатурированных ДСН. [c.362]

Денатурация белков с небольшой скоростью происходит и в живой клетке. Ренативация денатурированных белков в условиях клетки затруднена вследствие высокой концентрации белков денатурированные молекулы обнажившимися [c.36]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология