Контроль расщепления методика

Изотопные эффекты при использовании С незначительны, а реакции, приводящие к потере метки, очень редки. Выпускается широкий набор меченных С соединений, пригодных для непосредственного применения или в качестве исходных веществ для синтеза. Однако синтез меченых соединений с достаточно высокой для использования в работах по биосинтезу удельной активностью часто требует особого искусства [104,105] трудности связаны с необходимостью сведёния к минимуму потерь при работе с небольшими количествами веществ и с обеспечением минимального разбавления. Для получения сложных меченых метаболитов и их последующего включения часто применяют биосинтетическое включение С из простого предшественника. Эта методика, однако, неизбежно приводит к двукратному разведению меченого соединения, и, соответственно, потери должны быть очень велики. Кроме того, всегда существует опасность, что меченные таким образом природные поликетиды будут легко подвергаться биологическому расщеплению с образованием значительных количеств специфически меченного ацетата. Методы обнаружения радиоактивности настолько чувствительны, что такого рода непрямое включение может быть ошибочно принято за непосредственное включение необходим внутренний контроль, например, путем одновременного определения включения в какое-либо неродственное соединение типа жирной кислоты. По указанным причинам результаты таких исследований не должны содержать никаких неоднозначных данных, только тогда они будут в принципе приемлемы. [c.471]

Методика опыта. В четыре пробирки взвешивают на аналитических или торсионных весах по 0,1500 г сухого крахмального клейстера. Навески взвешивают на глянцевой бумаге или кальке (см. рис. 20 и рис. 21) и количественно ссыпают в пробирки. Это количество крахмала на протяжении процесса гидролиза обеспечивает его избыток в нерастворимом состоянии. В первые две пробирки приливают точно по 1 мл фильтрата вытяжки из солода или муки или другого растительного материала и добавляют микропипеткой 0,2 мл 2%-ного раствора таннина для осаждения и инактивирования ферментов. Содержимое Пробирок тщательно перемешивают стеклянными палочками, вставленными в пробки, и плотно закрывают пробками. Эти пробирки служат для контроля. В две другие пробирки также приливают по 1 мл фильтрата вытяжки, но не добавляют таннина. Пробирки плотно закрывают пробками и тщательно перемешивают содержимое этих пробирок, не открывая пробки. Буфер в этом методе применять не надо, так как реакционная смесь и без буфера имеет pH = 5,0 5,2. Ферментативное расщепление крахмала в условиях опыта идет весьма интенсивно. [c.101]

Описываемая ниже методика безусловно уступает автоматическим методам как в скорости анализа (не более двух циклов расщепления в день для одного пептида), так и в выходах на стадиях, но она очень удобна для одновременного определения структуры нескольких коротких пептидов. В этом случае трудоемкий процесс насыщения азотом каждого образца в отдельности перед стадией конденсации можно усовершенствовать. Так, автор для этой цели использовал простую конструкцию— трубку с 20 ответвлениями-иглами от шприца (защищенными от коррозии тефлоновыми трубочками). Иглы расположены таким образом, что при опускании в латунный блок для нагревания входят в пробирки с образцами. Вместо завинчивающихся крышек пробирки плотно заклеивают липкой лентой, причем делают это одновременно, используя лист пленки (Perspex) с 20 лупками. Коммерчески доступно устройство, в котором осуществляется и температурный контроль за нагревом образцов в блоке (N-Evap фирмы Organomation), [c.372]

В разд. 6.6 и 6.7 Описаны методики, предназначенные для выявления локализации химерного белка в органелле, а также тканеспецифической экспрессии гена N. -npt-ll (последовательность, кодирующая транзитный пептид МС, соединенный с геном npt-II, и регулируемая промотором гена МС). Для убедительности доказательства того, что транзитный пептид МС РБФК/0 способен доставить NPT-П в хлоропласты, необходимо показать, что зрелая (протеолитически расщепленная) NPT-П содержится только внутри хлоропластов растений, экспрессирующих химерный ген МС-пр/-П. Кроме того, необходимо убедиться в том, что и NPT-И, лишенная транзитного пеитида, например синтезированная под контролем промотора гена nos, обычно ие поступает в хлоропласты. [c.343]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология