Основность и скорость деацилирования

Представление о том, что специфичность определяется уменьшением числа вращательных степеней свободы "хорошего субстрата, т.е. определяется, главным образом энтропией основного состояния [19871, оказалось неправильным. Как было показано [1992,24531, данные, лежащие в основе этих представлений, получены в условиях, когда компоненты буфера (трис) сильно влияют на скорость деацилирования. [c.229]

Однако существуют веские свидетельства в пользу того, что для проявления каталитической активности необходима имидазольная группа остатка гистидина в активном центре фермента. Зависимость от pH максимальных скоростей как стадии ацилирования, так и деацилирования показывает, что активность фермента пропорциональна доле основной формы группы с рК 7, что лежит в области рК, ожидаемой для имидазольной группы. Одно это не может служить строгим доказательством, что имидазольная группа включается в активный центр это значение рК может отражать 1) ионизацию некоторой другой ионогенной группы, величина рК которой искажена белком 2) имидазольную группу, протонизация которой вызывает образование каталитически неактивной конформации фермента 3) изменение скорость определяющей стадии, а не ионизацию какой-либо группы. Более строгое свидетельство, что имидазольная группа участвует в катализе, следует из факта, что фермент необратимо инактивируется при алкилировании имидазольной группы аналогом субстрата хлоркетоном VIH. [c.177]

Основности и константы скорости деацилирования. Если откладывать вышеупомянутые величины Ар/С для nopa-нитро-анилинов против величин AlgA реакции деацилирования соответствующих пара-нитроацетанилидов, то получается очень хорошее приближение к прямой линии (рис. 10). Величины Alg меняются от О до приблизительно 3 при изменении <р от 0° до 90°, и следовательно, отралсают изменения в мезомерных взаимодействиях. [c.598]

Основное различие заключается в том, что наличие ацетамидной группы приводит к выигрышу в энтропии активации. Константы скорости деацилирования ацилферментов с а-ацетамидной группой характеризуются меньшей отрицательной энтропией активации на величину 10—12 кал-моль- -град-, при этом стабилизация переходного состояния ацилферментов с а-ацетамидной группой имеет чисто энтропийную природу. Взаимо-действие между ацетамидной группой и активным центром ориентиру- Д т и замораживает гидролизуе- мую сложноэфирную связь в по- ложении, обеспечивающем реакци- онноспособное состояние активного центра. [c.91]

Анализ данных таОл.56 позволяет сделать вывод о том, что специфичность фермента может определяться изменением как энтальпии, так и энтропии активации. Относительный вклад каждого из этих параметров зависит от типа катализатора и выбранной серии субстратов. Так, скорость деацилирования К-ацил-аминоацилхимотрипсинов определяется, в основном, изменением энтальпии активации (см. рис.60), тогда как переход от этих производных к соответствующим производным фермента, ацилированного алифатическими кислотами, приводит к изменению энтропии активации стадии деацилирования, а энтальпия процесса изменяется очень мало [1992]. Энтальпийный "контроль четко проявляется при пепсиновом катализе, тогда как в случае эластазы преобладает вклад энтропии. [c.229]

С общим основным катализом деацилирования согласуются стерические эффекты ацильной группы [1967]. Следует подчеркнуть, что реакционная способность молекулы воды, участвующей в деацилировании ацилферментов, содержащих специфическую ацильную группировку, близка к реакционной способности гидроксил-иона. Этот вывод был сделан [3329] на основе анализа скоростей деацилирования и щелочного гидролиза субстратов. Однако вопрос о том, обусловлена ли эта высокая реакционная способность особенностями структуры воды в активном центре ацилфермента или особенностями структуры расщепляемой связи, нуждается в дополнительном изучении. [c.335]

Исследования, проведенные в широком диапазоне pH показали, что смена лимитирующей скорость стадии - довольно частое явление. Так, при гидролизе тг-нитрофениловых эфиров ациламинокислот трипсином [2 131 и панкреатическим калликреином Г23401 в кислых pH лимитирует общую скорость стадия деацилирования, а при рН>4.4-4,8 стадия ацилирования. В случае лейкоцитарной эластазы [23171 и папаина [23411 наоборот - в кислых pH медленной стадией является ацилирование, а при увеличении основности среды такой стадией становится деацилирование фермента. [c.220]