Агар для бруцелл

Третий день. 1. Просматривают 2-суточный рост культуры на скошенном печеночном или глюкозо-глицериновом агаре (при повторных высевах культуры бруцелл на искусственных питательных средах растут более быстро, чем при выделении их из патологического материала). На поверхности скошенного агара бруцеллы растут в виде густо расположенных мелких колоний или сплошного налета с оттенком сероватого цвета. [c.271]

Несколько колоний с признаками, характерными для бруцелл, высевают в 3—5 пробирок с печеночным или глю-козо-глицериновым агаром для получения чистой культуры. [c.271]

Бактериологическое исследование (схема 16). Для получения гемокультуры 5—10 мл крови, взятой из локтевой вены больного, засевают в два флакона с 50—100 мл печеночного бульона. Один из них (для выделения культур Вг. melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первичной культуры Вг. abortus) — в атмосфере с 10% Oj. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно, поэтому посевы выдерживают в термостате не менее месяца. В то же время рост лабораторных культур наблюдается через 1—2 сут. На агаре бруцеллы образуют бесцветные с перламутровым блеском колонии, в бульоне — помутнение и слизистый осадок. В мазках, окрашенных по Граму, обнаруживаются мелкие (от 0,3—0,5 до 1,5 мкм) грамотрицательные коккобактериальные или более удлиненные формы (рис. 78). Они неподвижны, спор не образуют, в определенных условиях появляется видимая капсула. [c.206]

Из локтевой вены асептически берут не менее 10 мл крови и засевают по 5 мл в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (pH 7,1 —7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюкозы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага). Один флакон помещают в обычные аэробные условия, другой — в герметично закрывающийся сосуд, содержащий 10 % углекислого газа, или СОз-инкубатор. Учитывая медленный рост бруцелл, посевы выдерживают при 37 °С до 1 месяца. Через каждые 4 — 5 дней делают отсевы на скошенный печеночный агар или эритрит-агар. На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка. На плотных средах колонии появляются не ранее чем через 48 ч округлые, диаметром до 5 мм, серовато-белые, блестящие, прозрачные с янтарным оттенком в проходящем свете. При формировании изолированных колоний на плотной среде получают чистую культуру и определяют вид бруцелл (см. ниже). [c.129]

Бактериологическое и биологическое исследование. После микроскопии материал засевают на специальные жидкие и плотные среды (анаэробный кровяной агар, среда Вильсона —Блера, среда Китта—Тароцци, желточная среда). Для приготовления неселективной среды для клостридий используют в качестве основы агар для бруцелл с 5 % бараньей крови, колумбийский или сердечно-мозговой агары, в которые добавляют дрожжевой экстракт, витамин К и гемин. В качестве селективных сред (для контаминированных образцов) можно использовать анаэробный кровяной агар с добавлением неомицина или фенилэтилового спирта. Перед посевом плотные материал гомогенизируют (растирают в стерильной ступке со средой накопления) и делят на две части, одну из которых прогревают в водяной бане при 80 °С в течение 10 мин (для уничтожения вегетативных клеток сопутствующих микроорганизмов). Обе части материала исследуют одновременно. В качестве альтернативного метода (особенно при подозрении на присутствие термочувствительных штаммов С. perfringens) используют обработку материала этиловым спиртом, к 1,0 мл исследуемого гомогената или экссудата добавляют такое же количество 95%-го этанола и перемешивают их при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего этим материалом засевают указанные выше питательные среды. [c.191]

Бактериологическое исследование. Для выделения чистых культур материал засевают на селективные плотные среды с кровью и антибиотиками (как и при диагностике кампилобактериоза). Для инактивации образуюш ихся в процессе роста ингибиторов в среды иногда добавляют активированный уголь, крахмал, сыворотки. Обычно посев ведут одновременно на селективную и неселективную среду, чтобы не пропустить антибиотикочувствительные штаммы. Наиболее подходящими неселективными средами являются агары для бруцелл с 5 — 7 % лошадиной крови. Для придания селективности в состав сред обычно вводят три антибиотика ванкомицин, амфотерицин В (по 10 мкг/мл) и цефсулодин или триметоприм (5 мкг/мл). Посевы инкубируют до 7 сут при 37 °С в атмосфере, содержащей 5 % кислорода и 10 % углекислого газа. Для этого используют анаэробные контейнеры с газогенераторными пакетами (метод зажженной свечи не рекомендуется, так как концентрация кислорода при этом остается выше 15 %). [c.223]

Для выращивания ampyloba ter к бульону для бруцелл добавляют 0,16% агара для создания частично анаэробных условий. [c.229]

Добавление бацитрацина (2 ед./мл) и новобиоцина (2 мкг/мл) к среде с агаром для бруцелл (разд. 8.5.14) позволяет выделять С. fetus из испражнений и кишечного содержимого крупного рогатого скота, овец, свиней и птиц. Этот метод можно использовать вместе с методом фильтрации, описанным ранее для получения накопительных культур С. fetus (разд. 8.1.16). [c.301]

Микроаэрофил ampyloba ter fetus легко культивировать в пробирках с полужидкой средой для бруцелл (бульон для бруцелл, содержащий 0,15—0,3% агара разд. 8.5.14). Азотфиксирующие клетки Azospirillum хорошо растут в полужидкой среде с малатом, дефицитной по азоту (разд. 8.5.37 или 20.3.4). В литровых бутылях PY, содержащих слой полужидкой среды, можно получать большие биомассы этой бактерии для физиологических исследований [13]. [c.370]

Посев крови и костного мозга для выделения бруцелл рекомендуется проводить по методу Кастенеды. Для посева крови пользуются прямоугольными флаконами емкостью 100 мл, в которые разливают по 20 мл питательного агара. После стерилизации флаконы кладут так, чтобы среда распределилась и застыла равномерным слоем на поверхности одной из граней флакона. После этого во флаконы вносят стерильный печеночный бульон или бульон Мартена (рец. 40) в количестве 15—20 мл. В каждый флакон засевают по [c.270]

Вторым тестом, рекомендуемым для идентификации выделенных культур с бруцеллами, является проба на лизируе-мость культуры поливалентным бруцеллезным фагом. Глюкозо-глицериновый или мартеновский агар (1,2—1,5%, pH 7,2) разливают в две чашки Петри толстым слоем. После подсыхания поверхность среды каждой чашки засевают 0,1 мл исследуемой микробной взвеси, содержащей от 500 млн. до 1 млрд. микробных тел в 1 мл. Исследуемую культуру распределяют шпателем для получения газонного роста. На середину чашки наносят 1 каплю бактериофага. В контрольную чашку бактериофаг не вносят. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24—48 ч. [c.272]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология