Бактериальные протопласты, слияние

Б. Слияние бактериальных протопластов [c.42]

Особая ценность протопластов для селекции растений определяется целым рядом их свойств. Во-первых, протопласты можно получать в большом количестве и отбирать из них разновидности с полезными свойствами. Хотя сами протопласты генетически единообразны, формирующиеся из них каллусы дают растения, существенно различающиеся по внешним признакам. Во-вторых, отсутствие клеточной стенки облегчает слияние протопластов и образование гибридов. Поскольку при этом сливаются соматические, как минимум диплоидные, клетки, селекционер растений получает в свои руки мощный инструмент для отбора. В-третьих, в отсутствие клеточной стенки облегчается-захват чужеродной ДНК — фрагментов молекул или же бактериальных плазмид, в результате чего формируются растения с совершенно новым набором признаков. [c.383]

Изолированные из тканей растения или культивируемых клеток протопласты (см. гл. 2) после образования клеточной стенки являются идеальными отдельными клетками. До образования стенки их используют для переноса в клетку и (или) растение молекул (рекомбинантные ДНК), органелл, вирусов, бактериальных клеток, несущих генетическую информацию. При этом применяют различные методь микроинъекции, слияния с липосома-ми, в которые введены информационные макромолекулы, элект- [c.27]

Введение ДНК с помощью липосом и трансформация протопластов путем слияния с бактериальными сферопластами, содержащими векторные плазмиды, использовались с переменным успехом [8, 16]. Последний метод оказался относительно неэффективным и более трудоемким, чем трансформация путем химически стимулируемого эндоцитоза или электропорации, и не будет рассматриваться в данном руководстве. Таким образом, в разд. 3.2 и 3.3 мы остановимся соответственно на методах химически стимулируемого поглощения ДНК и электропорации. Микроинъекции могут использоваться для трансформации клеток, а не протопластов и обсуждаются отдельно в разд. 3.4. [c.197]

Бактериальные клетки собирают с помощью центрифугирования (6000 g, 10 мин). Бактериальная культура объемом 100 мл дает достаточное количество протопластов, по крайней мере для 10 опытов по слиянию. Приводимые ниже количества относятся к одной культуре объемом 100 мл. [c.44]

В настоящей главе описаны методы, позволяющие вводить гены в лимфоидные клетки. Конкретно речь идет о слиянии с бактериальными протопластами и о копреципитации ДНК с фосфатом кальция. Эти методы просты, и их можно применять в любой лаборатории, поскольку они не требуют сложного оборудования. Методы трансформации, обсуждаемые в этой главе, особенно удобны для получения стабильных трансформированных клеток, т. е. трансформантов, которые сохраняют введенные в них гены при поддержании давления отбора. [c.38]

Рис. 2-1. Методы переноса генов с помощью копреципитации ДНК с фосфатом кальция и слияния с бактериальными протопластами.

В первой главе разбираются проблемы получения клеточных культур, их отличия от исходных тканевых клеток целого растения и различия при разных способах культивирования. Вторая глава посвящена протопластам растительных клеток, их выделению и культивированию. Изолированные протопласты являются удобным объектом для биологического конструирования. Гибридизация и цибридизация соматических клеток на основе слияния изолированных протопластов, введение органелл и бактериальных клеток, хромосом и чужой ДНК — основа технологии полученная генетически измененных клеток и растений. [c.5]

В настоящее время разработано большое количество методов для введения клонированных последовательностей ДНК в клетки млекопитающих. Среди них преципитация фосфатом кальция или DEAE-декстраном, электропробой, использование инактивированных вирусов и слияние прокариотических и дрожжевых протопластов с клетками млекопитающих. Наиболее широкое распространение получила преципитация фосфатом кальция. Точный механизм захвата ДНК, ее включения в реципиентную клетку непонятен, однако известно, что лишь небольшое количество клеток в культуре реципиентов включают ДНК. По аналогии с бактериальной генетикой эти клетки получили название компетентных . Количество включаемой ДНК — важнейшая характеристика используемой клеточной линии. Мышиные L-клетки включают несколько миллионов пар оснований экзогенной ДНК, человеческие фибробласты —только часть этого количества [44]. Было проведено несколько экспериментов по выявлению максимальных размеров ДНК, передаваемой неповрежденной. Обычно не удается перенести интактную ДНК, размеры которой превышают 100 т. п. н. Неизвестно, зависит ли это от свойств клеток-реципиентов или определяется трудностями в получении таких больших фраг- [c.26]

Первые гибриды Е. oli-S. typhimurium и другие бактериальные межродовые и межвидовые гибриды получали традиционным генетическим методом — конъюгацией. Однако при этом обмен генами между клетками, относящимися к разным семействам, практически не происходит. Неограниченные возможности для объединения геномов, включая и геномы эволюционно далеких организмов, открывает техника слияния протопластов в присутствии полиэтиленгликоля. При межвидовой и межродовой гибридизации бактерий и дрожжей таким способом удается [c.438]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология