Спектр поглощения СоА изменение при их соединении с ферментом

Особенностью этих соединений является значительное изменение спектров поглощения или флуоресценции при связывании с ферментом. Этот спектральный сдвиг трактовался [25671 как следствие изменения диэлектрической проницаемости среды при комплексообразовании красителя с белком, причем свойства активного центра химотрипсина в этом отношении близки к свойствам циклогек-сана. Однако спектральный сдвиг красителя, по-видимому, определяется не столько диэлектрической проницаемостью, сколько" показателем преломления среды [2568]. [c.242]

Образование комплекса фермент — субстрат может быть в ряде случаев показано экспериментально, путем, например, сравнения спектров поглощения чистых растворов ферментов с таковыми в присутствии субстрата. Так, при добавлении к раствору каталазы (фермента, расщепляющего Н2О2 на Н2О и О2) избытка перекиси водорода наблюдается характерное изменение спектра поглощения раствора, что с несомненностью-говорит об образовании нового соединения каталазы с Н2О2. [c.115]

Соединение I получено в кристаллической форме из дрожжевой ССР при реагировании кристаллического фермента, помещенного в маточном растворе в проточную ячейку, с находящейся в маточном растворе Н2О2. Реакция между ферментом и Н2О2, протекание которой регистрировалось с помощью спектров поглощения в видимой области (550—750 нм), почти полностью завершалась при 6° через несколько минут. После этого концентрация образовавшегося соединения I оставалась практически неизменной (90—95%) по крайней мере в течение получаса. Трехмерные структуры нативного фермента и его первого промежуточного производного расшифровывались методом Лауэ-кристаллографии с разрешением 2,2 А и / -факторами расходимости 15,8% (табл. 1.10 и 1.11). Кристаллические образцы имели размеры 0,4 0,4 1,0 мм . Использовалась полихроматическая синхротронная радиация время одной экспозиции составляло около 0,3 с. Всего было сделано четыре серии независимых экспериментов на четырех кристаллах при четырех различных ориентациях образцов (4 для нативного фермента и 4 для соединения I). При сопоставлении геометрии найденных структур авторы обнаружили изменения, вызванные переходом ССР в соединение I. Они коснулись только области активного центра, причем [c.152]

Поскольку при нормальной температуре промежуточные соединения обнаружить не удавалось, опыты проводились при температурах до —60°С. За ходом реакции следили по изменению в спектре поглощения остатка коричной кислоты (аналогично тому, как это делалось в случае фурилакрилоиловой группы гл. 7). Спектр этого соединения очень чувствителен к химическому окружению он может измениться при образовании фермент-субстратного комплекса, ацилфермента и комплекса фермента с продуктом, и предсказать природу этих изменений не так-то просто. При смешивании субстрата с избытком фермента при повышенных температурах было установлено, что гидролиз субстрата представляет собой простой экспоненциальный процесс. Однако при низких температурах (порядка —40°С) реакция является двухстадийной. При увеличении температуры константа скорости для второй стадии возрастает быстрее, чем для первой. Таким образом, при низкой температуре вторая стадия является более медленной, чем первая, а при высокой — более быстрой. Было высказано предположение, что на первой стадии происходит образование ацилфермента, а на второй — его гидролиз. При нормальных температурах скорость деацилировання относительно высока, поэтому ацилфермент не накапливается при низких же температурах скорость становится достаточно низкой для накопления этого соединения. Однако изменения в спектре поглощения циннамоильного остатка не удается так просто связать с какими-либо конкретными химическими или физическими событиями, как это было, например, в случае -нитрофенола, увеличение поглощения которого указывало на расщепление нитрофенилового эфира. Не исключено, что изменения в спектре поглощения обусловлены индуцируемыми субстратом конформационными изменениями в ферменте. В связи с этим понадобились дополнительные доказательства в пользу образования ковалентного промежуточного соединения. При —58°С, когда ацилфермент стабилен, к ферменту был добавлен [c.380]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология