Агар L для верхнего слоя

Большая осторожность необходима и в обращении с высокотоксичными мутагенами, обладающими канцерогенными свойствами. Исследования этих веществ лучше всего проводить в специально отгороженном от остальной лаборатории помещении. Взвешивание опасных материалов и разлив по чашкам агара верхнего слоя, содержащего мутагены, нужно проводить под тягой. Инкубируют пробы также под хорошей тягой, причем вытягиваемый воздух должен поступать в канал, не сообщающийся с общим каналом тяги лаборатории. Сотрудники должны проводить эксперименты в лабораторных халатах и перчатках, а при работе с летучими препаратами использовать респираторы. [c.53]

Оптимальная конечная концентрация эритроцитов—1% (0,1 мл 20%-ной суспензии на 2 мл агара верхнего слоя). При более низких концентрациях наблюдаются более крупные зоны гемолиза, но число их при этом не возрастает. [c.294]

Определение общего числа бактерий. Приготовленный раствор (суспензию, эмульсию) образца вносят по I мл в каждую из двух пробирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до температуры от 45 до 50 °С среды № 1. Быстро перемешивают содержимое пробирки и переносят в чашку Петри, содержащую 15—20 мл застывшей питательной среды № 1. Быстрым покачиванием чашки Петри равномерно распределяют верхний слой агара. После застывания среды чашки переворачивают и инкубируют в течение 5 сут при температуре от 30 до 35 °С. Через 48 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают число бактериальных колоний на двух чашках, находят среднее значение и, умножая [c.196]

Двухслойный агар (после застывания верхнего слоя) [c.39]

Посев уколом в иол)"жидкий агар через верхний слой. Через сутки после учета результатов определяют продук- [c.234]

Метод посева в агар пробу вносят пипеткой в пустую стерильную чашку Петри, в которую затем вливают расплавленный, но остуженный до температуры 45°С агар содержимое осторожно перемешивают и дают агару застыть. 2. Метод посева на поверхность агара небольшие (0,1 мл) объемы разбавленной культуры вносят пипеткой непосредственно на поверхность затвердевшего агара в чашке Петри и затем клетки распределяют по поверхности с помощью стеклянного или тефлонового шпателя. 3. Метод посева в тонком слое разбавленную культуру вносят в пробирки с небольшим объемом (2,5— 3,5 мл) расплавленного агара (0,6—0,75%), затем разливают по стерильным чашкам, уже содержащим один слой застывшего агара, и дают застыть верхнему слою. [c.458]

Снимают верхний слой агара стерильной лопаточкой в пробирку с завинчивающейся крышкой, содержащей 0,5 мл хлороформа. [c.45]

Постановка теста заключается в смешивании бактериальных клеток с препаратом ферментов печени, полученным после осаждения митохондрий, и предполагаемым мутагеном в агаре, предназначенном для верхнего слоя, с последующим наслаиванием смеси на соответствующий минимальный агар в чашке. Существует и другой вариант, когда исследуемый агент либо в кристаллической форме, либо в каплях на дисках фильтровальной бумаги, наносят на поверхность агара, в верхнем слое которого присутствуют бактерии и ферментный препарат. Летучие соединения можно изучать при инкубации чашек, содержащих бактерии и микросомы, в эксикаторе, в замкнутое пространство которого введено исследуемое вещество. Описание дополнительных деталей постановки эксперимента в данном случае см. в работе [8]. [c.49]

Осторожными движениями покачивают чашку, чтобы верхний слой агара распределился равномерно. Вся процедура в целом занимает не более 20 с. [c.52]

Если мутагены нужно проверить нанесением на диски, их не включают в состав смеси верхнего слоя агара, а наносят позже по нескольку кристаллов, растворенных в воде, спирте или диметилсульфоксиде, на поверхность стерильных бумажных дисков диаметром 6 мм. Для некоторых веществ этот метод мало эффективен, вероятно, из-за их адсорбции на фильтре. В некоторых случаях мутагены наносят непосредственно на поверхность ага- [c.52]

Агар для верхнего слоя [c.60]

После высушивания гранулы диспергируют в 0,02 М фосфатном буфере с помощью аппарата для измельчения тканей и ультразвукового генератора для получения стабильной концентрированной суспензии. Суспензию стерилизуют автоклавированием и хранят в холодильнике. Расчет количества концентрированной суспензии, которое необходимо добавить в расплавленный агар для получения конечной концентрации 0,25% (вес/объем) в верхнем слое, приведен в разд. 20.1.50. [c.90]

Будьте осторожны, чтобы не захватить верхний слой агара. Если это произойдет, то смойте агар на этапе 7. [c.119]

Посейте штрихом фаг на бактериальный газон (50 мкл насыщенной бактериальной суспензии в 4 мл верхнего слоя агара). Инкубируйте чашки в течение ночи. [c.40]

Верхний слой агара [c.259]

После смешивания среды и агара добавляют клетки, суспензию перемешивают и разливают по пластиковым чашкам Петри (диаметр 35 мм), содержащим нижний слой агара. Если готовят 50 чашек, содержащих идентичный верхний слой агара, то удобнее всего добавить необходимое число клеток к 50 мл содержащей агар среды, перемешать суспензию и разлить ее по чашкам. Если готовят 5 различных групп по 10 чашек, то лучше сначала внести клетки в пробирки на 15 мл [c.259]

Этот гель должен быть приготовлен в день опыта. Раствор агара (1,4%-ный) в дистиллированной воде автоклавируют, охлаждают на водяной бане до 45°С и смешивают с равным объемом подогретого до 45°С двойного концентрата среды Игла. Конечная концентрация агара в верхнем слое составляет, таким образом, 0,7%. Процедуру можно ускорить, заменив автоклавирование кипячением. В этом случае суспензию агара нужно кипятить до появления пены, после чего уменьшить подогрев и, когда пена опадет, продолжать кипячение. Такую обработку нужно повторять до тех пор, пока не перестанет образовываться пена или по крайней мере будут только крупные пузыри. Обычно этого удается достичь за 5 мин. [c.291]

Через определенный промежуток времени антиген диффундирует в агар. В условиях относительного избытка антигена в агаре образуется полоса преципитации, которая медленно мигрирует от границы, разделяющей агар и раствор антигена, в нижние слои агара. Миграция полосы обусловлена диффузией антигена в агаровом геле, в результате которой постепенно увеличивается концентрация антигена между полосой преципитации и верхней границей агарового слоя, т. е. выше так называемого фронта преципитации. С увеличением концентрации антигена происходит не только продвижение фронта преципитации вниз, но также и растворение преципитата у верхнего края полосы. [c.128]

Готовят 100 мл исходного раствора агара для верхнего слоя, содержащего 0,65% агара и 0,5% Na l (разд. 13.9.20). Добавляют к нему L-гистидин-НС и биотин до конечной концентрации 0,05 мМ каждый (приливают 10 мл исходного раствора с концентрацией обоих веществ 0,5 мМ к 100 мл агара верхнего слоя) и хранят при 45 °С до использования. Благодаря присутствию небольшого количества гистидина бактериальные клетки способны несколько раз поделиться, что усиливает мутагенный эффект исследуемых соединений. [c.50]

Обычно в случае постановки опыта с посевом в чашки с агаром к 2 мл агара верхнего слоя (разд. 13.9.20) при 45 °С добавляют 0,1 мл проинкубированной в течение ночи в бульоне Oxoid (разд. 13.9.7) культуры штамма, на котором собираются вести испытания. К этим компонентам добавляют также 100 мкл (или больше) испытываемого вещества и 0,5 мл смеси S-9. [c.52]

Вещество обычно считается немутагенным, если 1 мг этого вещества при исследовании включением в агар не дает двукратного увеличения числа обратных мутаций по сравнению с фоном спонтанных обратных мутаций. Некоторые вещества при стандартной постановке пробы включением в агар проявляют слабую мутагенность. Для таких соединений чувствительность пробы можно повысить, проведя 30-мин преинкубацию в растворе перед посевом. Чтобы провести преинкубацию, смешивают в указанной последовательности в стерильной стеклянной пробирке 0,1 мл раствора исследуемого вещества, 0,5 мл смеси S-9 и 0,1 мл бактериальной культуры. Инкубируют 30 мин при 30 °С (или 20 мин при 37 °С), слабо перемешивая. Добавляют 2 мл агара верхнего слоя (разд. 13.9.20), перемешивают и выливают в чашку с нижним слоем минимального агара М56 (разд. 13.9.10). Инкубируют и учитывают колонии, так же как в случае стандартной процедуры. [c.54]

Используют чашк И Петри или прямоугольные лотки, заполненные на глубину 3—4 мм, если нет других указаний в частной статье, культуральной средой, предварительно засеянной соответствующей культурой чувствительного тест-организма, приготовленного, как описано ниже. Питательный агар может состоять из двух отдельных слоев, из которых только верхний слой может быть засеян. Концентрация тест-организ-ма должна быть подобрана таким образом, чтобы получить четкие зоны угнетения в соответствии с ответами на дозу с различными концентрациями стандарта. Если посев готовят, как описано ниже, засеянная среда обычно содержит 1 мл посевного материала на 100 мл культуральной среды. Если культура состоит из суспензии вегетативных клеток, температура расплавленной для засева агаровой среды не должна превышать 48—50° С. Следует специально отобрать чашки и лотки с плоским дном во время заполнения их устанавливают на ровной горизонтальной поверхности для обеспечения одинаковой толщины слоя среды. При использовании некоторых тест-организмов методику можно усовершенствовать, перед употреблением высушивая засеянные лотки при комнатной температуре в течение 30 мин или помещая их в холодильник при 4°С на несколько часов. [c.166]

Двуслойная комплексная среда для определения подвижности бактерий, лизиндекарбоксилазы, продукции индола [Ссл слл, 51сс1, 1065 цит, по Г. П. Калннс, 1373). 0,2% питательный агар разливают в пробирки столбиком высотой 4—5 см. Состав среды для верхнего слоя питательного бульона 100 мл, тиосульфата натрия 0,05 г, лизина 0,5 г, фосфата калия двуосновного 0,1 г, фосфата калия одноосновного 0,04 г, 1,6% щелочного раствора бромтимолового синего 0,3 мл. После стерилизации и охлаждения агара в пробирки стерильно наслоить 2 мл среды для верхнего слоя. [c.234]

Возможность выполнения этих требований ограничивается возрастанием сопротивления при фильтрации жидкости. В колонку приливают 1.5—3 мл раствора веществ, имеющих различный молекулярный вес. При быстром наступлении равновесного распределения фильтруемых веществ между свободным растворителем Уо и иммобильным растворителем геля в верхнем слое колонки каждая фракция распределяется в грануле в соответствии с величиной своего молекулярного веса, а следовательно, и своей скорости диффузии в набухших гранулах. Проницаемость геля может иметь несколько уровней в зависимости от его строения и степени набухания. Вблизи поперечных связей между продольными цепями полимерной сетки гель ироницаем только для фракций с наиболее низким молекулярным весом. Скорость диффузии каждой фракции в грануле набухшего геля прямо пропорциональна диаметру гранул и степени их набухания и обратно пропорциональна размеру молекул вещества, составляющего данную фракцию. Примером может служить следующее исследование скорости диффузии белков из водного раствора в набухший гидрофильный гель из агара в зависимости от молекулярного веса фракции I ] [c.31]

При условии низкого содержания кислорода микроаэрофилы можно выращивать и в жидких, и на твердых средах, но в этом условии нет необходимости при использовании полужидкой среды с 0,1 —0,4% агара. Гелеобразующие вещества расслаивают среду таким образом, что конвекционные потоки не способны смешивать богатые кислородом верхние слои среды с нижними. Единственным путем для проникновения кислорода в более глубокие слои пробирки с полужидкой средой является диффузия. Таким образом, в пробирках с полужидкой средой создается градиент кислорода, где поверхность среды является местом наиболее высокого содержания кислорода. При инокуляции среды путем укола петлей микроаэрофилы начинают расти несколько ниже поверхности, где концентрация кислорода для них наиболее благоприятна. Рост начинается в форме тонких дисков, которые заметны на расстоянии нескольких миллиметров или сантиметров от поверхности. По мере роста диски становятся более плотными и перемещаются ближе к поверхности. В конце концов клетки образуют очень плотный диффузный слой непосредственно под поверхностью среды. Анаэробы, напротив, начинают расти в нижней части полужидкой среды, но впоследст- [c.369]

Метод посева в многослойный агар напоминает предыдущий. Он отличается лишь тем, что на верхний слой засеянного застывшего агара наливают ил,и наносят пипеткой дополнительный слой стерильного агара. Поэтому все колонии развиваются под поверхностным слоем агара. 5. Метод мембранных фильтров разбавленную культуру фильтруют через соответствующий предварительно тщательно промытый мембранный фильтр, который затем переносят на питательный агар в чашке или на фильтровальную бумагу, пропитанную концент рированной питательной средой. [c.458]

Этот метод используют для хранения, для трансформации космидами специальных линий клеток и для спасения космид, начавших терять стабильность (разд. 2АЛЛ). Методика описана в табл. 2.7. Для хранения упакованных космид просто отцентрифугируйте суспензию верхнего слоя агара в фаговом буфере, полученную, как указано в п. 3 табл. 2.7. Скорость центрифугирования должна быть достаточной, чтобы осадить суспендированный агар. Надосадочнуго жидкость отберите и храните над каплей хлороформа. [c.57]

В вассермановские пробирки (обычно имеющие объем 5 мл) наливают по 0,1 мл раствора ДЭАЭ-декстрана и помещают их в водяную баню при 45°С. Затем нагретой пипеткой в каждую пробирку с ДЭАЭ-декстраном наливают по 2 мл агарового геля. Держа пробирки с агаром в водяной бане (45°С), быстро вносят в них последовательно по 0,1 мл суспензии индикаторных клеток и 0,01—0,5 мл суспензии лимфоидных клеток. Затем эту смесь быстро выливают в чашку Петри на нижний слой агара. При этом необходимо быстро распределить клеточную взвесь равномерно по всей поверхности агарового слоя иначе, уплотнившись, верхний слой будет неровным. Чтобы гель застыл равномерно, чашки ставят на горизонтальную поверхность. [c.291]

Пластинки со слоем агара подсущивают в течение 1 ч при 37°С (нижний слой), затем покрывают верхним слоем агара. [c.371]

В нижний шарик налита ртуть (2—3 мл), которая покры-вяртгя слоем кало.мели (2 мм). Верхняя часгь нижнего ша-рика заполнена кристаллами хлористого калия. Верхний шарик и трубка после установки капилляра заполняются гелем агар-агара, насыщенного хлористым калием. Капилляр должен выступать из нижнего конца трубки на 5—10 мм. [c.184]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология