Белки осаждение на сульфате аммони

В случае хранения в замороженном состоянии при —20 °С рекомендуется разделять антисыворотку на партии небольших объемов, чтобы не подвергать ее многократному замораживанию и размораживанию. При использовании некоторых методов необходимо, чтобы иммуноглобулины IgG были отделены от других сывороточных белков. Осаждение сульфатом аммония или комбинирование этой операции с ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [31, 36] или с аффинной хроматографией при использовании белка А, иммобилизованного на носителе [48], позволяет легко, но более или менее тщательно очистить эти иммуноглобулины. Иммуноаффинная хроматография, используя очищенный иммобилизованный антиген, дает возможность производить очистку специфических антител белка при разделении фракции IgG или даже антисыворотки. [c.97]

Высаливание. Для высаливания белков из растворов применяются хлорид натрия, сульфат натрия, ацетат натрия, сульфат магния, ацетат калия, хлорид кальция, нитрат кальция и сульфат аммония. Некоторые из перечисленных солей высаливают белки не только при насыщении ими раствора определенные белки высаливаются и при достаточно низких концентрациях солей. К таким солям относится сульфат аммония. С помощью этих солей возможно дробное осаждение белков [50]. Условия, при которых происходит осаждение сульфатом аммония, настолько характерны для отдельных белков (за редкими исключениями), что это свойство белков можно сравнить с растворимостью, характеризующей кристаллические вещества. [c.530]

Осаждение сульфатом аммония часто применяется в качестве предварительной стадии очистки белка, например с целью концентрирования или отделения от сопутствующих примесей. Иногда этот прием может оказаться полезным при разделении субъединиц, в частности если они имеют различную растворимость в сульфате аммония (или в растворах других солей). [c.48]

На основании опыта работы лаборатории авторов было найдено, что выделение очищенного белка осаждением сульфатом аммония желательно проводить при 0° и затем хроматографировать на ДЭАЭ-целлюлозе этот метод дает хорошие результаты, если быстро обессоливать пробы. За качеством препаратов следили с помощью чувствительных методов анализа N-концевых аминокислот (см. раздел 3, б). [c.220]

Условия, при которых происходит осаждение сульфатом аммония, настолько характерны для отдельных белков (за редкими исключениями), что это свойство можно сравнить с растворимостью, характеризующей кристаллические вещества. [c.356]

Несмотря на это, трудности выделения чистых белков были в значительной мере преодолены, и в настоящее время огромное количество белков, в том числе и ферментов, выделено в чистом кристаллическом состоянии. Среди методов очистки белков большую роль играет дробное осаждение сульфатом аммония, электрофорез и другие методы. [c.304]

Высаливание. Иммуноглобулины и прежде всего IgG характеризуются наименьшей степенью гидратации среди белков сыворотки. Поэтому они прежде других белков выпадают в осадок при прибавлении к сыворотке солей, энергично связывающих воду и в силу этого разрушающих гидратную оболочку белковой молекулы. Так, при концентрации сульфата аммония 34—35% насыщения из сыворотки выпадает IgG, не содержащий практически примеси других белков. Наибольшей полноты осаждения можно достичь при значении pH 7,0—7,2, т. е. близком к изоэлектрической точке наименее заряженных молекул IgG. Осажденные сульфатом аммония иммуноглобулины обычно полностью растворяются после удаления соли диализом. Простота метода и возможность с его помощью значительно увеличить удельную концентрацию иммуноглобулинов в растворе делает его одним из наиболее популярных методов выделения иммуноглобулинов. [c.239]

Количество цельной сыворотки, которое удается разделить в препаративном ИЭФ, весьма незначительно из-за избытка альбумина. Не следует наносить более 10—20 мг сывороточных белков при фокусировании в широком диапазоне pH и 80—100 мг — в узком диапазоне. Поэтому лучше предварительно очистить антитела, например, путем осаждения сульфатом аммония, препаративным электрофорезом в блоке агарозы, аффинной хроматографией или комбинацией этих методов (см. гл. 2). [c.141]

Белки от амфолитов в элюате можно отделить диализом, осаждением сульфатом аммония или гель-фильтрацией на сефадексе 0-50. При этом в раствор рекомендуется ввести до [c.65]

Белки, осажденные сульфатом аммония, почти не денатурируются после удаления соли из белкового осадка (диализом через целлофановую мембрану) его растворяют и используют для различных целей. На этом принципе основано приготовление некоторых видов концентрированных лечебных сывороток и нротивокоревого у-глобулина. [c.184]

Освободить белок от полибуфера можно осаждением сульфатом аммония или гель-фильтрацией на сефадексе G-75 (для белков с Л/ > 25 ООО). [c.336]

Смит II соавторы с помощью аффинной хроматографии очищали рецептор прогестерона человека. Содержание рецептора в матке составляет лишь 0,002% суммарного белка, и оп весьма лабилен. В качестве лиганда использовали 11-дезоксикортикостерон. Гормон сажали на Br N-активнрованную сефарозу 41 в виде конъюгата с бычьим сывороточным альбумином. Полученный таким образом аффинный сорбент инкубировали 18 ч с частично очищенным цитозолем матки, промывали 0,4 М КС1 и элюировали мкМ раствором меченного тритием прогестерона. Рецептор выходил в комплексе с гормоном. Операция обеспечивала очистку в 10 ООО раз. Вместе с предварительной 6-кратной очисткой цитозоля осаждением сульфатом аммония это позволило авторам получить гомогенный препарат рецептора [Smith et al., 1981). [c.434]

Для фракционирования экстрагированных белков можно применять также осаждение сульфатом аммония. Жубер [58] выделил фракцию (11 12) S из подсолнечника осаждением сульфатом аммония при насыщении 22—30 % и фракцию альбумина при насыщении от 40 до 80 %. Симард и Буле [107] предложили метод фракционирования посредством фракционного растворения для белков сои, конских бобов и рапса. Метод состоит в осаждении сульфатом аммония при 90 %-ном насыщении суммарных белков, экстрагированных раствором (NH4j2S04 при 57,5 %-ном насыщении, а затем в последовательном экстрагировании из полученного осадка растворами сульфата аммония уменьшающихся концентраций. У конских бобов предпочтительные зоны растворимости фракций 7S и 11S соответственно 85—75 %-ного и 70—65 %-ного насыщения, а для глобулинов сои — соответственно 90—75 %-ного и 65—55 %-ного насыщения. Наконец, зона растворимости фракции 12S белков рапса располагается между 35 и 10 %, а зона растворимости фракции альбумина 2S распадается на две соответственно 60— 35 %-ного и 20—О %-ного насыщения. [c.153]

Вместо последовательного экстрагирования можно полностью перевести в растворимую форму весь набор белков клейковины до разделения их на отдельные группы. Так, Орт и Бу-шук [142] солюбилизировали 98 % белков клейковины в смеси УМЦ — 0,1М уксусной кислоты, ЗМ мочевины, 0,01М цетилтри-метиламмоний бромида. Затем этот раствор титровали этанолом до конечной концентрации 70 % и подводили pH до 6,4, что позволяло отделить глиадины, которые оставались растворимыми, от глютенинов, нерастворимых в этой среде. Их можно также разделять методом гель-фильтрации [78]. Предложен метод [175] получения из муки очищенных глютенинов последовательными осаждениями сульфатом аммония. [c.179]

Как известно, растворимость многих биополимеров уменьшается в присутствии больших количеств неорганических солей. На этом свойстве основано, например, широко распространенное в химии белка фракционированное осаждение сульфатом аммония. Этот реагент может служить осадителем и для полисахаридов. Примером служит фракционирование с помощью сульфата аммония смеси полисахаридов, извлекаемых водой из ячменной муки . Фракционирование полисахаридов растворами солей используется не очень часто, хотя является, по-видимому, довольно перспективным, ибо соли, ныгывакщие разрыв межмолекулярных водородных связей, должны вызывать меньшее соосаждение, чем органические растворители. [c.484]

Скеггс и сотр. [2137] выделили Пеи -ангиотензин I из плазмы лошади. Методика выделения состояла во фракционировании белков плазмы осаждением сульфатом аммония, разложении присутствующего в смеси ангиотензина II ангиотензиназой и последующем инкубировании смеси с ренином, выделенным из свиньи. Соединение, очищенное осаждением, экстракцией, хроматографией и противоточным распределением, обладало ак- [c.36]

Если церулоплазмин подкислить до pH ниже, чем его изоэлектрическая точка, или обработать цианидом [42], из него можно удалить медь и получить бесцветный белок. Однако при добавлении к такому белку ионов меди реставрировать исходный фермент не удается. Обратимое удаление меди из церулоплазмина достигается при обработке его диэтилдитиокарбаматом (ДТК) [43]. Предварительно медь (И), содержащаяся в белке, восстанавливается цистеином при pH 5,0 и высокой ионной силе. Образующийся затем коллоидальный комплекс ДТК с вышедшей из белка медью с помощью ультрацентрифуги отделяют от раствора апофермента. Последний может быть очищен от всплывающих примесей путем осаждения сульфатом аммония, повторного растворения и диализа. В замороженных растворах апофермент устойчив в течение нескольких месяцев. При добавлении к такому апоферменту ионов меди(1) и реокисления на воздухе из него можжо вновь получить синий церулоплазмин, который по всем своим свойствам неотличим от исходного. В процессе перевода церулоплазмина в его апофермент и обратно не было обнаружено никаких форм, в которых содержание меди было бы промежуточным, т. е. отличным от содержания ее в апоферменте и холоферменте [44]. [c.368]

Гиалуроновую кислоту можно освободить от примеси хондроитинсульфатов осаждением цетилпиридинийхлоридом или адсорбцией на ЭКТЕОЛА-целлюлозе. В крупномасштабных опытах при высаливании сульфатом аммония в присутствии пиридина [2] получают продукт, ие содержащий каких-либо сульфатов (содержание 3 << 0,1%). В настоящем разделе описан новый метод [2], предусматривающий растворение ткани при обработке пепсином и трипсином, последующее удаление белка смесью амилового спирта и хлороформа и окончательную очистку осаждением сульфатом аммония в присутствии пиридина. [c.368]

Антитоксические сыворотки подвергают очистке и концентрации методом Диаферм-3 СССР , включающим стадии ферментативного гидролиза и осаждения сульфатом аммония. В результате такой обработки удаляются балластные белки и уменьшается величина молекулы антитоксического глобулина, что обусловливает снижение анафилактоген-ных свойств. Кроме того, в очищенных сыворотках содержится большее количество антитоксина в единице объема по сравнению с исходными сыворотками. [c.619]

Препарат представляет собой сыворотку крови лошадей, гиперимму-низированных анатоксинами или токсинами lostridium botulinum типов А, В, С, Е. Противоботулинические сыворотки выпускают в виде моновалентных — каждого типа отдельно или в виде поливалентных — смесь типов А, В, С, Е. Сыворотки очищают и концентрируют методом ферментативного гидролиза и осаждения сульфатом аммония. В 0,1 г белка содержится для типа А не менее 400 МЕ, для типа В не менее 180 МЕ, для типа С не менее 400 МЕ и для типа Е не менее 400 МЕ. [c.620]

Препарат представляет собой сыворотку крови лошадей, гиперимму-низированных дифтерийным анатоксином или токсином. Сыворотку очищают и концентрируют методом ферментативного гидролиза и осаждения сульфатом аммония. В 0,1 г белка содержится не менее 1200 МЕ. [c.621]

Ионообменная хроматография и гель-фильтрация. Эти методы получили в настоящее время наибольщее распространение. Для ионообменной хроматографии, как правило, используют диэтиламиноэтилцеллюлозу (ДЭАЭ-целлюлоза) или ДЭЛЭ-сефадекс. Ионообмеини-ки уравновешивают буферными растворами низкой ионной силы (0,005—0,02 моль) при pH 7,2—8,2 с целью выделения IgG. В указанных условиях наименее заряженная часть молекул IgG не фиксируется на ионообменни-ке, в то время как другие иммуноглобулины и сывороточные белки связаны. Фракционирование можно проводить методом колоночной хроматографии или в объеме. С целью экономии ионообменника для очистки IgG целесообразно выделить первоначально из сыворотки общую глобулиновую фракцию осаждением сульфатом аммония при 50%-ном насыщении. [c.240]

В другом варианте очистки белок, осажденный сульфатом аммония или натрия, после диализа растворяют в О, М трис-НС1-буфере с pH 7,5, содержащем 1,0 М Na l, и фракционируют на колонке сверхтонкого сефакрила S-200 (Pharma ia). На колонку размером 2,5X90 см наносят 2 мл раствора белка и элюцию проводят тем же буферным раствором при скорости протекания 10—15 мл/ч. [c.51]

М МаС для уменьшения электростатических взаимодействий между белками и амфолитами. Полное освобождение от амфолитов путем обычного диализа требует длительного времени (около 32 ч). Его можно значительно сократить, если есть возможность воспользоваться диализом в биофибрах или ультрадиализом под давлением в ячейках типа Ат1соп . Если очищенные белки выдерживают осаждение сульфатом аммония, то этот способ очистки следует предпочесть как более быстрый. Амфолиты не выпадают в осадок даже из насыщенного раствора сульфата аммония. Для полного удаления амфолитов осадок белка следует трижды промыть таким же раствором сульфата аммония и лишь после этого растворять в буфере. Гель-фильтра- [c.65]

В этой реакции используется сильнощелочной раствор солей меди, который дает пурпурную окраску с белками. Основная причина, по которой эта реакция широко не используется, —это ее низкая чувствительность. Для надежного определения нужно израсходовать несколько миллиграммов образца. Метод отличается точностью, так как выход по окраске мало меняется от белка к белку. Это связано с тем, что реактив взаимодействует с пептидной цепью, а не с боковыми группами. Аммиак мешает определению, так как образует комплекс с медью поэтому в применении к фракциям, полученным путем осаждения сульфатом аммония, этот метод не дает точных результатов. Более высокая чувствительность биуретовой реакции может быть достигнута, если измерять концентрацию медьбелкового комплекса не при 540 нм, а при 310 нм, в ближней ультрафиолетовой области спектра [170]. К сожалению, при использовании этого метода необходимо ставить несколько контрольных проб, чтобы исключить поглощение посторонних веществ в этой области длин волн, из-за чего он и не нашел широкого применения. [c.311]

Многие реагенты способны вызывать осаждение или коагуляцию коллоидно-растворимых белков. Осаждение может быть обратимым и необратимым иными словами, выпавшее в осадок вещество может снова растворяться или же становится нерастворимым. Кипячение растворов белков, особенно при добавлении уксусной кислоты и хлористого натрия или других электролитов, приводит к необратимой коагуляции белка. Эта реакция является одной из наиболее часто применяемых для обнаружения растворенных белковых веществ (например, для открытия белка в моче). Необратимое осаждение вызывают также минеральные кислоты (азотная, платимохлористоводородная, фосфорновольфрамовая, фосфорномолибдеповая, метафосфорная, железосннеродистая), пикриновая кислота, таннин и соли тяжелых металлов. Белки сохраняют растворимость, если их осаждать из водных растворов спиртом и ацетоном кроме того, обратимое осаждение может быть вызвано различными нейтральными солями, например сульфатами аммония, натрия и магния. Для этого необходимы определенные концентрации солей, минимальная величина которых зависит от вида белка (ср. альбумины и глобулины). [c.397]

Депротеинизация достигается также добавлением сульфата аммония и некоторых органических растворителей [23]. Основная опасность здесь заключается в возможности адсорбции или окклюзии следовых компонентов осадком. Эффективность операции нужно конфолировать в отношении биоматериала и определяемых веществ. Обычно влияние окклюзии сводят к минимуму не добавлением осаждающих агентов к пробе, а наоборот [24]. В последнее время для осаждения белков все чаще применяют ацетонитрил, особенно удобный в тех случаях, когда раствор далее анализируют методом ВЭЖХ Для предотвращения разложения белков следует избегать нафевания, либо использовать мягкие условия их разрушения с помощью ферментов [25]. С этой целью используют трипсин, папаини другие протеиназы. Ткани печени гидролизуют алкалазой, а [c.204]

Смотреть страницы где упоминается термин Белки осаждение на сульфате аммони: [c.304] [c.233] [c.413] [c.430] [c.154] [c.162] [c.199] [c.427] [c.234] [c.213] [c.108] [c.333] [c.334] [c.622] [c.65] [c.68] [c.71] [c.226] [c.179] [c.194] [c.55]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология