Хромосомы дифференциальное окрашивание

Рис. 21.7. Поперечная исчерченность метафазных хромосом мужчины. Разработанная в 60-е годы методика дифференциального окрашивания выявляет светлые и темные участки (полосы) в хромосомах. Наиболее ча-

Окрашивание. Наиболее простой способ окрашивания-красителем Гимза или 2%-ным ацетоор-сеином, или 2%-ным ацеткармином. Эти красители окрашивают хромосомы целиком, равномерно и интенсивно. Для некоторых диагностических целей (например, для выявления численных аномалий хромосом) этот метод вполне достаточен. Для получения более детальной картины структуры хромосом и идентификации отдельных хромосом или их сегментов используются различные способы дифференциального окрашивания. [c.43]

Из-за диффузного состояния хроматина мы в настоящее время не можем узнать детали его организации. Но мы можем поставить вопрос насколько жестко организована структура хромосомы Всегда ли определенные последовательности располагаются в одном и том же участке хромосомы, или скручивание нити в общую структуру является достаточно случайным Несколько лет назад в результате разработки метода дифференциального окрашивания на G-сегменты было показано, что для каждой хромосомы характерна особая воспроизводимая при редупликации ультраструктура. Если хромосомы обработать специальным образом и затем окра- [c.350]

С внедрением в широкую практику методов дифференциального окрашивания появились сообщения о более высокой частоте инверсий в некоторых популяциях. Довольно часто в эти перестройки вовлекается хромосома 9. Именно такая ситуация обнаружена в Финляндии [323]. При анализе кариотипов 631 жителя этой страны по различным диагностическим поводам у 9 была обнаружена перицентрическая инверсия и в б случаях-в хромосоме 9. Все эти б инверсий оказались идентичными. У трех пробандов инверсия была обнаружена в хромосоме 10 при этом у двух одинаковая, а у третьего отличная от них. Инверсию в хромосоме 9 может легко распознать и неспециалист (рис. 2.49), так как типичная вторичная перетяжка оказывается в этом случае не в длинном, а в коротком плече. [c.82]

Группа Г (19-20). Эти две хромосомы имеют центромерный индекс в пределах 36-46. В стандартных препаратах они выглядят одинаково, но при дифференциальном окрашивании резко различаются. [c.50]

Дифференциальное окрашивание. Многие исследователи отмечали в хромосомах, окрашенных [c.43]

Внутрихромосомные перестройки (внутренние обмены). В пределах одной хромосомы могут произойти разрывы в двух разных участках, и фрагмент между точками разрыва, перевернувшись, может вновь соединиться с хромосомой. Такая перестройка (инверсия) не приводит к нарушениям в митозе, особенно если разрыв произошел в фазе О . Она может быть обнаружена методами дифференциального окрашивания. В тех случаях, когда инверсия не затрагивает центромеру, она называется парацентрической, если же точки разрыва находятся по обе стороны от цент- [c.73]

В последние годы в результате применения флюоресцирующих веществ и различных модификаций методики окрашивания ло Гимза разработаны методы дифференциальной Окраски хромосом растений и животных. В результате такого окрашивания каждая хромосома имеет свой определенный рисунок поперечной исчерченности, заключающийся в чередовании темных и светлых полос. [c.198]

Метод окрашивания и идентификация хромосом. Дальнейшие успехи в картировании связаны с появлением новых методов идентификации индивидуальных хромосом, основанных на их дифференциальном окрашивании. Благодаря этим методам можно идентифицировать не только целые хромосомы, но и отдельные их части. В гибридных культурах довольно часто возникают хромосомные разрывы и перестройки. Это создает предпосылки для подходящей селекции гибридных клонов, содержащих интересующие нас части хромосом. Именно так некоторые локусы были отнесены к определенным хромосомным сегментам (или группе соседних сегментов). [c.202]

Группа О (21 и 22). У этих маленьких акроцентрических хромосом центромерный индекс варьирует в пределах 13-33. Они легко различаются по рисунку сегментации. Изменчивость их коротких плеч так же значительна, как и в хромосомах группы О. Здесь классифицируют такие же варианты, как и в группе О (рис. 2.14). Флуоресценция спутников и коротких плеч может быть слабой, умеренной и сильной, так же как и интенсивность окрашивания при использовании О-метода. В выборке из 2444 новорожденных 3,5% обнаруживают удлиненные короткие плечи. Другие варианты, такие, как гигантские спутники, удлиненные или укороченные короткие плечи, встречаются намного реже. По данным некоторых исследователей, обшая частота вариантов хромосом группы О составляет 1,8% по препаратам с дифференциальным окрашиванием и 1,6% в стандартных препаратах. Короткие плечи хромосом группы В и О содержат ядрышковый организатор и специфично окрашиваются методом серебрения. [c.50]

Высокоразрешающее дифференциальное окрашивание. Хромосомы в профазе и прометафазе конденсированы не столь сильно, как метафазные хромосомы. При обработке культуры лимфоцитов метотрексатом (для частичной синхронизации клеточного цикла) можно накопить достаточное число клеток, находящихся в профазе и прометафазе. Сокращение времени инку- [c.51]

Как отмечалось в разд. 2.3.1.1, различные фракции сателлитной ДНК распределяются по хромосомам человека неравномерно. Сравнение с человекообразными обезьянами показало, что межвидовые гомологии в распределении сателлитной ДНК по хромосомам меньше тех, которые характерны для сегментов, выявляемых при дифференциальном окрашивании, хотя и распределения сателлитов, Несомненно, в определенной степени гомологичны. AT [c.16]

Дифференциальное окрашивание в зависимости от используемого метода может охватывать либо всю длину хромосомы, либо ее центромерный район. [c.61]

Индивидуальная совокупность сегментов, различающихся по ширине и интенсивности окрашивания, образует цитологическую карту каждой хромосомы. Основанные на дифференциальном окрашивании хромосом цитологи- [c.63]

Метод гибридизации нуклеиновых кислот можно использовать на препарате хромосом после их соответствующей обработки. Так, исследуемый ген можно локализовать в специфическом хромосомном сегменте, одном из тех сегментов, которые наблюдаются при дифференциальном окрашивании. Поскольку эксперимент проводится с зондом к-ДНК, синтезированном на м-РНК, можно утверждать, что идентифицированный участок хромосомы содержит активный ген. Известно, что в геноме помимо активных генов, могут находиться псевдогены, такие последовательности ДНК, которые гомологичны активному гену, ио не транскрибируются из-за отсутствия каких-то важных последовательностей вне транскрибируемой части. [c.69]

При изучении 941 одноплодного абортуса у 287 (30,5%) выявлены хромосомные аномалии. В табл. 2.11 приведены частоты основных типов трисомий. В половине случаев были обнаружены первичные аутосомные трисомии, около одной четверти абортусов оказались Х-моносомиками и одна восьмая--полиплоидами. Остальные были в основном моносомны или несли транслокации. Из 149 первичных аутосомных трисомий или транслокаций 89 идентифицированы с помощью дифференциального окрашивания. Из них в 35 случаях обнаружена дополнительная хромосома 16. Дополнительные хромосомы 21 и 22 встречались примерно в 10% всех трисомий, в то время [c.112]

Метод G-сегментации находит самое широкое практическое использование, однако природа дифференциального окрашивания до сих пор остается загадкой. Известно наверняка лишь то, что без предварительной обработки хромосомы окрашиваются краской Гимза более и.ти менее равномерно. Таким образом, образование полос обусловлено тем, что различные виды предварительной обработки по-разному влияют на отдельные участки хромосомы. (Вероятно, в результате экстракции каких-то компонентов, связываюших краску, из участков, образующих промежутки между G-сегментами.) Однако разнообразие эффективных воздействий так велико, что не позволяет понять общей природы реакции. Можно только предполагать существование какой-то большой по длине структуры, но, что лежит в ее основе, не известно. [c.351]

Для определения сходства и разЛичий между хромосомами разных организмов была разработана методика дифференциального окрашивания хромосом (см. дополнение 18.1). На рис. 21.25 изображены хромосомы человека и трех наших ближайших сородичей шимпанзе, гориллы и орангутана. По структуре они очень похожи, однако имеется и ряд перестроек. У человека 23 пары хромосом, а у кр) ных человекообразных обезьян-24. Два плеча крупной второй хромосомы человека соответствуют двум разным хромосомам обезьян (это хромосомы 12 и 13 шимпанзе и 13 и 14 гориллы и орангутана). Следовательно, в процессе эволюции произошла по крайней мере одна робертсоновская перестройка вероятно, это было слияние хромосом в эволюционной линии, приведшей к возникновению человека. На рис. 21.25 хорошо видны и другие структурные отличия. Например, хромосомы 4, 5, 12 и 17 человека и шимпанзе отличаются друг от друга перицентрически-ми инверсиями. [c.57]

Впервые указанный механизм удалось продемонстрировать реально в работе [340]. Речь ИДС1 о мальчике с множественными пороками развития. На рис. 2.52 показаны хромосомы 10 этого пробанда и его матери. Можно видеть, что у матери имеется больгпая перицентрическая инверсия. Кроссинговер в пределах этой инверсии привел к появлению аномальной хромосомы, в результате чего ребенок оказался три-сомиком по сегменту q456. Без применения метода дифференциального окрашивания все С-хромосомы (группа 6 X 12) были бы классифицированы как нормальные и кариотипы матери и ребенка рассматривались бы как иден- [c.84]

Наблюдаемые варианты можно разделить на хромосомы с удлиненным коротким плечом (рЬ- -), с большим сателлитом (р8-(-), с удвоенным сателлитом (рее) и с укороченным коротким плечом при наличии или отсутствии сателлита (рЬ—). Кроме того, существуют различия по интенсивности флуоресценции сателлитов и коротких плеч и различия по размеру прицентро-мерного гетерохроматинового блока, который можно идентифицировать с помощью С-дифференциального окрашивания. [c.151]

Ее обнаружили во всех клетках пациента с билатеральной ретинобластомой и не очень значительными конституциональными аномалиями [1531]. В последние годы, особенно после введения дифференциального окрашивания высокого разрешения, выявлено большое число таких пациентов у многих из них делегирован или вовлечен в реципрокную транслокацию лишь очень небольшой участок длинного плеча 13-й хромосомы (рис. 5.36). Сравнивая множество подобных фактов, можно установить, что делетированный сегмент приурочен к 13я14 (или даже к 13д14.13 рис. 5.36). Ген ретинобластомы (если мы назовем данный участок хромосомы геном) тесно сцеплен с геном эстеразы В (Е8В). [c.211]

Дифференциальное окрашивание на О-диски было впервые предложено Сибрайт [4], после чего неоднократно модифицировано многими авторами [5—7]. О-окрашивание хромосом является наиболее распространенным и информативным из всех методов дифференциального окрашивания. С его помощью определяют гомологи нормальных хромосом и структурно перестроенные хромосомы. Для проведения О-окрашивания отбирают препараты, содержащие достаточное количество метафазных пластинок без цитоплазмы [c.82]

Установление происхождения маркерных хромосом. Процедуры, описанные в двух предыдущих разделах, входят в процесс идентификации и установления происхождения маркерных хромосом. Как уже указывалось, на этих этапах анализируется только О-окрашенные хромосомы. Однако несмотря на высокую разрешающую способность метода в некоторых линиях удается установить происхождение лишь 70—80 % маркерных хромосом. Поэтому при анализе маркеров в линиях следует также использовать методы дифференциального окрашивания хромосом для выявления С-дисков и активных ЯО. С этой целью дополнительно фотографируют и анализируют 5 метафазных пластинок, окрашенных на С-диски, и 10 метафазных пластинок, окрашенных методом серебрения ЯО. При сопоставлении характера распределения 0-, С-дисков и активных ЯО на одних и тех же маркерных хромосомах удается установить их фрагментарный состав и уточнить локализацию мест разрывов нормальных хромосом при образовании маркеров. Особенно полезно использовать на этом этапе работы хромосомы прометафазного типа, как маркерные, так и нормальные из банка образцов. [c.90]

Проведение полного кариотипического анализа постоянных клеточных линий — многоэтапный и трудоемкий процесс. Однако в зависимости от задачи исследования могут быть выполнены только отдельные его этапы. В частности, для определения межвидовой контаминации линий вполне достаточным является анализ рутинно окрашенных препаратов и определение характера локализации С-дисков и районов ЯО на хромосомах. Для внутривидовой идентификации различных линий необходимо провести сравнение морфологии маркеров с помощью дифференциального окрашивания хромосом на G-диски. Анализ обобщенного реконструированного кариотипа линии позволяет оценивать суммарный хромосомный состав клеток и хромосомный материал по каждой отдельной паре хромосом. Этот прием обычно используют и для получения сравнительной кариотипической характеристики различных линий и сублиний как в процессе их длительного культивирования различными способами, так и при получении сублиний, отличающихся по целому ряду биотехнологических показателей. [c.96]

Морфологические изменения второго типа обнаруживаются в нормальных во всем остальном хромосомах и проявляются в атипичном характере исчерченности определенных областей при дифференциальном окрашивании (рис. 7.23) эти области называют гомогенно окрашивающимися (HSR). Как правило, они весьма протяженны, и хромосома, содержащая HSR, длиннее своего гомолога (рис. 10.88, ). В клетках, устойчивых к метотрексату, после гибридизации in situ с радиоактивным зондом, представляющим собой клонированный дигидрофолатредуктазный ген, и обработки фото-чувствительной эмульсией на HSR обнаруживаются зерна серебра. Таким образом, амплифицированные последовательности находятся внутри HSR. В хромосомах клеток сирийского хомячка, содержащих амплифицированные гены аспартат-карбамоил-трансферазы, также обнаруживаются лишние протяженные участки. Поскольку эти участки окрашиваются негомогенно, они не являются HSR, но тем не менее содержат амплифицированные сегменты ДНК (рис. 10.88, В). В некоторых случаях амплификация гена AD происходит и в нормальном локусе AD сирийского хомячка (в хромосоме В9р), хотя другие хромосомы тоже могут содержать много копий этого гена и иметь разнообразные аномалии (рис. 10.88, Г). Могут встречаться и двойные мини-хромосомы. Во всех исследованных случаях амплификация касается только одной пары гомологичных хромосом. В отличие от нестабильных амплифицированных генов в двойных мини-хромо- [c.309]

В гибридных клетках человек-мышь, полученных в результате слияния ане-уплоидных Ь-клеток мыши и диплоидных эмбриональных фибробластов человека, 75-95% человеческих хромосом утрачиваются в процессе культивирования, причем их утрата носит случайный характер. Среди множества разнообразных гибридов всегда найдется клетка, сохравдвтая ту или иную хромосо.му человека. После размножения этой клетки можно провести анализ ферментов, активность которых связана с наличием именно данной хромосомы. Использование методов дифференциального окрашивания хромосом позволяет связать п ны с определенными локуса-ми хромосом, так как в гибридных клетках довольно часты хромосомные разрывы, перестройки, присутствие не целых хромосом, а отдельных фрагментов. [c.123]

Хромосомы способны к избирательному окрашиванию по длине без прижизненной модификации какими-либо воздействиями. Дифференциальное окрашивание обеспечивается срав- [c.252]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология