Концентрация белка, ее определение

Рис. 5. Номограмма для определения концентрации белка

Определение концентрации белка проводят методом Лоури (с. 81). При спектрофотометрическом определении для расчета используют коэффициент Л ° 1см=10,2 при 280 нм. [c.240]

Реактивы для определения концентрации белка методом Лоури (с. 81). [c.220]

При определении молекулярной массы по методу седиментационного равновесия знание коэффициента диффузии не является необходимым. В этом случае используют более низкое число оборотов. По сравнению с предыдущим методом, для которого необходимо гравитационное поле до 400 ООО g, здесь достаточно центробежной силы, в 10 — 15 тыс. раз превосходящей земное притяжение. Через несколько часов или через несколько суток процесс седиментации и обратной диффузии достигает состояния равновесия, при котором перемещение частиц отсутствует. Измерив градиент концентрации белка от мениска до дна ячейки, можно вычислить его молекулярную массу. Медленное установление равновесия — недостаток метода. Этого можно избежать при проведении определения по Арчибальду. В этом низкоскоростном методе для расчетов можно использовать градиент концентрации, образующийся в измерительной ячейке у мениска жидкости (до отделения белковой зоны). Метод нулевой концентрации в мениске, предложенный в 1964 г., делает возможным достижение седиментационного равновесия при высокой скорости ротора (высокоскоростной метод), в этом случае белковая зона уже отделена от мениска. Это дает возможность сократить время эксперимента до 2 — 4 ч. [c.361]

ГПХ часто используют для определения молекулярно-массового распределения полимеров и нахождения радиуса частиц. Для этой цели с помощью стандартов полистирола строят градуировочные графики зависимости логарифма молекулярной массы от объема элюирования. При помощи полученной кривой можно определить концентрации частиц определенного размера в анализируемой смеси. Очень широко ГПХ используют в биологии для выделения и очистки полипептидов, белков и других макромолекул. [c.610]

Определению белка данным методом мешает присутствие нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Измеряя оптическую плотность раствора при 260 нм (для учета поглощения соединений нуклеотидной природы) и 280 нм, содержание белка рассчитывают с помощью номограммы (рис. 6) экспериментально полученные величины оптической плотности при 260 и 280 нм находят в соответствующих столбцах номограммы и соединяют их прямой линией точка пересечения этой прямой со шкалой, на которой дана концентрация белка, определяет содержание белка в исследуемом растворе. [c.83]

Сердечная мышца по содержанию ряда химических соединений занимает промежуточное положение между скелетной мускулатурой и гладкими мышцами. Так, общее содержание белкового азота в скелетных мышцах кролика составляет 30—31 мг/г, а в гладкой мускулатуре (миометрий)—до 20,3 мг/г. В сердечной мышце и особенно в гладких мышцах значительно меньше миофибриллярных белков, чем в скелетной мышце. Общее содержание миофибриллярных белков в гладкой мышечной ткани желудка примерно в 2 раза ниже, чем в скелетных мышцах. Концентрация белков стромы в гладких мышцах и миокарде выше, чем в скелетной мускулатуре. Известно, что миозин, тропомиозин и тропонин сердечной мышцы и гладкой мускулатуры заметно отличаются по своим физико-химическим свойствам от соответствующих белков скелетной мускулатуры. Отмечены определенные особенности и во фракциях саркоплазматических белков. Саркоплазма гладкой мускулатуры и миокарда в процентном отношении содержит больше миоальбумина, чем саркоплазма скелетной мускулатуры. [c.652]

Для количественного анализа взаимодействия проводят другой эксперимент, в котором определяют максимальный прирост интенсивности флуоресценции зонда при его полном связывании с белком. При этом постоянную низкую концентрацию аурамина О (которую выбирают таким образом, чтобы можно было зарегистрировать флуоресценцию зонда в буфере) титруют нарастающими количествами фермента. Строят график двойных обратных величин и проводят экстраполяцию к бесконечной концентрации белка. Таким образом устанавливают значение интенсивности флуоресценции данной концентрации зонда при его полном связывании с ЛДГ. Соотношение полученной величины с флуоресценцией данной концентрации зонда в буфере показывает, во сколько раз увеличивается флуоресценция аурамина О при связывании. Используют несколько концентраций аурамина О для титрования белком, что повышает точность определения величины прироста флуоресценции (Фтах). В этих экспериментах [c.342]

Связывание одного лиганда. При заданных значениях Ео и Ао в пробе одновременно присутствуют комплексы белка с лигандом с различной степенью насыщения (т. е. ЕА ЕАг, ЕАз и ЕА4), а также свободный белок в равновесной концентрации Е. Определение их концентрации и является целью дальнейшего анализа. [c.345]

Определение количества субъединиц, вступивших в реакцию, проводится путем сравнения концентрации иммобилизованного белка до и после обработки 8 М мочевиной. Снижение концентрации белка в суспензии агарозы после инкубации в мочевине в 4 раза позволяет использовать препарат ЛДГ для получения мономера. Обработка иммобилизованного белка 1,5 М мочевиной приводит к разрушению нековалентных взаимодействий между субъединицами ЛДГ, но не влияет на ковалентную связь субъединицы с матрицей (агарозой). Удаление мочевины из системы при промывании буфером ведет одновременно и к удалению диссоциировавших субъединиц. Остающийся связанным белок является мономером ЛДГ, который используется для дальнейших исследований. [c.386]

Определение числа субъединиц, вступивших в реакцию. Число субъединиц, образовавших ковалентную связь с носителем, определяют измерением концентрации белка в пробах, обработанных 8 М мочевиной, сравнивая ее с исходной концентрацией иммобилизованного фермента. [c.388]

Определение концентрации белка в препарате СУР. 40 мкл препарата СУР растворяют, добавляя 80 мкл буфера VII, содержащего однопроцентный раствор тритон Х-100. Содержание белка измеряют по методу Лоури (с. 81) с модификацией, применяемой для определения белка в растворах тритона Х-100. В этом случае в раствор карбоната натрия, использующийся для определения, добавляют додецилсульфат натрия до конечной концентрации 0,3%. Далее определение ведется обычным способом Измеряют содержание белка в 20 мкл разведенного препарата СУР. [c.425]

Характер связей между белками и липидами отражается на переходе от геля к жидкому кристаллу у молекул липидов [82]. Так, белки, взаимодействующие в основном через посредство гидрофобных связей, вызывают уменьшение энтальпии перехода, пропорциональное концентрации белков. В этом случае определенное число молекул липидов больше не участ- [c.311]

При повышении концентрации белков или других веществ, содержащих сульфгидрильную или дисульфидную группировки, высота каталитической волны растет до определенного предела, при этом соотношение между первой и второй волнами с увеличением концентрации белковых молекул изменяется. На высоту каталитической волны влияет и концентрация кобальта. Достаточно сложное по характеру влияние оказывает на высо- [c.238]

В связи с тем, что присутствие в растворе хлорида калия мешает количественному определению белка по методу Лоури, эту соль из препарата белка необходимо удалить. Для этого к 1 мл экстракта добавляют 2 мл 10%-ного раствора ТХУ, что приводит к осаждению белков. Полученную суспензию центрифугируют при 4000 об/мин 10 мин. Надосадочную жидкость очень тщательно удаляют. Края пробирок вытирают фильтровальной бумагой. К осадку прибавляют 10 мл 0,1 моль/л раствора гидроксида натрия. Раствор перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения осадка. Для определения концентрации белка по методу Лоури берут 0,1 мл щелочного раствора белка. [c.6]

В настоящее время показано [97], что устойчивость компактной пространственной структуры глобулярных белков в водных растворах обусловлена теми же силами, которые приводят к мицеллообразованию в растворах ПАВ. В результате гидрофобных взаимодействий в глобулах белков и мицеллах ПАВ возникают неполярные области, ответственные за солюбилизацию. Размер, состав и свойства этих областей целиком определяются конформацией белка, а так как конформация глобулярных белков в растворе практически не зависит от концентрации белка, становится понятным, что независимо от концентрации белка в растворе с глобулой белка должно взаимодействовать определенное количество углеводорода, а концентрация углеводородов в растворе увеличивается пропорционально числу солюбилизирующих глобул. [c.22]

В полученном растворе гемоглобина измеряют концентрацию белка методом Лоури (см. работу 12). Для этого 1 мл раствора гемоглобина разбавляют до 100 мл в мерной колбе физиологическим раствором. Для определения берут 1 мл разбавленного раствора. [c.8]

Область применения. Количественное определение белков, определение концентрации индивидуальных компонентов белковой смеси (например, сыворотки крови). [c.159]

Для радикала 7 изотерму адсорбции получить не удалось вследствие низкой растворимости этого радикала в воде, и мы ограничились определением связывающей емкости альбумина к этому радикалу. Значение Кп для радикала 7 составило 8-10 М при концентрации белка 4-10 М. Большое различие в значениях для радикалов 7 и 8 свидетельствует, что адсорбция стероидов на альбумине сильно зависит от индивидуальных особенностей стероидной молекулы. [c.115]

Развитие пространственной структуры геля яичного альбумина (pH > 10) представлено на рис. 44. Прочность возникает сразу же, достигая максимального значения в течение малого промежутка времени, а затем происходит самопроизвольное плавление геля, которое сопровождается выделением аммиака. Из рис. 45 видно, что в щелочной области процесс гелеобразования также сопровождается конформационными превращениями молекул яичного альбумина — удельное оптическое вращение увеличивается до определенного значения и далее не изменяется. Плавление геля не сопровождается дальнейшим изменением удельного оптического вращения. Исследование концентрационной зависимости максимальной прочности структур в растворах яичного альбумина показало, что минимальная концентрация белка, способная образовать пространственную структуру, при pH < 3 больше 2 г/100 а при pH > 10 больше 3,5 г/100 мл. Результаты представлены на рис. 46, из которого видно, что кривая зависимости Р/ от концентрации имеет параболический вид. [c.127]

С фильтратом проделывают цветные реакции и определяют концентрацию белка. Для определения концентрации белка по методу Лоури 1 мл исходного раствора белка переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл. Объем жидкости в колбе доводят дистиллированной водой до метки. I мл разведенного раствора белка используют для количественного определения содержания белка. [c.10]

Как известно из классических работ Ж. Перрена, вес очень больших частиц механических взвесей, как, например, взвесей гумми-мастикса, может быть определен на основании скорости их оседания под влиянием силы тяжести. Сила тяжести слишком мала для аналогичного осаждения макромолекул из растворов белков. Однако этого аффекта можно добиться, заменяя силу тяжести центробежной силой. Для этой цели применяют центрифуги с 60 ООО об мин, в которых осуш,ествляются центробежные силы, превышаюш,ие в 300 ООО раз силу тяжести. Раствор белка помещают в кювету с кварцевыми окошками, которую вводят в ротор центрифуги. Осаждение белка измеряют в процессе вращения, наблюдая по изменению показателя преломления или поглощения света за градиентом концентрации белка в зависимости от расстояния от оси вращения. [c.429]

Связывание определенных белков Р-лактамными антибиотиками вызывает различные эффекты, и зависят они от концентрации белков и от их функции в организме (табл. 9.3). [c.221]

Хотя в настоящее время существуют методы определения изоэлектрической точки исследуемых белков с достаточной точностью (например, изоэлектрическое фокусирование в градиенте плотности сахарозы), знание изоточки вовсе не обязательно для выбора ионообменника. Пригодность того или иного ионита легко определить по степени связывания белка в статических условиях. В случае анионита смолу приводят в равновесие с буферным раствором, pH которого соответствует верхней границе области устойчивости исследуемого белка. В случае катионита pH буфера будет соответствовать нижней границе этой области. Обессоленный белок растворяют в соответствующем буфере, осторожно (избегая вспенивания) перемешивают с порцией ионита, отделяют надосадочную жидкость. По концентрации белка в надосадочной жидкости судят о степени связывания его с соответствующим ионообменником. [c.431]

Реакция Лоури. Это одна из наиболее чувствительных реакций (Ш белки. 1и дают циклические аминокислоты. Реагируя с реактивом Фолина, они образуют комплексы, окрашенные в синий цвет. Интенсивность окраски зависит от концентрации белков, поэтому реакции Лоури может бы1ъ использована и для количественного определения. [c.9]

Одним из самых важных применений электрофореза является использование его в анализе естественных смесей коллоидов, например белков, полисахаридов и нуклеиновых кислот, а также продуктов, полученных фракционной перегонкой. При электрофорезе между раствором белка и буфером в специальной У-образной трубке, снабженной электродами, образуется резкая граница, за движением которой можно проследить с помощью оптической шлирен-системы (разд. 11.10). Эти опыты обычно проводят при температуре 4° С, т. е. при максимальной плотности воды, так что температурный градиент в электрофоретической кювете, вызванный нагреванием током, сопровождается наименьшим градиентом плотности. Градиенты плотности горизонтально поперек кюветы стремятся вызвать конвекцию. На рис. 20.1 [1] показана электрофоретическая картина плазмы крови человека в буферном растворе (pH 8,6) диэтилбарбитурата натрия с ионной силой 0,10 (после 150 мин при 6,0 В/см и 1°С). Строится график зависимости градиента показателя преломления от расстояния в кювете (горизонтальная ось). Одна картина получена для той части кюветы, в которой белки опускаются вниз, а другая — для той части, где белки поднимаются вверх. Начальные положения границ указаны на рисунке тупыми концами стрелок. Различные виды белков представлены альбумином, аг, аг-, р-, у-глобу-линами и фибриногеном ф. Площадь под определенным пиком почти точно пропорциональна концентрации белка, дающего эту границу. Так, например, процент альбумина может быть получен делением площади пика альбумина на суммарную площадь всех пиков белков. е-Граница в спускающейся части и б-граница в поднимающейся части картины обусловлены не белковыми компонентами, а изменениями концентрации соли, которые возникают в опытах с обычным переносом вблизи начального положения границы. [c.603]

Недостатком метода определения белка по Лоури является то, что интенсивность окраски различна у разных белков и не прямопропорциональна концентрации белка в растворе. [c.72]

Определение белка. Для определения концентрации белка методом Лоури необходимо предварительно осадить его трихлоруксусной кислотой (с. 81). Спектрофотометрическое измерение можно проводить при условии, когда из раствора фосфорилазы удален АМФ, при этом отнощение Л260М280 равно 0,52—0,55 для расчета используют коэффициент А ° 1см= 13,2 при 280 нм. [c.221]

Вязкость белкового раствора с сахарозой т], необходимую для работы с экстраполяционными соотношениями (III.3) — (111.5) обычно принимают равной вязкости водных растворов одной сахарозы (см., например, [78, 91]) определяют последнюю с помощью номограмм, взятых, например, из работы [121]. Однако, как показано в работе [122], для корректного определения времен корреляции вращения белков для относительно больших концентраций белка (порядка 10 вес. %) вязкость исследуемых буферных растворов белка с сахарозой необходимо измерять непосредственно. В то же время для определения предельных экстраполяционных величин А,,,,, Ит Я. [c.139]

Регистрацию выхода белков можно вести по УФ-поглощению при 280 нм, но не по поглощению пептидной связи (210—230 нм), так как в этой области сам полибуфер сильно поглощает свет. Полибуфер не мешает окраске белка красителями типа СВВ. Для определения концентрации белка во фракциях можно пспользовать количественные методы, основанные на окрашивании такими красителями. Определение белка по методу Лоури в присутствии пол1[буфера проводить нельзя, так как он связывает ионы меди. [c.336]

Для определения количества SH-rpynn исходный раствор миозина разводят 0,5 М КС1 (pH 7,6) до конечной концентрации белка [c.159]

Раздел Энзимология рассчитан на студентов, уже иознакомиз-" шихся с некоторыми современными методами химии белка определением концентрации белка, хроматографией, электрофорезом и др. Основная цель его состоит в том, чтобы дать возможность студентам приобрести навыки экспериментальной работы, необходимые для начинающего энзимолога. В ходе практикума студенты осваивают методы выделения и очистки какого-либо фермента, а также изучают свойства полученного препарата. В связи с этим приводятся общие указания по работе с ферментами, способам их очистки, правилам определения каталитической активности и кинетических свойств. Во второй части раздела описываются методы выделения ферментов из пекарских дрожжей и животных тканей (скелетных мышц, печени). Поскольку современные методы очистки ферментов включают большое разнообразие приемов, в ряде случаев для получения одного и того же фермента дается описание 2—3 методик, которые могут быть использованы в соответствии с уровнем оснащенности лаборатории. Кроме того, для ферментов из разных источников приводятся различные методы выделения. [c.196]

Определение белка. Для определения белка используют микро-биуретовый метод (см. с. 81). В случае сиектрофотометрического определения концентрацию белка рассчитывают с учетом коэффициента поглощения Л " 1см=13,2 при 280 нм. [c.234]

Метод электрофореза широко применяют в клинике для анализа белков плазмы и сыворотки крови. Концентрация белков плазмы составляет 60—80 г/л. Сыворотка крови представляет собой плазму, лишенную фибриногена. При заболеваниях может изменяться как общее количество белков плазмы, так и содержание отдельных белков или белковых фракций без изменения общего количества белка. При некоторых заболеваниях, например при воспалении почек, циррозе печени и др., наблюдается уменьшение содержания белков плазмы (за счет снижения количества альбуминов). Напротив, острые инфекционные заболевания, возникновение некоторых злокачественных новообразований сопровождаются повышенным содержанием белков в крови, чаще всего глобулиновой фракции. Поэтому анализ белков сыворотки крови имеет большое диагностическое значение и позволяет наблюдать за ходом лечения. Суммарный заряд белковой молекулы изменяется в зависимости от pH и при определенном значении pH (изоэлектриче-ская точка) равен нулю. Белок в изоэлектрическом состоянии при электрофорезе не передвигается ни к катоду, ни к аноду, наименее устойчив в растворе и при стоянии выпадает в осадок. [c.31]

Реконструкция сукцинатдегидрогеназной активности. Частицы, дефицитные по коэнзиму Q (около 200 мг), суспендируют в стеклянном гомогенизаторе в небольшом объеме (1—2 мл) концентрированного пентанового экстракта (см. выше), содержащего около 40 мкмоль коэнзима С на 1 мг белка частиц. Суспензию встряхивают в течение 30 мин при 0° С, а затем центрифугируют 10 мин при 1300 Осадок осторожно ополаскивают 1 мл охлажденного пентана. Полученный препарат реконструированных частиц высушивают в роторном испарителе до полного удаления пентана. В день опыта частицы трех типов (лиофилизированные, экстрагированные пентаном и реконструированные ) гомогенизируют в 0,25 М сахарозе (концентрация белка 30—40 мг/мл), из каждого препарата отбирают по 0,05 мл суспензии для определения белка с биуретовым реактивом. [c.422]

Ультрафильтрацию можно выполнять в прерывистом режиме или непрерывно. При первом способе (рис. 9.42) подлежащий обработке продукт поступает в контур (петлю) циркуляции модуля, а задерживаемый фильтром компонент (остаток) рециклирует в чане концентрирования. Вследствие удаления фильтрата уровень продукта в чане понижается, а концентрация белков постепенно растет. Когда достигаются заданные концентрации и степень очистки, операцию прекращают, продукт выгружают, и установка после прочистки вновь готова для обработки очередной порции сырья. Для более полной очистки осадка можно добавлять в него определенное количество свежей воды, чтобы разбавить мелкие молекулы, удержанные пропиточной жидкостью перед окончанием операции эта вода для промывки остающегося продукта удаляется точно таким же образом, как и первоначальный фильтрат. Такая очистка диализом может быть повторена несколько раз для повышения степени чистоты изолята. [c.444]

Неравновесная модель свертывания. Начнем обсуждение модели с определения минимального фазового и компонентного состава системы, обеспечивающей спонтанное протекание процесса в изолированных условиях. Не нарушая общности модели свертывания, во всяком случае, применительно к условиям in vitro, будем считать, что объектом рассмотрения является мономерный белок. Имеющиеся опытные данные о структурной самоорганизации белков позволяют представить укладку линейной аминокислотной последовательности в трехмерную структуру как внутримолекулярный процесс, который полностью определяется проявляющимися в соответствующих условиях свойствами единичной полипептидной цепи. Иными словами, свертывание не зависит от концентрации белка, и поэтому модель может включать лишь одну белковую молекулу. В систему должна входить также водная фаза. Для предварительного феноменологического описания процесса не требуется учет конкретных специфических свойств среды, обусловливающих реализацию заложенной в белковой цепи потенции к самоорганизации. Пока будем считать водное окружение гомогенным, обладающим необходимыми для сборки белка свойствами. [c.93]

Примечания. 1. Достоинствами спектрсфотометрического определения белка являются простота, скорость и легкость выполнения. При использовании соответствующей аппаратуры (например, прибора Увикорд фирмы ЬКВ, Швеция) этот метод позволяет проводить непрерывное определение концентрации белка в растворе. [c.67]

Определение проводят в ФЭКе. При работе с фотоэлектроколориметром находят оптическую плотность исследуемого раствора и вычисляют количество белка по калибровочной кривой, построенной на основании оптических плотностей стандартных проб с известным содержанием белка в них, определенным по методу Кьельдаля. На оси абсцисс откладывают значение концентрации белков, проводят от каждой точки перпендикуляр, а на оси ординат — значение плотности раствора, и из точек также проводят перпендикуляры. Точки пересечения перпендикуляров осей абсциссы и ординаты служат для построения калибровочной кривой. [c.56]

Скорость накопления коллагеноподобных у хастков в водных расворах желатины существенно зависит от концентрации белка. Однако предельные величины удельного вращения при определенной температуре не зависят от исходной концентрации белка в растворе для мало концентрированных систем (до 10% белка) (рис. 1). [c.67]

Известно, что в анализируемом растворе концентрация 6ел ащ>имерноЛ5 мг/л, Какой метод следует избрать для точного определения концентрации белка [c.24]

Было предположено компенсировать тормозящее действие аммиака и других веществ вычерчиванием кривой кажущегося содержания аргинина во взятом для анализа количестве белка [127]. Полагают, что при экстраполяции кривой до нулевой концентрации белка можно получить истинное значение аргинина. Такой общий метод был применен ранее Краусом и Ра-гинсом для триптофана и Бёшиллом, Лемпитом и Бекером для определения цистина. [c.53]

Олвинг и Мирский [30] сделали интересное наблюдение если гидролизовать белок (серумальбумин, серумглобулин) серной кислотой разной концентрации (от 6 до 11 н.), то содержание цистина в белке, определенное по Фолину, растет с увеличением концентрации кислоты. [c.186]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология