Антигены мечение

Антигены, меченные субстратами и кофакторами, также нашли применение в гомогенных методах иммуноферментного анализа. Сущность этих методов (уравнения 6, 7, 8) заключается в том, что при взаимодействии меченого антигена с антителами субстрат становится не доступным для действия фермента, в результате чего продукт ферментативной реакции не накапливается в системе (рис. 22, б) [c.115]

Методы радиохимриеского анализа широко ирименяются в клинических лабораториях. Об использовании в этих целях изотопов С [24] уже упоминалось выше. Возможно, более обычными являются методы, основанные на проведении радио-иммуиных испытаний [25]. Они лежат в основе чувствительного способа определения концентрации антигенных вепдеств в образце при сопоставлении его ингибирующего влияния на связывание антигена, меченного радиоактивной меткой, с ограниченным количеством специфических антител и ингибирующего влияния известных эталонов. Обычно методики основаны на измерении уровня радиоактивности образцов, содержащих и Со. [c.30]

Приготовление полисахаридного антигена, меченного [c.125]

Окрашивание белков и идентификацию специфических антител с помощью полисахаридного антигена, меченного проводят как описано выше. [c.127]

Схема 7.в-11. Пути реакций согласно связанноь с редокс-ферментом ампе-рометрическощг измерению с помощью редокс-медиатора, для конкурентного иммунного анализа с использованием антигена, меченного ферроценом. [c.539]

Большие молекулы и при эмиссии частично сохраняют ту же молекулярную о жентацию, которую они имели при поглощении света, поэтому их флуоресценция поляризована. Если такие молекулы ассоциированы в молекулярный комплекс, то степень поляризации флуоресценции возрастает. Так как в поляризации флуоресценции важную роль играют размер и форма молекул, то это явление особенно полезно при контроле реакций антиген-антитело. Как показано на рис. 10.1, когда маленькая молекула антигена, меченного флуоресцентной меткой, образует комплекс с большой молекулой антитела, то вращение флуоресцентной метки замедляется и поляризация флуоресценции возрастает. [c.141]

Рассмотрим принципиальные подходы к определению констант равновесия. Из уравнения (3.3) следует, что для расчетов необходимо знать концентрации свободного и связанного с антителами антигена в условиях равновесия. Обычно для этого используют антигены, меченные маркером, который с высокой чувсти-тельностью может быть определен одним из доступных физикохимических методов. [c.41]

Метод деполяризации флуоресценции основан на измерении поляризации флуоресценции антигена, меченного красителем, до взаимодействия с антителами и после комплексообразования. Поляризация флуоресценции определяется молекулярным объемом частицы и степенью ее асимметрии. Комплексообразование антигена с антителом сопровождается резким изменением поляризации флуоресценции красителя (например, дансила), который играт роль метки антигена или антитела. Предел обнаружения антигена этими методами достаточно мал (10 —10 ° М). [c.43]

Время ншсубации. Время является одной из важнейших переменных, определяющих эффективность процесса связывания. Как видно из данных, представленных на рис. 4.3, зависимость степени адсорбции антител на стенках лунок микропланшета от времени нелинейна. Для получения количественных характеристик процесса адсорбции через определенные промежутки времени в систему добавляли избыток антигена, меченного ферментом, далее микропланшет промывали, добавляли в лунки раствор субстрата и по завершении ферментативной реакции измеряли оптическую плотность раствора. Чем больше время инкубации, тем больше молекул реагента связывается с носителем этот процесс продолжается до тех пор, пока не настухшт насыщение твердой фазы или истощение раствора. [c.55]

Часто радиоиммунный анализ основан 11а принципе конкуренции меченого антигена с немеченым. Например, требуется установить, содержится ли в изучаемом препарате данный антиген Существует тест-система, состоящая из такого же антигена, меченного радиоактивным г одом, и антител к нему. Исследуемый препарат инкубируют первоначально с антителом, а затем добавляют меченый тест-антиген. Затем иммунный комплекс осаждают либо сульфатом аммония, либо антииммуноглобу-линовой сывороткой. Если радиоактивность в опытной пробе ниже, чем в контрольной (где содержатся только компоненты тест-системы), значит п изучаемом образце содержится антиген, сходный или идентичный радиоме-ченому антигену тест-системы. Тот же метод может быть построен на принципах иммуносорбции с использованием иммобилизованных антител. При этом отпадает необходимость осаждения иммунного комплекса. Методы, основанные на принципе конкуренции, нетрудно выполнить на количественной основе. Именно таким способом могут определяться различные гормоны, причем в количе- [c.261]

Существует несколько родственных методов иммуноанализа без разделения реакционной смеси, в которых используют стерическое исключение высокомолекулярного субстрата из активного центра фермента. Разработан метод анализа энтеротоксина В из стафилококков с помощью антигена, меченного -ами-лазой (Morita, Woodburn, 1978). Из-за сложного измерения активности этот метод представляет ограниченный интерес с точки зрения рутинного использования в клинике. Нго и др. (Ngo et а ., 1981) ввели в употребление метод на основе белкового антигена, меченного флуорогенным субстратом -галактозидазы. Чтобы количественно определить в сыворотке антиген, ему дают возможность связаться с антителами в присутствии антигена, меченного субстратом, потом добавляют избыток -галактозидазы и измеряют степень гидролиза субстрата. [c.114]

В иммуноферментном методе часто используют антигены, меченные дегидрогеназами. При этом образование КАВН контролируют спектрофотометрически. Прямое электрохимическое окисление КАВН изучено достаточно хорощо, и в работе [5] для определения NABH применяли не спектроскопический, а электрохимический метод. Авторы [5] приспособили серийную аппаратуру для определения фенитоина (низкомолекулярное биологически активное вещество) с помощью проточно-инжекционного анализа. Когда были приняты меры к предотвращению загрязнения электрода белками сыворотки крови, удалось достичь хорошего согласия этого метода с используемым в клинических лабораториях рутинным методом анализа сыворотки (рис. 4.1). [c.60]

Радиоиммунологический анализ (РИА) количественное определение антител или антигенов, меченных радионуклидом, с применением аналогичных антител или антигенов например, искомого антигена с применением иммунной сыворотки и аналогичного антигена, меченного радионуклидом. После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный комплекс антиген — антитело и определяют его радиоактивность по счетчику импульсов количество меченого антигена, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству искомого антигена. Широкое распространение получили так называемые прямой и непрямой варианты твердофазного радио-иммунологического метода, при которых используют полисти-роловые плашки с адсорбированными антигенами или антителами. Метод применяют для выявления антигенов микроорганизмов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов. [c.181]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология