Выделение ферментов. Методы количественного определения активности ферментов

Принцип метода. Методы выделения амилаз из покоящихся и проросших семян основаны на настаивании размолотых семян с водой или слабым раствором нейтральных солей. При этом большая часть амилаз переходит в вытяжку. Очищают ферменты чаще всего высаливанием из растворов сульфатом аммония. Раздельное количественное определение активности амилаз основано на различной термолабильности а- и -амилаз. -амилаза разрушается нагреванием до 70°, при этом а-амилаза сохраняет свою активность. Некоторое снижение активности а-амилазы, которое может быть в таких условиях, практического значения не имеет. [c.149]

Перед тем как приступить к выделению и очистке того или иного фермента, необходимо выбрать удовлетворительный тест для его идентификации и количественного определения. Прямые методы существуют лишь для очень ограниченного круга ферментов, поэтому используют способность ферментов катализировать специфическую реакцию. Чтобы иметь возможность контролировать степень очистки фермента, его активность относят на 1 мг общего белка (так называемая удельная активность ). [c.198]

Первые попытки мануального выделения нервных клеток были предприняты в 1953—1957 гг. (Lowry, 1953, 1957). Применив микроманипу-ляционные и микрохимические методы, Лоури получил ценный материал по количественной гистохимии мозга. Однако метод замораживания и оттаивания тканей, применяемый этим автором, часто дает искаженную картину из-за артефактов, которые трудно устранить. Это относится в основном к определению активности ферментов и в меньшей степени к неферментным компонентам. [c.132]

Как упоминалось выще, длину цепи полинуклеотида можно определить количественным определением концевых звеньев. В случае некоторых небольших полимеров гидролиз концевого фосфата (фосфатов) под действием очищенной фосфомоноэстеразы дает независимую оценку длины цепи из соотношения количества общего фосфора к количеству фосфора, выделенному в виде неорганического фосфата исследование оставшегося полинуклеотида уточняет природу концевых звеньев. Применение такого рода методов до некоторой степени ограничено высокой степенью чистоты, необходимой для применяемых ферментов, и изменением активности моноэстераз (и диэстераз) с изменением длины цепи полимера. Однако нуклеиновые кислоты второго и третьего типов все же были обнаружены (хотя и в гетерогенных смесях рибонуклеиновых кислот), причем нуклеиновые кислоты последнего типа, возможно, возникали главным образом в результате процессов расщепления [92]. [c.389]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология