Разделение связанной и свободной меток

Интересным развитием идеи использовать ферментные метки является контроль соотношения связанный свободный> путем изменения активности фермента в результате связывания в конъюгат с антителом или дополнительного связывания антиферментных антител. Такие способы анализа не нуждаются в этапе разделения, а значит, можно упростить проведение определения. Разработано несколько способов гомогенного ферментативного иммунного анализа (ФИА). [c.595]

Физические методы разделения связанной и свободной метки [c.575]

Разделение связанной и свободной метки не должно нарушать равновесия между ними. [c.575]

Идеальный метод разделения не должен оказывать влияния на соотношение связанной и свободной метки и должен обеспечивать полное разделение обеих форм. Однако, как было установлено ранее, достичь этого никогда не удается. В любом случае связывание рецептор-лиганд обратимо, поэтому процедура разделения не должна изменять условия реакции, чтобы диссоциация не происходила. Большое разнообразие применяемых методов разделения отражает разнородность свойств комплекса рецептор-лиганд и требований к ме- [c.575]

Белки имеют тенденцию адсорбироваться на различных материалах, это свойство можно использовать для разделения. Целлюлоза, стекло и силикагель — все они нашли применение для адсорбции белков. Классический способ удаления растворенного вещества из раствора — использование измельченного древесного угля, но в случае белков адсорбция затрудняется из-за несоответствия между большим размером молекул белка и малыми порами угля. Древесный уголь модифицируют, покрывая его декстраном и 1 С, и в растворе сохраняется комплекс 1 С-антиген, тогда как антиген адсорбируется на древесном угле. В случае меченого антигена этим способом удаляют из раствора свободную метку, оставляя связанную метку для определения в растворе. [c.577]

Б качестве эталонных веществ для получения сопоставительных величин удерживания в области фракционирования использовались полистирол с ММ=300000 (для фиксирования свободного объема колонки и нижней границы удерживания на колонке с гелем) и сквалан с Ш=423 (как метка для верхней границы удерживания). Разделяемые компоненты будут иметь объемы удерживания между этими двумя метками. Наличие меток позволяет проводить корректировку на неучитываемое изменение условий разделения, связанное с изменением скорости элюента (проницаемости колонки), температуры окружаицей среды и т.п. Приведенные к сдинаковш условиям хроматограммы исследованных продуктов и эт<злонов приведены на рис.З. [c.55]

В 1979 г. две группы исследователей опубликовали статьи, в которых были описаны два варианта гомогенного амперометрического иммуноанализа с неферментативными электроактивными метками [10, 33]. Модельными антигенами в обеих работах были небольшие молекулы. Хейнеман и др. [33] в качестве метки для определения эстриола использовали ацетат ртути. Уровень этого гормона в плазме и моче соответствует определенным стадиям беременности. Сиду тока, возникающего от метки на ртутном электроде, измеряли с помощью дифференциальной импульсной полярографии. Последующее добавление антител против эстриола приводит к уменьшению пикового тока, обусловленного волной, которая отвечает восстановлению ацетата ртути при -300 мВ (относительно стандартного каломельного электрода). Связывание конъюгата эстриола с ацетатом ртути и со специфическими антителами предотвращает восстановление метки при -300 мВ, что устраняет необходимость разделения связанного и свободного меченого антигенов. Добавление немеченого эстриола к раствору, содержащему связанный с антителами конъюгат эстриол - ацетат ртути, приводит к вытеснению меченного металлом гаптена. Степень вытеснения последнего можно контролировать по увеличению тока. Так как восстановление меченного металлом гаптена происходит при потенциале, при котором становится заметным восстановление кислорода, то для устранения побочных реакций необходимо тщательное удаление кислорода из проб. [c.218]

Из этого обсуждения можж) сделать вывод, что одной из основных задач, необходимых для оптического биосенсора, независилю от того, используют пассивную или активную метку, является способность различать свободное , или неме геное, определяемое вещество и связанное , или меченое, определяемое вещество без проведения разделения прн анализе, как это можно еделать в классическом биоанализе, использующем растворы [c.549]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология