Фосфомоноэстеразы

К первой группе относятся неспецифическая щелочная фосфомоноэстераза, отщепляющая 3-фосфат от молекул олигонуклеотидов. Фермент малоспецифичен и одинаково легко гидролизует различные субстраты 3-АМФ, 5-АМФ, рибозо-5-фосфат. Оптимум pH равен 8,6—9,5. Ионы Са+2 и Mg+ активируют энзим (Д. Н. Сахибов и соавт., 1972). [c.85]

При 100° С в 1 н. H I очень медленно гидролизуется. Используется в качестве буфера (pKi — 1,34 и рКг — 6,55) и как субстрат при изучении фосфомоноэстераз. [c.496]

Связь РНК — аминокислота лабильна, она относительно устойчива к кислотам, но очень легко расщепляется в щелочной среде. Место присоединения аминокислотного остатка к РНК точно не установлено, однако полагают, что такая связь осуществляется через свободный гидроксил у С (2) 1В терминальном рибозном остатке РНК этим может быть объяснено то интересное обстоятельство, что РНК, обработанная йодной кислотой, Не реагирует с аминокислотой однако если такую РНК снова подвергнуть действию фосфомоноэстеразы, снимающей остаток фосфата и обнажающей новую а-гликольную группировку, то реакционная способность по отношению к а-аминокислоте снова появляется. [c.265]

Все фосфатные мостикн неустойчивы в присутствии щелочи, например 0,25 н. NaOH при 25° [237]. Селективное расщепление различных соединений было достигнуто использованием фосфатаз, которые в простых субстратах специфичны по отношению к различным фосфатным связям [237]. Фосфатные группы, образующие межцепочечные мостики, после превращения в моноэфиры можно выделить в виде неорганического соединения действием фосфомоноэстераз растительного или животного происхождения. [c.175]

Негигр. иглы. 154- 155. рК 0,95 3,5 6,11. Раств-сть х.р. Н2О, ЕЮН, диоксан н.р. петр. эф., толуол. Субстрат фосфомоноэстеразы [АВВ 51, 139 (1954)]. Гидрол. контролируют по увел, поглощения при 310 нм (освобождается салициловая кисл.). салициловой кисл. 295 -н 300 нм работа при 310 нм позволяет устранить небольшое поглощение, вызванное наличием фосфата и белка. Салициловая кисл. поглощает во всем диапазоне pH при pH > 5 Ёзю 1900, при более низких pH Ё310 увел, вплоть до 3200 при pH 1. Неферментативный гидрол. протекает с макс. скоростью при pH 5,2, медл. при комн. т., заканчивается за 1 ч при SO O . Уст. в раств. при pH > 8, практически уст. при pH < 2. [c.311]

Бел. крист. Раств-сть р. HjO. Субстрат для фосфомоноэстераз, особ, из предстательной железы [Ат. J. lin. Path. 32, 88 (1959)]. При гидрол. освобождается а-нафтол, который кол-венно определяется колориметрически после соединения с солью диазония, напр, тетразотированным о-дианизидином. [c.311]

Для ДНК концевая метка может быть введена ферментативным путем. Чаще всего для этой цели используют фермент полинуклеотидкиназу, специфически катализирующую перенос остатка фосфорной кислоты от молекулы АТФ к 5 -гидроксигруппе 5 -концевого фрагмента ДНК. Этот фрагмент производится в Е.соИ, зараженной бактериофагом Т4, который содержит ген, программирующий синтез этого фермента. Если исходная ДНК содержит в 5 -положении остаток фосфорной кислоты, то его можно предварительно удалить с помощью другого фермента — фосфомоноэстеразы (щелочной фосфатазы), катализирующей отщепление ортофосфата от моноэфиров фосфорной кислоты. Чаще всего для этой цели используется фермент из Е.соИ. В целом схему введения 5 -концевой метки в ДНК можно представить следующим образом [c.267]

Применение. В гистохимии ферментов в качестве субстрата для выявления неспецифических щелочных фосфомоноэстераз [1]. [c.7]

Применение. В гистохимии ферментов в качестве субстрата для выявления неспецифичесмих фосфомоноэстераз (фосфатаз) по Боданскому [1] и Го-мори [2, 3]. [c.104]

Ирименение. В гистохимии ферментов в качестве субстрата для выявления фосфорилазы (К. Ф. 2,4.1.1) [1], амило-1,4-+-1,,6-трансглюкозидазы (фермент ветвления) [2J, фосфоглюкомутазы (К. Ф. 2.7.5.1) [3], а также неспецифнче ских щелочных фосфомоноэстераз [Пирс, 346, ЗЙ6]. [c.108]

Свойства. Темно-коричневый кристаллический порошок, растворимый а вод1р, Ирименение. В гистохимии в качестве диазосоставляющей для выявлен щелочной фосфомоноэстеразы. [c.121]

Применение. В гистохимии в смеси с формалином для фиксации фосфолипидов по Merojiy Бэкера [1], для стабилизации кислой фосфатазы [2, 3] и для выявления норадреналина методом флуоресценции [4, 5]. В гистохимии ферментов для выявления неспецифических фосфомоноэстераз по Гомори Така-матчу [6—9] и аденозинтрифосфатазы по методу Падикула —Германа [10], [c.174]

Применение. В гистохимии ферментов в ка-честве субстрата для выявления неспецифических щелочных фосфомоноэстераз [Пирс, 346] и в сочетании с нитратом свинца для выявления тиаминнирофосфатазы [1> 2]. [c.192]

Применение. В гистохимии ферментов в качестве активатора при выявЛенин неспецифических щелочных фосфомоноэстераз [Пирс, 346]. [c.209]

Яды различных видов змей содержат фосфодиэстеразу, которую обычно используют для получения нуклеозид-5 -фосфатов. 13 природных условиях фермент этот связан с большими количествами фосфомоноэстеразы, от которой его можно отделить при помощи хроматографии и фракционирования в ацетоне [39, 40]. [c.92]

Практически, однако, дело обстоит несколько сложнее. Расщепление полинуклеотидов с концевой фосфатной группой гладко протекает лишь при использовании химических методов деградации, при расщеплении же под действием ферментов существенным условием быстрого протекания реакции является отсутствие фосфатной группы на З -конце полинуклеотидной цепи в случае фосфодиэстеразы змеиного яда и на 5 -конце—в случае фосфодиэстеразы селезенки (см. стр. 67). По этой причине перед ферментативным расщеплением необходимо удаление концевых фосфатных групп действием фосфомоноэстеразы, что приводит к исчезновению специфического фрагмента, образующегося из фосфорилированного конца цепи. [c.46]

Наконец, для специфического введения метки по 5 -концевой гидроксильной группе в ДНК можно использовать специфическую ферментативную реакцию — фосфорилирование под действием Р-аденозин-5 -трифосфата 204-206 3.5,3 реакция катализируется ферментом полинуклеотидкиназой из Es heri hia oli, инфицированной фагами Т2 или Т4. В том случае, если полимер оканчивается остатком нуклеозид-5 -фосфата, концевая фосфатная группа может быть удалена обработкой фосфомоноэстеразой. [c.47]

Существование молекул ДНК в циклической форме было впервые обнаружено при электронно-микроскопических исследованиях. Ковалентный характер связи в упомянутых выше соединениях доказывается неспособностью их подвергаться гидролизу под действием экзонуклеаз (см. стр. 67) даже в присутствии фосфомоноэстеразы. Появление единичных разрывов в полинуклеотидной цепи циклических ДНК под действием эндодезоксирибонуклеаз приводит к характерным изменениям конформации молекул (см. гл. 4), которые могут быть обнаружены по изменению коэффициента седиментации, вязкости и при наблюдении под электронным микроскопом, причем измеренная длина молекул, а следовательно, и молекулярный вес при этом не изменяются. [c.48]

Наиболее общим методом выделения редких компонентов РНК является, по-видимому, метод, предложенный Холлом Он состоит в ферментативном расщеплении РНК до нуклеозидов под действием смеси фосфодиэстеразы змеиного яда и щелочной фосфомоноэстеразы из Es heri hia oli. Смесь нуклеозидов разделяют далее с помощью распределительной хроматографии на целите. Мягкость условий расщепления полимера сочетается здесь с высокой эффективностью разделения мономеров, что и позволило обнаружить целый ряд неизвестных ранее редких компонентов РНК. [c.51]

Фосфомоноэстеразы различаются по оптимумам pH, необходимым для их действия. Имеются кислые фосфатазы, у которых оптимум pH находится около 5,6—6,0, и щелочные, оптимум pH которых 8,5—9,0. [c.153]

В то время было известно, что рибонуклеиновые кислоты могут быть гидролизованы щелочью до мононуклеотидов, которые, как тогда считали, были исключительно нуклеозид-3 -фосфатами. Общий план строения нуклеиновых кислот с 2 —З -фосфодиэфирными связями был предложен Левиным и Типсоном [71], причем было сделано допущение, что 2 -связь гораздо менее устойчива, чем З -фос-фоэфирная связь, и обусловливает таким образом образование при щелочном гидролизе исключительно нуклеозид-З -фосфатов. Однако, когда рибонуклеиновую кислоту обработали змеиным ядом (который содержит фосфомоноэстеразу, специфичную для нуклеозид-З -фосфатов), то получили неорганический фосфат и нуклеозиды [72, 73]. Далее, изучение рибонуклеиновой кислоты методом дифракции рентгеновских лучей, проведенное Астбери, позволило предположить, что основной межнуклеотидной связью является скорее 2 —5 или 3 —5, чем 2 —3 [74]. С другой стороны, прямого химического доказательства наличия 5 -фосфатной связи не существовало, и отсутствие 5 -фосфорилированных производных в кислых гидролизатах рибонуклеиновой кислоты, несмотря на их известную стабильность, действительно находилось в явном противоречии с предположением о 2 (или 3 ) — 5 -межнуклеотидной связи. Устойчивость дезоксирибонуклеиновой кислоты (неизбежно 3 —5 -связанной) по отношению к щелочи в противоположность неустойчивости рибонуклеиновой кислоты также указывало, как считали в то время, на различие в типах связи. В противоположность этому при действии панкреатической рибонуклеазы на рибонуклеиновую кислоту получается смесь олигонуклеотидов, устойчивых к перио- [c.372]

Хотя на данном этапе методы химического гидролиза не позволяют сделать выбора между 3 —5 - и 2 —5 -межнуклеотидными связями, доказательства, по-видимому, исключительного присутствия 3 —5 -структуры были получены на основании исследований ферментативного гидролиза рибонуклеиновых кислот и простых нуклеотидных производных. Из различных источников был выделен ряд нуклеаз, которые катализируют гидролиз нуклеиновых кислот на более мелкие фрагменты. Панкреатическая рибонуклеаза [93] — один из группы ферментов, обнаруживающих высокую специфичность к рибонуклеиновым кислотам,— была тщательно изучена и дано объяснение механизма ее действия. Ранние исследования показали, что фермент действует по пиримидиннуклеозидным звеньям, так как крупные педиализуемые остатки после ферментативного расщепления рибонуклеиновой кислоты значительно обогащены пуринами [94] кроме того, выделяются пиримидиновые мононуклеотиды, но не обнаружено свободных пуриновых мононуклеотидов [75, 95, 96]. Дальнейшие исследования кислотного или щелочного гидролиза продуктов, полученных в результате последовательной обработки рибонуклеиновой кислоты рибонуклеазой и фосфомоноэстеразой предстательной железы, привели к заключению, что специфичность рибонуклеазы такова, что нуклеиновые кислоты расщепляются ею с образованием смеси пиримидиновых мононуклеотидов и пуриновых олигонуклеотидов, содержащих в качестве концевой единицы пиримидиновый нуклео-зид-2 (или 3 )-фосфат [75, 97]. [c.377]

Как упоминалось выще, длину цепи полинуклеотида можно определить количественным определением концевых звеньев. В случае некоторых небольших полимеров гидролиз концевого фосфата (фосфатов) под действием очищенной фосфомоноэстеразы дает независимую оценку длины цепи из соотношения количества общего фосфора к количеству фосфора, выделенному в виде неорганического фосфата исследование оставшегося полинуклеотида уточняет природу концевых звеньев. Применение такого рода методов до некоторой степени ограничено высокой степенью чистоты, необходимой для применяемых ферментов, и изменением активности моноэстераз (и диэстераз) с изменением длины цепи полимера. Однако нуклеиновые кислоты второго и третьего типов все же были обнаружены (хотя и в гетерогенных смесях рибонуклеиновых кислот), причем нуклеиновые кислоты последнего типа, возможно, возникали главным образом в результате процессов расщепления [92]. [c.389]

Ступенчатой деградации по такому пути был подвергнут ряд ди- и тририбопуклеотидов, структура которых таким образом была твердо установлена в принципе метод можно применить и к олиго-рибонуклеотидам большего размера [188]. Так, обработка АЗ ф5 ГЗ ф5 ЦЗ ф фосфомоноэстеразой дает соответствующий три-мер со свободной цис-гликольной группой. В результате периодатного окисления последнего получается диальдегид, который при pH 10,5 быстро распадается на динуклеотид АЗ ф5 ГЗ ф и производное цитозина (превращающееся при кислотном гидролизе в цитозин). Повторение всего процесса с динуклеотидом дает гуанин и аденозин-З -фосфат. Кроме определения нуклеотидной последовательности, этот метод позволяет также отличать 3 —5 -межну-клеотидную связь в динуклеотидах от 2 —5 -связи, так как при его применении миграции фосфата не происходит. [c.397]

Было приведено более убедительное доказательство присутствия щелочеустойчивых динуклеотидных участков в рибонуклеиновой кислоте. Такая устойчивость является результатом присутствия 2 -замещенных соединений, вероятно 2 -0-метильных производных нуклеотидов [119, 200, 201]. Деградация изолированных динуклеотидов посредством обработки фосфомоноэстеразой с последующим периодатным окислением и элиминированием фосфата приводит к замещенным мононуклеотидам после дефосфорилирования последние образуют соединения нуклеозидного характера, которые не окисляются перйодатом. По своему поведению при хроматографии углеводный компонент идентичен 2(или 3)-0-метилрибозе [200]. Метилирование 2 -гидроксильных групп в рибонуклеиновой кислоте должно сообщать ей устойчивость к расщеплению как щелочью, так и панкреатической рибонуклеазой [202]. [c.401]

Непосредственно выход разрывов продольных связей при облучении водных растворов ДНК был определен при помощи фосфомоноэстеразы, которая выделяет неорганический фосфат из концевых фосфатных групп, образующихся в месте каждого разрыва. Этот выход зависит от концентрации ДНК и равен [c.31]

Смотреть страницы где упоминается термин Фосфомоноэстеразы: [c.85] [c.177] [c.138] [c.313] [c.313] [c.314] [c.135] [c.9] [c.9] [c.196] [c.96] [c.236] [c.236] [c.236] [c.588] [c.373] [c.385] [c.434] [c.438] [c.443] [c.205]

Биоорганическая химия (1987) -- [ c.314 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.86 , c.138 , c.140 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.633 ]

Биохимия Издание 2 (1962) -- [ c.180 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.299 ]

Основы гистохимии (1980) -- [ c.177 ]

Гены и геномы Т 2 (1998) -- [ c.221 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология