Молекулярная масса, методы равновесного градиента

Метод равновесной седиментации в градиенте плотности основан на следующем. Если поместить в ячейку центрифуги смесь низкомолекулярных жидкостей (растворителей) различной плотности, то при сильном центробежном ускорении (более 10 м/с ) через некоторое время в кювете установится седиментационное равновесие, т.е. в радиальном направлении возникнет постоянный во времени градиент плотности. Если в таком бинарном растворителе содержится полимерный компонент с плотностью, промежуточной между плотностями элементов растворителя, то полимер начнет собираться в полосы в тех местах кюветы, где его плотность равна плотности бинарного растворителя. Чем ниже молекулярная масса, тем больше коэффициент диффузии и тем сильнее размывается эта полоса (изоденса). Для сополимеров (если сомономеры имеют разные плотности) в результате установления равновесия могут появиться несколько полос макромолекулы с различной плотностью соберутся в разные полосы. Следует отметить, что метод применим для молекулярных масс выше критической, иначе ширина полосы становится соизмеримой с длиной ячейки. [c.325]

В этом методе термодинамическое равновесие достигается путем выравнивания скоростей седиментации и диффузии. Для достижения равновесия центрифуга должна вращаться с меньшей скоростью в течение большего времени. Для того чтобы достичь равновесия, обычно требуется несколько дней. Скорость вращения при этом поддерживается около 15 ООО об/мин. Под действием центробежной силы, соответствующей этой скорости, достигается равновесный градиент концентрации вдоль кюветы и макромолекулы распределяются в соответствии со своими молекулярными массами, как показано на рис. 13.21. [c.320]

Читатель должен с большой осторожностью относиться ко всем измерениям молекулярной массы ДНК, выполненным методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности до 1969 г., когда Шмид и Херст опубликовали свою работу. Однако в настоящее время этот метод и прямое измерение длины молекулы с помощью электронной микроскопии являются, вероятно, наиболее надежными способами определения молекулярной массы ДНК. [c.332]