Медиаторы методы идентификации

Существуют три основных методических подхода для решения этой задачи. Первый способ — избирательное окрашивание нейронов, выделяющих определенный нейромедиатор, может осуществляться с помощью преобразования естественного медиатора в его флуоресцирующее производное. В этом случае флуоресценция определенных групп клеток поможет выявить специфические связи в структурах мозга. Второй экспериментальный подход связан с введением молекул медиатора, предварительно меченного радиоактивным изотопом. Нейронные окончания, содержащие исследуемый медиатор, способны избирательно захватывать метку. Затем их легко выявить методом авторадиографии. Третий способ обнаружения специфических связей в нервной системе состоит в использовании высоко специфичной способности узнавать либо антигенные детерминанты медиатора, либо определенные ферментные белки, участвующие в метаболизме нейромедиаторов, либо нейрорецептор-ные компоненты на мембране клетки. Последние считаются наиболее убедительным свидетельством в пользу существования конкретных нейрохимических взаимодействий межцу клетками и зонами мозга. Обычно для иммунохимической идентификации используют флуоресцентный краситель или изотоп, который маркирует антитела. В последние годы широко распространились методы, использующие антитела, меченные частицами тяжелых металлов, например коллоидного золота, железа и др. [c.224]

Если синаптические контакты между нейронами настолько сложны, то как мы можем определить, какие отростки нейрона формируют данный синапс или синаптический комплекс Нейроморфологи разработали для этого несколько методик. Иногда тонкая структура синапсов отличается настолько, что этого достаточно для идентификации соответствуюш,их отростков по одному лишь морфологическому срезу, как это имеет место в случае сетчатки (рис. 5.ША). Однако в более обш,ем случае требуется трехмерная реконструкция по серии последовательных срезов (это иллюстрирует рис. 5.10Б для обонятельной луковицы). Другой метод заключается в обработке ткани антителами, выработанными на фермент, участвуюш,ий в процессе синтеза медиатора. На рис. 5.10В видно, что в ткани обонятельной луковицы, обработанной антителами, специфичными в отношении фермента глутаматдекарбоксилазы (этот фермент участвует в синтезе ГАМК), шипики клеток-зерен оказываются положительными, тогда как дендриты митральных клеток — нет. Это соответствует данным, согласно которым дендриты клеток-зерен оказывают тормозное воздействие на дендриты митральных клеток благодаря действию ГАМК в дендро-дендритных синапсах. Еш,е один метод заключается в инъекции в клетку красителя люцифера желтого или фермента. пероксидазы хрена, что позволяет узнать инъецированную клетку при микроскопии. Можно также перерезать пучок входных волокон, чтобы идентифицировать те синапсы, которые образованы дегенерировавшими после перерезки терминалями. Наконец, последний способ заключается в окрашивании ткани по методу [c.121]

Метод введения фармакологических веществ в раствор, омывающий препарат, имеет тот недостаток, что исследуемое вещество оказывает влияние на все структуры среза. Изучение реакций отдельной клетки, идентификация медиатора, локализация химических рецепторов на теле и отростках нейрона, установление морфологической и физиологической связи между отдельными нейронами — эти и другие задачи можно решать методом микро-эЛектрофоретического подведения веществ, и он с успехом используется в исследованиях на срезах. Идентификация медиаторов в мозговых структурах остается одной из самых важных проблем современной нейрофизиологии. Не представляется реальной возможности проанализировать все исследования по этому вопросу. Думается, что было бы правильным продемонстрировать на конкретном примере преимущества применения микроэлектрофореза на срезах мозга. Это наиболее отчетливо видно из исследований, проведенных японскими учеными ( hujo et al., 1975). Теоретическая основа этих исследований заключалась в предположении о различной региональной чувствительности к глутамату сомы и апикальных дендритов клеток Пуркинье мозжечка. Эту гипотезу можно проверить методом локальной аппликации глута- [c.50]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология