ДНК можно денатурировать и ренатурировать

ДНК МОЖНО денатурировать и ренатурировать [c.35]

Если подвергнуть ДНК достаточно сильному денатурирующему воздействию (например, сильно увеличив pH), очень быстро, за 10 с, разрушатся все пары оснований. Однако разделения и раскручивания цепей при этом не произойдет — при понижении pH до исходной величины цепи быстро ренатурируют. Для раскручивания цепей необходимы на порядки большие времена. Можно предположить, что полученная при быстрой щелочной денатурации форма отвечает состоянию, при котором комплементарные цепи сильно перекручены. Для того чтобы эти цепи могли разойтись, должно осуществиться вращение, являющееся лимитирующим этапом. Вопрос об учете трения при оценке полного времени расплетания спирали подробно обсуждается в ряде оригинальных работ (ссылки можно найти в работе Рекорда и Зимма, 1972). Для анализа этого явления было использовано много различных приближений, и все результаты говорят о том, что полное время расплетания должно увеличиваться по крайней мере пропорционально квадрату молекулярной массы. На опыте эта зависимость изменяется от линейной до квадратичной. [c.347]

Рис. 27-15, Принцип гибридизационного теста. Два препарата ДНК, выделенной из организмов разных идов, нагревают так, что они полностью денатурируют и их цепи расходятся. При смешивании этих препаратов и медленном охлаждении комплементарные цепи ДНК каждого вида на йдут друг друга и будут ренатурировать с образованием нормальных дуплексов. Если между двумя ДНК существует значительная гомология по последовательности, то возможно образование гибридных молекул, представляющих собой частичные дуплексы. Чем выше степень гомологии, тем больше вероятность образования гибридов. Содержание гибридов в смеси можно измерить разными способами, в частности с помошью хроматографии или центрифугирования в градиенте плотности. Обычно, чтобы упростить процедуру измерения, одну из ДНК метят радиоактивным изотопом.

При нейтральном или близких к нему значениях pH большинство вирусов диссоциирует лишь при добавлении сильных денатурирующих агентов. Добавлением мочевины или формамида до концентрации 8—10 М при pH 7—8 можно вызвать диссоциацию многих вирусов, а для отделения высвободившегося белка от вирусной РНК часто прибегают к методу осаждения белка сульфатом аммония. Белок ВТМ, выделенный таким способом при 20%-ном насыщении сульфата аммония, нерастворим даже в присутствии дитиотреитола, предотвращающего самоокисление. Денатурированный белок ВТМ успешно ренатурирует при растворении в 8 М растворе мочевины и последующем диализе против 0,02 М фосфата при pH 6 [7]. Под действием мочевины ренатурация белка может произойти даже после его обработки галоидоводородными солями гуанидина (4 М), которые относятся к более сильным денатурирующим агентам. У таких детергентов, как додецилсульфат натрия, наблюдается тенденция слишком прочно связываться с белками, что и является основным недостатком при их использовании для выделения белков. [c.50]

Это затруднение можно преодолеть, если иммобилизовать один из препаратов ДНК таким образом, чтобы он не мог ренатурировать. Для этой цели используют ни-троцеллюлозные фильтры, которые адсорбируют одноцепочечную ДНК и не адсорбируют РНК. Фильтры с адсорбированной одноцепочечной ДНК обрабатывают специальным образом, для того чтобы предотвратить дальнейшую адсорбцию одноцепочечных молекул. На рис. 2.16 показана схема эксперимента, в котором препарат ДНК денатурировали, полученные одноцепочечные молекулы адсорбировали на фильтре и затем добавляли второй препарат денатурированной ДНК (или препарат РНК). Связывание второй нуклеиновой кислоты происхо- [c.37]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология