Тканеспецифическая экспрессия гена

Рис. 4.72. Механизм тканеспецифической экспрессии гена кальцитонина. Разветвленная стрелка указывает различие путей процессинга в щитовидной железе и гипоталамусе Некоторые дета-

Роль метилирования несомненно очень велика при определении так называемого родительского импринтинга генов у млекопитающих. Известно, что роль отцовских и материнских генов в развитии не одинакова, степень и характер экспрессии генов может зависеть от того, получены они от отца или от матери. Было показано, что метилированные гены трансгенных мышей, полученные от матери, могут не экспрессироваться, тогда как эти же гены, полученные от отца и деметилированные в процессе гаметогенеза, способны к тканеспецифической экспрессии. [c.220]

Методология генетической трансформации клеток млекопитающих позволяет осуществлять интеграцию чужеродных генов в геном различных типов кзотьтивируемых клеток и в разные хромосомы клеток одной линии. Это оказывает неоценимую услугу при изучении цис- и /иранс-зависимой регуляции фзшкциони-рования генов, дает возможность исследовать влияние тканеспецифических факторов на экспрессию генов, процессинг мРНК и белков и др. В конечном счете все это способствует более глубокому пониманию основных закономерностей организации генетической информации у высших эукариот. [c.347]

Рис. 1.2. Тканеспецифический альтернативный сплайсинг в экспрессии гена кальцитонина крысы

Тканеспецифическую экспрессию продукта гена, который переносится внутрь клетки в нужный компартмент. [c.342]

Для обеспечения регулируемой тканеспецифической экспрессии рекомбинантных генов в соматических клетках животных и растений в составе векторов используют энхансеры, которые избирательно стимулируют транскрипцию в соответствующих тканях и не оказывают такого действия на гены в тканях, клетки которых не экспрессируют необходимые регуляторные белки. Кроме того, популярным становится введение в экспрессирующие эукариотические векторы пограничных последовательностей нуклеотидов, фланкирующих клонируемые гены, которые помогают обеспечивать экспрессию рекомбинантных генов, сводя к минимуму эффект их положения в хромосомах соматических клеток. [c.111]

В отличие от бактерий в клетках эукариот внехромосомные, автономно реплицирующиеся генетические элементы типа бактериальных плазмид встречаются редко. Поэтому при конструировании векторов, способных реплицироваться и осуществлять экспрессию в клетках животных, чаще всего используют регуляторные генетические элементы вирусов животных или, в зависимости от задач, эукариотических генов домашнего хозяйства, а также генов, для которых характерна тканеспецифическая экспрессия. [c.133]

В действительности результаты таких экспериментов свидетельствуют о том, что вирусный сегмент содержит второй энхансер, который специфически активируется в клеточной линии 1. В сходных экспериментах показано, что тканеспецифический контроль активности генов может осуществляться путем взаимодействия многих регуляторных факторов. Так, для активации экспрессии генов стероидами требуется обычно, чтобы реагирующая клетка имела рецептор стероидов и чтобы структура хроматина вокруг потенциально регулируемого гена была открытой -состояние, которое достигается при действии других факторов транскрипции. [c.457]

Рис. 6.13. Тканеспецифическая экспрессия гена ab в целом растении. Контроль (SR1), aMV- at и семена ab- ai после трехнедельного выращивания на твердой среде в присутствии (А) и в отсутствие (Б) хлорамфеникола. (ВМЦК тождественно aMV.)

В разд. 6.6 и 6.7 Описаны методики, предназначенные для выявления локализации химерного белка в органелле, а также тканеспецифической экспрессии гена N. -npt-ll (последовательность, кодирующая транзитный пептид МС, соединенный с геном npt-II, и регулируемая промотором гена МС). Для убедительности доказательства того, что транзитный пептид МС РБФК/0 способен доставить NPT-П в хлоропласты, необходимо показать, что зрелая (протеолитически расщепленная) NPT-П содержится только внутри хлоропластов растений, экспрессирующих химерный ген МС-пр/-П. Кроме того, необходимо убедиться в том, что и NPT-И, лишенная транзитного пеитида, например синтезированная под контролем промотора гена nos, обычно ие поступает в хлоропласты. [c.343]

Как уже подробно обсуждалось выше, для большинства генов эукариот характерна интрон-экзонная структура, а интроны, присутствующие в первичных транскриптах таких генов, вырезаются в процессе сплайсинга с образованием зрелых молекул мРНК. Для получения экспрессии эукариотических генов в клетках прокариот, а также изучения тканеспецифической экспрессии генов возникает необходимость в получении кодирующих последовательностей эукариотических генов без интронов. В этом случае задача решается через создание репрезентативных клоно- [c.155]

После частичного деметилирования в результате воздействия 5-азацитидина активируются не все гены. Например, неактивные тканеспецифические гены глобинов не начинают транскрибироваться, несмотря- на сильное деметилирование. Вероятно, деметилирование отдельных участков гена может быть необходимым, но не достаточным для обеспечения активной экспрессии гена. [c.220]

Успехи, достигнутые на протяжении последних лет в области генетической инженерии и методов переноса генов, дали возможность непосредственно решать многочисленные вопросы, касающиеся экспрессии генов и регуляции их активности. Гены высокоспециализированных клеток, таких как клетки В-лимфо-цитарного направления дифференцировки, были перенесены в нелимфоидные клеточные линии для изучения тканеспецифических контрольных элементов на уровне ДНК (Banerji et al., 1983 Gillies et al., 1983). [c.74]

На рис. 17, в изображена схема экспрессирующего вектора, применяемого с этой линией клеток. В нем область D R соединена с промотором, экзоном 2, интроном 2 и экзоном 3 (3-глоби-нового гена, поскольку показано, что присутствие последовательностей нуклеотидов интрона 2 абсолютно необходимо для эффективной экспрессии генов, направляемой этим промотором. Рекомбинантный ген может быть встроен справа или слева от интрона 2. После успешной трансфекции этот экспрессирующий вектор обеспечивает независимую от эффекта положения и числа копий тканеспецифическую экспрессию рекомбинантных генов в клетках эритроидного ряда. [c.180]

Теперь, благодаря разработке методов получения трансгенных животных стало возможным изучать толерантность к своему прямым путем. Эти методы позволяют вводить мышам с известной генетической основой специфический ген и анализировать влияние данного гена на развитие иммунной системы. Кроме того, если вводимый ген соединить с тканеспецифическим промотором, экспрессию гена можно ограничить специфичными для данного промотора клетками. Иммунная система реагирует на белковый продукт трансгена , по существу, как на истинный собственный антиген (аутоантиген), и все происходящие при этом процессы можно изучать in vivo, исключив травмирующие вмешательства и воспалительные реакции, сопутствующие пересадке чужеродных клеток или тканей. Кроме того, жи- [c.260]

Оптимальный терапевтический вектор. Отметим еще раз, что векторы для доставки терапевтических генов, которые были бы одновременно эффективными и специфичными, пока не созданы. Теоретически такой идеальный вектор должен обладать 1) стабильной неиммуногенной оболочкой 2) специфическими лигандами для связывания с определенным типом клеток 3) молекулярными средствами для слияния мембран вектора и клетки 4) способностью внедрять векторную ДНК в клеточную хромосому путем гомологичной или сайт-специфической интеграции 5) регуляторным локусом для тканеспецифической экспрессии (рис. 13.14). [c.431]

Г ены. перенесенные в другие участки хромосомы, транскрибируются в зависимости от типа клетки. Следовательно, они должны нести с собой информацию, необходимую для их селективной экспрессии в соответствующих клетках. В качестве примера можно привести ген дрозофилы Sgs-3, которому для правильной транскрипции в слюнных железах необходимо 600 нуклеотидных пар, расположенных перед ним установлено, что его транскрипция осуществляется с нормальной скоростью почти в любом сайте (но не в гетерохроматине) политенной хромосомы. Подобным образом грансгенные млекопитающие, содержащие фрагмент тканеспецифического гена, экспрессируют этот ген в соответствующих клетках, но только в том случае, если фрагмент достаточно длинен и несет большую часть последовательности энхансера [c.211]

Мышам одной из двух линий переносили ген лизоцима куриного яйца (HEL, от англ. hen egg lysozyme), соединенный с тканеспецифическим промотором. Продукт HEL (в основном его растворимая форма) вызывал толерантность Т- и В-кпе-ток. Трансгенные мыши второй линии (продуцирующие lg анти-HEL) имели перестроенные гены тяжелых и легких цепей высокоаффинных антител анти-HEL, которые несли аллотипический маркер IgH , отличающий их от эндогенно продуцируемых иммуноглобулинов (IgH ). Большинство В-клеток этих трансгенных мышей имели IgM и IgD аллотипа а . Дважды трансгенные гибриды F1 были высокотоле-рантны к HEL и не продуцировали ни антител, ни бляшкообразующих клеток. HEL-связывающие (аутореактивные) В-клетки не делегировались однако они не экспрессировали на поверхности IgM-рецепторы при сохранении экспрессии рецепторов IgD и обнаруживали состояние анергии. [c.269]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология