Люцифераза бактериальная

Схема 7.8-17. Использование бактериальных люцифераз в определении этанола дпя по/ ения в воз жденном состоянии комплекса с восстановленным кофактором флавина (FM Ш2). [c.552]

При использовании систем на основе бактериальной люциферазы необходимо принимать во внимание ее многокомпонентность. Условия проведения эксперимента должны быть выбраны таким образом, чтобы примеси дегидрогеназ, оксидоредуктаз, имеющиеся в образцах и реагентах, не оказывали влияния на детектирующую систему, не нарушили концентрационных соотношений в сложной полиферментной системе бактериальной биолюминесценции. [c.129]

Коммерческие препараты бактериальной люциферазы обязательно содержат необходимую NAD(P)N FMN-оксидоредуктазу в том или ином количестве, по примеси других ферментов сильно ограничивают возможности ее использования. Оба фермента нетрудно выделить из растертых в пасту культивируемых клеток в достаточно чистом для аналитических целей виде [18, 20]. [c.491]

Люцифераза (бактериальная lux) Деканал+ FMNH2 Био люминесцентные анализы in vitro и in vivo Анализ количественный и быстры , однако требуется флуориметр. Не сообщалось об интерферирующих активностях. Функционально активный фермент состоит из двух различных полипептидов [c.100]

Такая ферментативная оксигенация, происходящая в результате атаки молекулы О2 карбанионом с последующим декарбоксилированием, происходит без помощи сопряженного кофактора. Тем самым ферменты, обеспечивающие этот процесс, отличаются по механизму действия от бактериальной люциферазы, флавинзависимой монооксигеназы [299]. В бактериальной системе 4а-флавин-гидропероксид участвует в хемилюминесцентной реакции в присутствии альдегида. [c.427]

Для непрерывного испускания света бактериям необходим фермент (названный бактериальной люциферазой), длинноцепочечный алифатический альдегид или родственное ему соединение в качестве субстрата (так называемого люциферина), молекулярный кислород и восстановленный флавинмононуклео-тид (РМКгНг). Полагают, что свет испускается в виде флуоресценции возбужденным окисленным флавиннуклеотидом, образующимся в ходе реакции. [c.389]

В бактериальном свечении тоже участвует несколько компонентов восстановленный FMN, Од и альдегид с длинной цепью (тетрадека-наль). Люцифераза представляет собой монооксигеназу (см. разд. 14.11.4). Уравнение реакции можно написать следующим образом [c.290]

Люцифераза светляка является типом фермента, который, как и активирующие ацетат ферменты, нуждается в кофер-менте А. Она не является флавопротеином и не похожа поэтому на бактериальную люциферазу. [c.347]

Стрелер и Кормьер полагают, что действие альдегида пальмитиновой кислоты заключается в увеличении кажущейся постоянной ассоциации для кислорода. Возможно, что кислород сначала образует комплекс с альдегидом пальмитиновой кислоты, а затем этот альдегид и восстановленный КМН быстро адсорбируются на подходящих участках молекулы бактериальной люциферазы. В связи с приведенными данными важное значение приобретают результаты Бона и Вильямсона [17], которые показали, что в присутствии малых примесей металлов-катализаторов ацетальдегид окисляется свободным кислородом в надуксусную кислоту, которая легко присоединяет еще альдегид и образует истинную перекись последняя имеет, вероятно, следующее строение [18] [c.175]

Против такой атавистической гипотезы высказывались некоторые возражения [806]. У этих бактерий часты несве-тящиеся мутанты, так что непонятно, почему люминесценция все же сохранилась на протяжении такого огромного периода. Далее, необходимый для люминесценции бактериальный фермент люцифераза (под этим названием собрано несколько разных ферментов) способна к индукции и депрессии, что опять-таки трудно понять, если люминесценция сейчас не служит никаким полезным целям [1321]. Возможно, свет является побочным продуктом при образовании активной формы кислорода [636], которая могла бы реагировать с соединениями, с трудом поддающимися метаболизму. При этом не требовалось бы специфической индукции фермента для использования каждого субстрата и концентрация субстрата могла бы быть низкой. [c.143]

Благодаря последним достижениям в области изучения структуры и функции ферментов, значительно снижены ограничения, обусловленные труднодоступностью и нестабильностью люцифераз. Получены препараты иммобилизованных биолюминесцентных систем, которые могут быть использованы в иммуноанализе, базирующемся на реакциях светляковой и бактериальной люцифераз. [c.132]

Бактериальная люцифераэ Светляковая люцифераза Пируваткиназа Глюкозооксидаза Г люкоза-6-фосфат-дегидрогеназа Щелочная фосфатаза -Галактозидаза [c.168]

Развитию аналитических приборов на основе биолюминесценции препятствует трудность получения люциферазы. Однако последние обнадеживающие успехи в этой области, в частности клонирование бактериальной люциферазы [3] и фотопротеина экорина [7], позволяют надеяться, что такой проблемы больше не существует. Теперь можно полагать, что редкость данного организма не будет в дальнейшем сдерживать попытки разработки на его основе новых аналитических методов. [c.501]

Как и в случае любых приборов, основанных на использовании ферментов, возникает вопрос об устойчивости. Уже накоплен довольно большой опыт по использованию люцифераз, иммобилизованных на различных подложках. Препараты люциферазы светляка пока еще недостаточно устойчивы для применения в биосенсорах, однако устойчивость бактериальной люциферазы постоянно улучшается по мере появления лучших методов иммобилизации. Теперь бактериальную люциферазу можно использовать в нескольких сотнях циклов, полагая при этом, что фермент не изменился по сравнению с исходным. Сможет ли на практике этот фермент служить так долго, как немногие известные долгожители , остается предметом дальнейшего исследования. [c.501]

О. Карми с соавторами (1987 г.) предложили использовать бактериальную люциферазу для отбора промоторов и контроля за их функционированием in vivo. Преимущество такого подхода прежде всего состоит в том, что для оценки уровня люциферазы не требуется разрушать клетки (что необходимо делать при количественном анализе AT, уЗ-галактозидазы или других тест-белков), поскольку она катализирует специфическую реакцию с излучением света. Продукцию света бактериальной люциферазой можно легко измерить с помощью фотоумножителя, и она линейно зависит от количества синтезированного фермента. [c.245]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология