Люцифераза светляка

Разиовцдности Ф.м. а. Среди наиб, чувствительных Ф.м.а. особое место занимают библюминесцентные методы (см. Люминесцентный анализ). Чаще других используют процессы, катализируемые ферментом люциферазой светляков. Система включает люциферин (ф-ла I, люциферин светляка), к-рый в присут. АТФ подвергается катализируемому люциферазой окислению кислородом с образованием люминесцирующего в-ва. Высокий квантовый выход биолюминесценции, применение полиферментных сопряженных р-ций позволяет определять нек-рые соед. при концентрации 0,001-0,1 пМ. [c.79]

Схема 7.9-5. АТФ в цикле генерации света люциферазой светляков. [c.601]

Наряду с гомогенным вариантом ЛИКА на основе конъюгатов АТР — антиген известны гетерогенные модификации. Описано применение ЛИКА для количественного определения тироксина и мио-глобина. Способ проведения анализа в этом случае включает стадии взаимодействия конъюгата с иммобилизованными антителами и отмывки. Затем связь между антигеном и АТР гидролизуется слабой кислотой, молекула интактного АТР поступает в раствор, где ее определяют с помощью люциферазы светляков. [c.127]

Очищенные люциферин и люциферазу светляков используют для измерения очень малых количеств АТР. Мерой количества АТР служит при этом интенсивность световой вспьппки. Таким способом удается определять количества АТР порядка нескольких пикомолей (10"моль). [c.432]

Изучение люциферина и люциферазы светляка показало, что они отличаются от других по своим свойствам. Фермент люцифераза был получен в кристаллическом состоянии Грином и Мак-Элроем в 1955 году, а люциферин — Битлером и Мак-Элроем в 1956 году. Эти же исследователи нашли, что для образования света светляком необходимо присутствие АТФ, люциферина, Mg, люциферазы и кислорода, растворенного в воде. [c.345]

Люцифераза светляка также была получена экстракцией сухого ацетонового порошка 10 М раствором ЕДТА при pH 7,8 на холоде. По своей химической природе она является глобулином, который не разделялся при электрофорезе, имел изоэлектрическую точку при pH = 6,2—6,3, а также был гомогенным Б аналитической ультрацентрифуге. Седиментацион-ная константа ее равнялась 5,6 при 25° и в 15 М Na l. Молекулярный вес люциферазы был найден округленно в 100 ООО. [c.345]

Ультрафиолетовая абсорбция дает пик при 270 ммк и небольшой выступ при 258 ммк, который может принадлежать связанному или адсорбированному люциферину. Температурный оптимум для люминесценции 23° с обратимой денатурацией выше этой температуры с необратимой денатурацией, начинающейся при 35°. Оптимум pH при 7,8. Функция люциферазы светляка заключается прежде всего в образовании адениллюциферина из АТФ и в связывании кислорода в форме промежуточной перекиси, чтобы обеспечить достаточно энергии для осуществления желтой флуоресценции этого организма. [c.345]

Люцифераза светляка является типом фермента, который, как и активирующие ацетат ферменты, нуждается в кофер-менте А. Она не является флавопротеином и не похожа поэтому на бактериальную люциферазу. [c.347]

В 1976 г. впервые были получены препараты иммобилизованной люциферазы бактерий. В 1977 г. люциферазу светляков иммобилизовали на стеклянных шариках и на Br N-сефарозе. Из стеклянных шариков были изготовлены стержни, с их помощью определяли 10 моль/л и более высокие концентрации НАД-Нг и АТФ. Позднее в качестве носителей применяли диализные пленки, ацетатцеллюлозные мембраны, целлюлозу и др. Иммобилизованные люциферазы имеют в 10—100 раз более высокую стабильность, их можно использовать многократно для определения АТФ, [c.95]

Скорость образования АТФ регистрируется по скорости (tga на рис. 15) увеличения интенсивности свечения при добавлении сыворотки крови к раствору, который содержит субстраты креатинкиназы, люциферин и иммобилизованную люциферазу светляков. Для того чтобы рассчитать активность креатинкиназы в международных единицах, используется внутренний стандарт АТФ. Через 2—3 мин после начала реакции вводят очень малый объем раствора АТФ с известной концентрацией и определяют /ст—скачок интенсивности, пропорциональный введенной концентрации АТФ. [c.96]

Люцифераза ) (светляка) ATP-fOj-f люциферин Биолюминесцентные анализы in vitro и in vivo Люцифераза насекомых состоит из одного полипептида и, следовательно, представляет бюлее про-стой объект для генно инженерии. Анализ такой же, как описан выше [c.100]

Биолюминесцентный иммуиоанализ. Перспективными в плане использования в иммуноанализе являются биолюминесцентные реакции, катализируемые люциферазами светляков и бактерий [c.125]

Использование метода ЛИКА на основе светляковой люциферазы в существенной мере ограничено труднодоступностью самого препарата фермента. В этой связи большой интерес представляют исследования по генной инженерии люциферазы светляков. Разработка и внедрение новой технологии прлучения препарата люциферазы с субстратной специфичностью к АТР обеспечит возможность широкого практического использования этой высокочувстви-тельной гомогенной модификации иммуноанализа. [c.129]

Биолюминесцентный иммуноферментный анализ (БИФА). В этой группе методов можно выделить методы, основанные на использовании в качестве меток люцифераз (светляков и бактерий) и методы с маркерами — ферментами, участвующими в реакциях, сопряженных с люминесцентными системами. В табл. 4.6 приведены имеющиеся модификации БИФА ряда антигенов. [c.129]

Метотрексат/люцифераза светляков А етотрексат/люцифераза бактерий [c.130]

Как и в случае любых приборов, основанных на использовании ферментов, возникает вопрос об устойчивости. Уже накоплен довольно большой опыт по использованию люцифераз, иммобилизованных на различных подложках. Препараты люциферазы светляка пока еще недостаточно устойчивы для применения в биосенсорах, однако устойчивость бактериальной люциферазы постоянно улучшается по мере появления лучших методов иммобилизации. Теперь бактериальную люциферазу можно использовать в нескольких сотнях циклов, полагая при этом, что фермент не изменился по сравнению с исходным. Сможет ли на практике этот фермент служить так долго, как немногие известные долгожители , остается предметом дальнейшего исследования. [c.501]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология