Затравочные молекулы

Для синтеза коротких затравочных молекул на матрице отстающей цепи требуется особый фермент [28] [c.291]

Как уже отмечалось выше, для успешного секвенирования ДНК ферментативным методом необходимо осуществить отжиг затравочной молекулы на матрице ДНК в строго определенном месте. Последнее достигается как правильным подбором последовательности самого праймера, точного его синтеза и последующей очистки (если необходимо), так и определенной температурой отжига. В ранних рекомендациях предлагалось смесь одноцепочечной ДНК и двуцепочечного (биологического) праймера подвергать кипячению в течение 3 мин и затем выдерживать при температуре 65°С в течение 60-120 мин. Более короткие синтетические праймеры отжигали на матрице ДНК в течение 30-60 мин при температуре около 55°-65°С. Позднее стал применяться подход с постепенным понижением температуры отжига посредством помещения пробирки с матрицей ДНК и специфическим праймером в стакан с водой (100-150 мл), нагретой до 65°С, давая ей возможность произвольно остыть до 30°С. Отжиг более коротких (8-12 мерных), а также сегментированных или модульных праймеров требует понижения температуры даже до 3°-5°С. [c.75]

Микросомы, по-видимому, являются основным местом, где происходит удлинение длинноцепочечных жирных кислот. Ацил-СоА-производные жирных кислот превращаются в соединения, содержащие на 2 атома углерода больше малонил-СоА является донором ацетильной группы, а NADPH— восстановителем. Промежуточными соединениями рассматриваемого пути являются тиоэфиры СоА. Затравочными молекулами могут служить насыщенные (С,о и выше) и ненасыщенные жирные кислоты. При голодании процесс удлинения цепей жирных кислот затормаживается. При образовании миелино-вых оболочек нервных клеток в мозгу резко усиливается процесс удлинения стеарил-СоА, в результате образуются С22- и С24-жирные кислоты, входящие в состав сфинголипидов (рис. 23.10). [c.237]

Другим ключевым моментом являлся гетерогенный размер полученных фрагментов ДНК. Их гетерогенность определялась тем, что все З -концы фрагментов вновь синтезируемой цепи ДНК во всех четырех реакционных пробирках были терминированы соответствующими ддНМФ и, таким образом, представляли собой полный набор всех возможных длин в пределах секвенируемого участка, построенного ДНК-полимеразой. Что касается 5 -конца всех этих фрагментов ДНК, принадлежащих новой цепи, то он должен быть для всех фрагментов строго одинаковым и принадлежать 5 -концу исходной затравочной молекулы. [c.47]

Выше на рис. 2.2 схематично показан весь описанный выше процесс, но следует отметить, что он несколько идеализирован. При его выполнении экспериментаторов подстерегает множество нюансов, которые могут свести на нет все предварительные усилия. Так, и подготовка самой матрицы к секвенированию, и выбор затравочной молекулы, и определенное соотношение дНТФ/ддНТФ, зависящее, главным образом, от используемой ДНК-полимеразы, и мечение вновь синтезируемой цепи ДНК, и параметры секвенирующего геля, и даже особенности радиоавтографии зависят от конкретных задач и требуют тщательного исполнения. В этой связи последующие разделы этой главы и некоторые другие главы будут посвящены подробному анализу составляющих процесса ферментативного секвенирования ДНК. [c.48]

Сейчас, наверное, невозможно назвать точную дату выполнения химиками-профессионалами первого полученного ими заказа по синтезу конкретных олигонуклеотидов. Одно можно сказать с уверенностью, что заказной синтез олигонуклеотидов стал носить массовый характер только после появления метода ПЦР, так как до этого праймеры использовались преимущественно лишь при ферментативном секвенировании ДНК, для которого применялся довольно ограниченный набор векторных молекул и существовало соответственно еще меньшее количество различных мест отжига праймеров на этих векторах, поскольку разные типы векторов могут нести одинаковые участки для посадки затравочных молекул. Более того, практически все используемые в секвенировании ДНК праймеры можно было легко купить, так как они фигурировали в каталогах большинства фирм-производителей молекулярно-биологических реактивов и препаратов. Надо сказать, что эта ситуация сохранилась и поныне, и наряду с заказным синтезом, например, стандартного секвенирующего праймера экспериментатор имеет возможность приобрести как реактив готовый олигонуклеотид с такой же последовательностью (но уже дороже ). [c.72]

Смотреть страницы где упоминается термин Затравочные молекулы: [c.309] [c.309] [c.62] [c.153] [c.44] [c.46] [c.58] [c.59] [c.72] [c.74] [c.78] [c.83] [c.102] [c.135] [c.268] [c.282] [c.292] [c.295] [c.311] [c.325] [c.375]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология