Метод радиальной иммунодиффузии

Определение количества секретируемого иммуноглобулина методом радиальной иммунодиффузии [c.157]

Чтобы установить, какова точность иммуноанализа, мы оценили аналитическое обнаружение и провели сравнительные исследования. Анализу были подвергнуты двенадцать образцов сыворотки, предварительно исследованных методом радиальной иммунодиффузии, причем определения были повторены трижды. Средний сигнал составил 96,7% от соответствующего стандартного сигнала. Аналитическое обнаружение равно в среднем 103%. [c.167]

Идентификация полиовируса типа 3 методом одиночной радиальной иммунодиффузии [c.55]

Применение этого метода позволяет определять за 20 мин IgG человека в концентрации 0,5 мкг/мл, а получаемые результаты хорошо согласуются с данными радиальной иммунодиффузии, продолжающейся 24 ч (Ngo, 1981). [c.18]

Простая радиальная иммунодиффузия дает возможность количественно определять антигены (Аг). В агаровый гель добавляют антитела (Ат), затем наливают его на предметные стекла и оставляют для застывания. В застывшем геле вырезают лунки и вносят в них стандартный объем различных по концентрации растворов антигена. Стекла оставляют не менее чем на 24 ч. В течение этого времени антиген диффундирует в гель и образует с антителами растворимые комплексы (при избытке антигена). Комплексы продолжают диффундировать, связывая все больше антител, пока не будет достигнута точка эквивалентности и не произойдет осаждение комплексов с образованием кольца. По радиусу зоны, ограниченной кольцом преципитации, определяют ее площадь. Величина площади пропорциональна концентрации антигена, которую вычисляют с помощью калибровочной кривой (график внизу). Для определения концентрации антител применяют тот же метод, но в обратной постановке, т. е. в гель добавляют антиген, а антитела вносят в лунки. [c.529]

Для анализа антигенов, разделенных с помощью электрофореза или электрофокусирования в полиакриламидном геле, разработаны многочисленные методы иммунодиффузии. Так, для этой цели можно использовать различные варианты двойной иммунодиффузии. Цилиндрические столбики геля разрезают продольно на две половинки (см. разд. 1.15.6), а из пластин нарезают полоски, содержащие разделенные антигены. Разрезанный гель помещают на стеклянные пластинки, заливают их теплым раствором агара и дают ему застыть. Канавки для антител располагают на соответствующем расстоянии от полиакриламидного геля. Как только полиакриламидный гель покроется слоем агара толщиной 1 мм, в непосредственной близости от него сразу же вырезают канавку для антисыворотки. Если для анализа используют разрезанные вдоль столбики полиакриламидного геля, то их кладут на слой агарового геля и в нем рядом с полоской геля по обеим ее сторонам быстро вырезают канавки для антител. Преципитаты образуются под полоской полиакриламидного геля. Столбик полиакриламидного геля можно также разрезать в поперечном направлении на диски и проанализировать присутствующие в них антигены методом двойной радиальной диффузии 203, 394]. [c.244]

Концентрацию иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови обычно определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Титр специфических АТ (изогемагглютинины групп крови, АТ, образующиеся после вакцинации, например про-тивокоревые или противостолбнячные, и др.) в сыворотке крови выявляют с помощью различных иммунологических реакций РА, РНГА и др. Для определения катаболизма иммуноглобулинов используют радиоизотопные метки. [c.90]

В анализе используют реагенты и образцы следующего состава реагент 1 — конъюгат [ПХ — антитела против IgG человека] в разведении 1 250 реагент 2—10 М активированный ЛДАДХФ и 10 М пероксид водорода дистиллированную деионизованную воду для несущего потока стандартные растворы— очищенный кристаллический IgG человека в различных концентрациях образцы сыворотки в разведении 1 700 (для одного определения требуется 0,1 мкл сыворотки), предварительно подвергнутые анализу методом радиальной иммунодиффузии ( Tri — Partigen , albio hem). [c.165]

Методом радиальной иммунодиффузии удобно характеризовать как чистоту раствора антигена, так и степень моноспецифичности антисыворотки (полноту очистки индивидуальных антител). [c.127]

Строго говоря, площадь под пиком преципитата пропорциональна количеству внесенного антигена и обратно пропорциональна концентрации антител в геле. Если допустить, что высота пика преципитата пропорциональна его площади, то можно с достаточной точностью определить количество антигена путем измерения расстояния от верхнего края лунки до вершины пика. Для получения калибровочной кривой на гель наносят ряд стандартных антигенов с известной концентрацией. Сколари и др. [1156] обнаружили, что линейная зависимость между площадью пика и количеством антигена сохраняется в более широком интервале концентраций антигена по сравнению с такой же зависимостью между концентрацией антигена и высотой пика. Точность метода зависит от того, насколько близки между собой размеры молекул и величина зарядов исследуемых и стандартных антигенов. Воспроизводимость количественных определений наиболее высока в том случае, когда образуются симметричные пики преципитации с отчетливыми внутренними и внешними границами. Стандартная ошибка может при этом составлять 2—5%, несколько превышая ошибку, которую дает простая радиальная иммунодиффузия при оптимальных условиях [807]. [c.250]

Аналогичный подход можно использовать для сравнения титра исследуемой антисыворотки с контрольной. Данный метод известен под названием обратной реакции радиальной иммунодиффузии (ОРИД), когда аитисыворотка из лунок диффундирует в агар, содержащий антиген. [c.208]

Для исследования репродукции вируса применяют также яммунофлуоресцентные методы [10], но рутинным методом, используемым в нашей лаборатории для выявления очищенного вирусного антигена, является одиночная радиальная иммунодиффузия [3]. [c.55]

В рассмотренном методе обнаружения антигенов после электрофореза в ПААГ путем их диффузии в слой агаройы иммунная реакция следовала за окончанием этой диффузии, когда снятую с ПААГ агарозную реплику вымачивали в специфической антисыворотке. Два процесса можно совместить во времени, если антисыворотку заставить диффундировать в гель навстречу диффузии антигена из белковых зон, полученных в результате электрофореза [Grabar, Williams, 1953]. При этом можно ожидать образования полос преципитации комплексов антиген — антитело, подобно тому как это имеет место при двойной радиальной иммунодиффузии по методу Ухтерлони. Для удобства наблюдения раствор антисыворотки следует заливать не сверху, а рядом с треком электрофореза, на некотором расстоянии от него, с тем чтобы оставалась свободная полоса ПААГ, где и будет происходить диффузия антигенов и антител навстречу друг другу. Поскольку расположение полос антигенов после электрофореза заранее неизвестно, антисыворотку, очевидно, придется заливать не в лунку, а в канавку, идущую вдоль всего трека. Кроме того, антисыворотку следует вносить в такую канавку только после окончания электрофореза, иначе преждевременная диффузия антител в гель может помешать завершению процесса электрофоретического фракционирования смеси белков. [c.134]

Методы, основанные на диффузии в геле, позволяют определять антигены и антитела лищь качественно, количественную же оценку реагирующих компонентов проводят разработанным позднее методом простой радиальной иммунодиффузии (рис. 29.4). [c.528]

Для гуморального типа иммунного ответа характерна выработка антител, которые являются показателями функциональной активности В-звена иммунной системы [87,98,99]. Общий пул иммуноглобулинов в сыворотке крови неиммунизированных крыс определяли методом двойной радиальной иммунодиффузии в агаровом геле [100-101]. В лунки 24-х луночного планшета разливали по 2 мл 1,5% агара 01 ко, лунки вырезали шаблоном. В центральную лунку разливали по 20 мкл гиперим-мунной преципитирующей сыворотки производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, а в периферийные - по 20 мкл двухкратных разведении исследуемой сыворотки. После 24 часовой инкубации при комнатной температуре учитывали реакцию по количеству [c.226]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология