Пептиды и прикрепление клеток

Для точной локализации активного участка с помощью метода связывания клеток были проверены синтетические пептиды, соответствующие различным участкам сегмента из 108 аминокислотных остатков. Были поставлены эксперименты двух типов. В одних пептиды ковалентно связывались через цистеиновый остаток с белком, покрывающим пластик, после чего их проверяли на способность вызывать прикрепление клеток. Полученные результаты представлены в табл. 14-3. В других опытах пластиковые чашки покрывали нативным фибронектином и клетки инкубировали в чашках в течение 30 мин в присутствии синтетических пептидов, указанных в табл. 14-4. Затем чашки отмывали и подсчитывали число прикрепившихся клеток. [c.270]

Роль различных доменов, в особенности доменов, связывающихся с клетками, была изучена путем расщепления молекулы на отдельные домены протеолитическими ферментами или путем синтеза специфических белковых фрагментов химическим методом или с помощью рекомбинантных ДНК. Так, из протеолитических фрагментов был выделен домен, ответственный за связывание с клеткой, и определена его аминокислотная последовательность. Были приготовлены синтетические пептиды, соответствующие различным сегментам этого домена, и удалось выяснить, что за связывающую активность ответственна специфическая трипептидная последовательность (Arg-Gly-Asp, или R-G-D). Пептиды, содержащие эту RGD-последовательность, конкурируют за места связывания на клетке и таким образом ингибируют прикрепление клеток к фибронектину когда же эти пептиды связываются с твердой поверхностью, они обусловливают прикрепление к ней клеток. RGD-последовательность содержится не только в фибронектине - она является общей для многочисленных внеклеточных адгезивных белков и узнается целым семейством гомологичных рецепторов клеточной поверхности, связывающих эти белки (разд. 14.2.17). Хотя в молекулах, узнаваемых этими рецепторами, имеется общая трипептидная последовательность, каждый рецептор специфически узнаёт свою собственную небольшую группу адгезивных молекул таким образом, связывание с рецептором должно также зависеть и от других участков адгезивной белковой последовательности. [c.505]

Описанные в данной главе эксперименты свидетельствуют в пользу использования in vitro мутагенеза клонированных генов НА для изучения функции гидрофобных областей белка. Существуют многочисленные возможности распространения этой технологии на другие участки молекулы, включая пептид слияния, антигенные сайты, сайт связывания рецептора и точки прикрепления углевода. Точный анализ роли индивидуальных аминокислот в структуре и функции белка может быть проведен при введении изменений в одном основании в определенных сайтах в гене НА с использованием олигонуклеотидуправляемого мутагенеза [32]. Хотя подобные эксперименты будут особенно уместны для нашего анализа молекулы НА, эти дополнительные результаты весьма ценны для понимания структуры и функции цельных мембранных белков в общем смысле. Не говоря об особенных свойствах, связанных с антиген-ностью и биологическим значением, структура молекулы НА характерна для основного класса клеточных мембранных белков. Более того, поскольку биосинтез НА включает ферменты клетки хозяина и процессы во время трансляции, мембранного транспорта, гликозилирования и созревания, НА представляет собой полезную модель для изучения мембранных белков и органелл. [c.184]

Активация С4 с помощью С1 связана с отщеплением от аминоконцевой части а-цепи пептида с молекулярной массой 7000—11 ООО. Его обозначают как С4а, а всю остальную часть молекулы — как С4Ь (рис. 40). Фрагмент С4Ь имеет пять функций 1) необратимо связывается с иммунным комплексом и мембраной клетки через появляющийся в ходе активации новый N-концевой участок а-цепи 2) связывается с клеточными рецепторами, ответственными за так называемое иммунное прикрепление (см. ниже) 3) взаимодействует с С1, что обеспечивает более эффективное расщепление С2 4) связывается с активированным С2 5) взаимодействует с СЗЬ, что приводит к формированию тройного комплекса — С4Ь2аЗЬ, являющегося С5-конвертазой классического пути активации. [c.172]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология