Разрезание слоев геля

Разрезание слоев геля [c.139]

Рис. 9.6. Продольное разрезание пластины геля, позволяющее окрашивать белки в поверхностном слое геля.

Для анализа антигенов, разделенных с помощью электрофореза или электрофокусирования в полиакриламидном геле, разработаны многочисленные методы иммунодиффузии. Так, для этой цели можно использовать различные варианты двойной иммунодиффузии. Цилиндрические столбики геля разрезают продольно на две половинки (см. разд. 1.15.6), а из пластин нарезают полоски, содержащие разделенные антигены. Разрезанный гель помещают на стеклянные пластинки, заливают их теплым раствором агара и дают ему застыть. Канавки для антител располагают на соответствующем расстоянии от полиакриламидного геля. Как только полиакриламидный гель покроется слоем агара толщиной 1 мм, в непосредственной близости от него сразу же вырезают канавку для антисыворотки. Если для анализа используют разрезанные вдоль столбики полиакриламидного геля, то их кладут на слой агарового геля и в нем рядом с полоской геля по обеим ее сторонам быстро вырезают канавки для антител. Преципитаты образуются под полоской полиакриламидного геля. Столбик полиакриламидного геля можно также разрезать в поперечном направлении на диски и проанализировать присутствующие в них антигены методом двойной радиальной диффузии 203, 394]. [c.244]

Гистограммы, полученные при измерении только радиоактивных зон, легче интерпретировать, чем гистограммы, полученные при разрезании всего слоя геля на участки шириной 1—2 мм. Это иллюстрируют рис. 5.4 и 5.5, где приведены электрофоретограммы белков, меченных Ш и С. [c.139]

Для изучения четвертичной структуры НАД-киназы из скелетных мышц кролика использовали препараты фермента, очищенные в 150—300 раз. Тремя независимыми методами электрофорезом в однородном геле и в градиенте концентрации полиакриламидного геля, путем разделения в тонком слое сефадекса С-200, с помощью гель-фильтрации через колонку с сефадексом С-200 — была обнаружена большая гетерогенность препарата в отношении НАД-киназы [2, 4]. Локализацию фермента в геле определяли по измерению активности в элюатах, полученных после разрезания столбика геля на диски толщиной 2 мм. При это оказалось, что по данным диск-электрофореза в однородном геле ферментативной активностью обладают четыре зоны, характеризующиеся значениями Rf 0,1, 0,52, 0,73 и 0,98. Повторный электрофорез белка с электрофоретической подвижностью, близкой к 1,0, после его элюции и кондентрирования обнаружил несколько белков с более низким, чем у исходного, значением Rf (0,73, 0,52, 0,07). [c.137]

В работах [21—24] описаны различные приспособления для разрезания геля, которые отделяют участки заданного размера, причем для получения хорошего разрешения обычно вырезают участки слоя шириной 1—2 мм. Гинджери [25] рассмотрел преимущества и недостатки таких устройств для разрезания геля цилиндрической формы и описал конструкцию и работу усовершенствованного прибора, позволяющего более широко варьировать толщину отрезаемых кусочков геля. [c.139]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология