Окрашивание срезов тканей

В современной гистохимии для обнаружения полисахаридов на срезах тканей наиболее широко применяются два метода 1) обработка среза раствором перйодата и окрашивание образующихся альдегидов фуксинсернистой кислотой [так называемая ШИК (шифф—йодная кислота)-реакция 2) обработка среза основными красителями. Кислые полисахариды адсорбируют молекулы красителя, при этом происходит изменение его окраски — так называемая метахроматическая реакция . [c.598]

Сафранин Красный Ядра лигнин и суберин у растений используется в основном для срезов растительных тканей в сочетании со светлым зеленым для окрашивания цитоплазмы [c.214]

Липиды с эфирной связью по структуре очень сходны с триглицеридами и фосфолипидами. Различие заключается только в том, что рассматриваемая группа соединений вместо одной из ацильных групп содержит алкильную (—ОН) или алкенильную (—О—СН = СН—Н) группу [65]. Плазмалогены — липиды, содержащие алк-1-енольную группу, — были впервые обнаружены Фельгеном и Войтом в 1924 г. Разрабатывая методы гистологического окрашивания, эти авторы обнаружили, что при обработке срезов ткани кислотой происходит освобождение альдегидов. Последующие исследования показали, что альдегиды образуются в результате расщепления липидов, содержащих алкенильную группу [c.558]

Изучение структуры и функции тканей основывается главным образом на световой микроскопии с использованием различных приемов фиксации материала, его окрашивания и приготовления срезов (см. соответствующие методики в разд. 5.И и 5.12). [c.218]

Что касается практики, то для выявления метахромазии общепринятых методов не существует. По имеющимся данным, предварительная гистологическая обработка ткани на метахроматическое окрашивание не влияет. Правда, фиксация и заливка способны ослабить метахромазию. Однако это влияние незначительно. Потеря растворимых мукоидных веществ может быть предотвращена использованием замораживания — высушивания и фиксацией в парах формалина. Криостатные срезы с непродолжительной послегцтощей фиксацией также дают хорошие результаты. [c.120]

Окрашивание после обработки специфическими ферментами. Срезы тканей изучают до и после обработки такими ферментами, как рибонуклеаза н дезоксирибонуклеаза. [c.117]

Срез мозговой ткани, тщательно сохраняемый под слоем раствора, заливают 0,01 М раствором метиленового синего и оставляют на 20 с, затем промывают его и в дальнейшем сохраняют под слоем раствора сахарозы или соли. В результате такой обработки тела нервных клеток слегка окрашиваются в синий цвет, который сохраняется не менее 5 мин. По истечении этого времени окрашивание можно повторить. Однако даже без повторного окрашивания тренированный глаз различает нервные клетки на ослепительно белом фоне глий, так как они имеют желтоватый оттенок, а синаптические узлы на краю клетки еще сохраняют синее окрашивание. Это было описано ранее [9]. [c.278]

Самыми распространенными являются гематоксилин для выявления целлюлозы и сафранин для определения лигнифицированных тканей. Многие из вышеназванных красителей быстрее окрашивают центральные слои (сложную срединную пластинку), которые лучше удерживают красящее начало, а поэтому может быть эффективно осуществлено двойное окрашивание. При помещении срезов в водный раствор гематоксилина сложная. [c.100]

Микроскопия. На поперечном срезе видно характерное для корня преобладание тонкостенной паренхимной ткани. В коре находятся многочисленные тангентально вытянутые группы лубяных волокон, расположенные прерывистыми концентрическими поясами. Более мелкие группы волокон разбросаны в древесине. Волокна толщиной 10—35 жо1 со слабо утолщенными неодревеспевшими или слабо одревесневшими стенками и большим просветом. Сосуды и трахеиды расположены небольшими группами. Сердцевинные лучи одно-, реже двухрядные. В паренхиме видны многочисленные крупные клетки со слизью, находящиеся как в коре, так и в древесине. В воде слизь растворяется, клетки становятся бесцветными и кажутся пустыми. Раствор метиленового синего окрашивает клетки со слизью в голубой цвет. Для проведения двойного окрашивания срез помещают в раствор хлорида окисного железа на 20 минут, раствор удаляют фильтровальной бумагой, прибавляют спиртовой раствор метиленового синего и промывают водой. Слизистые клетки окрашиваются в желтый, волокна — в синий, сосуды — в зеленый цвет клетки паренхимы остаются бесцветными. [c.579]

Иммунофлуоресцентное окрашивание с помощью поликлональной антисыворотки представляет собой удобный и точный метод подсчета зараженных клеток и выявления места размножения вируса при анализе фиксированных срезов зараженных тканей. Используя моноклональные антитела против индивидуальных вирусных полипептидов, иммунофлуоресцентным методом можно изучать и внутриклеточную локализацию вирусных антигенов. [c.139]

Фотометрические измерения интенсивности окрашивания, развивающегося в срезах тканей при реакции Фёльгена, послужили основой для количественного определения ДНК (стр. 123) [5, 13-19]. [c.118]

Разработанный Дау (Daoust) метод предполагает нанесение тонкой пленки с с) стратом непосредственно на свежий срез ткани. После инкубации определенной продолжительности на пленке с субстратом благодаря гистохимическим реакциям или обьиному окрашиванию возникают места просветления. Неокрашенные участки на пленке соответствуют локализации ферментативной активности в срезе ткани, находящемся в контакте с пленкой (рис. 4). [c.219]

А. Необработанный материал. Б. Материал в процессе обработки. В. Плевжа и срезы ткани после разделения и окрашивания. I - предметное стекло, 2 - пленка Л желатины с ДНК, 3 - срез ткани, —желатина—глицерин, 5 - окрашенная пленка с ДНК, б - неокрашенный участок, 7 - окрашенный срез ткани. [c.220]

При прямых методах исс.иедования, т. о. при исследовании непосредственно объекта в виде ультратонких срезов и пленок, часто также прибегают к методам контрастирования, которые ос]юваны на пропитывании объекта веществами, содержащими тяжелые металлы с большой рассеивающей способностью по отношению к электронам. Этот метод, по аналогии со световой микроскопией, применяющей окрашивание животных илп растительных тканей, используют, главным образом, нри исследовании биологических объектов или полимеров для получения сведений об их морфологической структуре. [c.189]

Коппик и Фаулер [78] предложили технику окрашивания (модифицированную реакцию Толленса), при которой срезы последовательно обрабатываются насыщенной хлорной водой, 3%-ным спиртовым раствором мо-ноэтаноламина и 5%-ным водным раствором азотнокислого серебра. Структуры, содержащие много лигнина, окрашиваются в темно-коричневый цвет до черного, тогда как слабо лигнифицированные зоны окрашиваются в светло-желтый цвет до янтарного. Результаты этой цветной реакции полностью подтверждают предшествующие работы по исследованию химии клеточной стенки. Сложная срединная пластинка глубоко окрашивается, следовательно, в ней много лигнина (как показано Риттером [80], Харлоу [81.1 и А. Бейли [82]) лучевые клетки и паренхимные ткани содержат много лигнина (как показал Харлоу и Уайз [83]). Вторичные стенки волокнистых элементов у древесины лиственных пород, растущих в умеренном климате, более светлые, следовательно, они менее лигнифицированы, чем вторичные стенки хвойных пород. Стенки сосудов у лиственных пород окрашены в более темный цвет, чем окружающие волокнистые элементы, следовательно, они содержат больше лигнина мембраны пор также сильно лигнифицированы [84]. [c.103]

Если синаптические контакты между нейронами настолько сложны, то как мы можем определить, какие отростки нейрона формируют данный синапс или синаптический комплекс Нейроморфологи разработали для этого несколько методик. Иногда тонкая структура синапсов отличается настолько, что этого достаточно для идентификации соответствуюш,их отростков по одному лишь морфологическому срезу, как это имеет место в случае сетчатки (рис. 5.ША). Однако в более обш,ем случае требуется трехмерная реконструкция по серии последовательных срезов (это иллюстрирует рис. 5.10Б для обонятельной луковицы). Другой метод заключается в обработке ткани антителами, выработанными на фермент, участвуюш,ий в процессе синтеза медиатора. На рис. 5.10В видно, что в ткани обонятельной луковицы, обработанной антителами, специфичными в отношении фермента глутаматдекарбоксилазы (этот фермент участвует в синтезе ГАМК), шипики клеток-зерен оказываются положительными, тогда как дендриты митральных клеток — нет. Это соответствует данным, согласно которым дендриты клеток-зерен оказывают тормозное воздействие на дендриты митральных клеток благодаря действию ГАМК в дендро-дендритных синапсах. Еш,е один метод заключается в инъекции в клетку красителя люцифера желтого или фермента. пероксидазы хрена, что позволяет узнать инъецированную клетку при микроскопии. Можно также перерезать пучок входных волокон, чтобы идентифицировать те синапсы, которые образованы дегенерировавшими после перерезки терминалями. Наконец, последний способ заключается в окрашивании ткани по методу [c.121]

При наблюдении в световой микроскоп ткань благодаря контрастирующему красителю выглядит красной, а включения железа - интенсивно синими. Если все операции проводят очень тщательно (используют бидистиллят, очищают все стекла, сосуды для окрашивания и т.д.), то поверхностных артефактов мало. Поскольку железо-широко распространенный элемент и у позвоночных оно участвует в дыхании, его выявление в данной ткани еще не означает, что оно всегда в ней имеется. Очевидно, если железо участвует в сенсорном процессе, то оно должно всегда присутствовать в магниторецепторной системе. Исходя из этого, мы установили следующий критерий положительного окрашивания на железо. Окрашивание должно обнаруживаться в одних и тех же клетках, по крайней мере в десяти последовательных срезах, и в одних и тех же клетках определенной ткани по меньшей мере у пяти различных животных. Позитивное окрашивание при использовании этой методики не доказывает, что обнаружен магнетит, но оно свидетельствует о присутствии железа и его локализации в ткани. Железо, связанное с белками, например в гемоглобине или цитохромных ферментах, никогда не окрашивается. Этот вывод был сделан при попытке окрасить эритроциты голубя или митохондрии в исследуемых тканях. Частицы магнетита окрашиваются так же, как и любые сплавы металлического железа, поэтому в процессе препарирования и окрашивания тканей нельзя использовать никакие инструменты, содержащие железо. Мы наблюдали окрашивание селезенки голубя, которая содержит железо, отщепившееся от гемоглобина. У пчелы (Kuterba h et al., 1982), большая часть железных гранул представлена гидратом оксида железа, например в составе ферритина, и интенсивно окрашивается. Итак, окрашивание ферроцианидом калия является первым шагом при изучении железосодержащих тканей. Эта методика показывает, какие ткани и клетки содержат железо, а также позволяет установить, распределено ли оно диффузно или присутствует в виде гранул. [c.249]

В заключение необходимо отметить ряд предсказаний, вытекающих из гипотезы магниторецепции, основанной на магнетите. Их проверка позволила бы полностью и окончательно подтвердить эту гипотезу. Важнее всего, пожалуй, детальное изучение микроанатомии рецепторов. Хотя большинство содержащих магнетит структур локализовано у позвоночных по соседству с нервной тканью, фактическая объемная плотность кристаллов составляет лишь несколько частей на миллиард. Все это превращает гистологические исследования в утомительные поиски магнитосомы в стоге сена , даже если использовать методики специфичного к магнетиту окрашивания препаратов или просвечивающую электронную микроскопию тонких срезов. Далее необходима идентификация нейронов, передающих информацию от рецепторов в мозг, и регистрация их ответов на магнитные стимулы. И наконец, для выбора между магнетитным и другими возможными механизмами рецепции нужны специфические лабораторные поведенческие тесты. Например, если бы у пчел удалось выработать условный рефлекс на различение магнитного севера и юга, то эксперимент с импульсным перемагничива-нием позволил бы скачком изменить полярность внутреннего компаса, а следовательно, и выработанную поведенческую реакцию. Это уникальный тест на наличие ферромагнитного компаса, и он уже прекрасно зарекомендовал себя в опытах с магниточувствительными бактериями. К сожалению, большинство животных не способны определять полярность магнитного поля, что делает данный тест неинформативным. Однако существуют и другие возможности проверки гипотезы, открывающие широкие перспективы для будущих исследований. [c.6]

Фиксация с последующим окрашиванием клеток и тканей— один из наиболее распространенных способов подготовки объектов к исследованию в цитологии и эмбриологии. Под действием химических фиксаторов (этиловый спирт, формалин, уксусная кислота и др.) в клетке прекращаются жизненные процессы, а ее химические компоненты осаждаются. После фиксации объект промывают. Дальнейшая обработка зависит от типа приготовления препарата. Можно окрасить материал сразу для изготовления временного препарата. Для получения тонких срезов толщиной в несколько микрометров объект обезвоживают, заключают в парафин и режут на микротоме. Срезы наклеивают на предметные стекла, освобождают от парафина и окрашивают. Красители подбирают так, чтобы повысить контрастность изображения отдельных структур, а в ряде случаев и выявить их химический состав, например ДНК, РНК, белки и др. Точное содержание химических веществ определяют на приборе — цитофотометре. [c.54]

Все образцы, исследованные магнитометрическими методами (кроме костей черепа и самой решетчатой кости), были подвергнуты и гистологическому анализу. Материал, окрашивающийся с помощью специфичных к железу красителей, обнаружен во всех мягких тканях и в костном мозге, но интенсивное специфическое окрашивание на окисное железо обнаружено только в случае клиновидно-решетчатого синуса (рис. 26.5). Здесь на глубине примерно 5 мкм от поверхности кости располагается сплошной слой окрашивающегося материала толщиной около 2 мкм. Однако совместные исследования этого препарата, проведенные Дж. Такачем (лаборатория ядерной физики Оксфордского университета) при помощи протонного зонда, не выявили в нем железа, хотя срезы того же самого образца кости клиновидного синуса при гистологическом исследовании давали положительную окраску на железо (Kennaugh, личное сообщение). [c.362]

Исследователю, изучающему связанные с тканью минералы биогенного происхождения in situ с помощью просвечивающего электронного микроскопа, приходится иметь дело с инструкциями, в которых подробно описаны способы подготовки тканей. В задачи этой главы не входит даже беглое обсуждение огромного числа способов обработки, фиксации, заливки, резки, окрашивания и перенесения срезов на сетки. Читателю, интересующемуся данными вопросами, целесообразно изучить последние руководства, описывающие эти разнообразные процедуры, и посоветоваться с работающими в данной области специалистами. [c.233]

Эти методы основаны главным образом на экстрагировании белков солевыми растворами различной ионной силы и pH. Для этих целей используют криостатные срезы, а также срезы лиофилизированного материала или ткани, подвергнутой замещению в замороженном состоянии. Срезы, предварительно обработанные растворителями (водой, 1%-ным раствором КаС1, буферными растворами или растворами сульфата аммония или аммиака), подвергают специальному окрашиванию на белок (реакция Мил-лона или реакция с ДНФБ) одновременно с нефиксированными контрольными срезами. Разли я между срезами указывают на присутствие белка, вымьгоаемого определенным раствором. [c.66]

Гистологический срез лимфоузла. Лимфоузел окружен соединительнотканной капсулой и имеет три основные области В-клеточную корковую, или кортекс (К), Т-клеточную паракортикальную (П) и мозговую (М), образованную тяжами лимфоидной ткани (Т- и В-клеточная область, богатая плазматическими клетками и макрофагами). Окрашивание гематоксилином/эозином. X 10. По Zu ker-Franklin D., [c.50]

Нейтрофилы в качестве эффекторных клеток иммунного ответа при микозе, вызванном мукоровым грибом. Представлен срез из легочной ткани больного этим типом микоза в данном случае это оппортунистическая инфекция, возникшая при нарушении иммунитета. Воспалительный инфильтрат вокруг грибных гиф состоит почти исключительно из полиморфноядерных нейтрофилов. Это заболевание особенно часто возникает при нейтропении (отсутствии нейтрофилов). Окрашивание гематоксилином и эозином. [c.332]

Порядок работы. Окрашивание тканей кислым фуксином. Чтобы определить состояние клеток стеблевого конуса нарастания, через нижнюю полусантиметровую часть побега по центру его делают продольный срез. В последующем просматривают лишь одну половину, которую предварительно погружают в 0,3%-й раствор фуксина па 15 мин. Затем при помощи [c.224]

С помощью красителей удается определить внутриклеточную локализацию и активность какого-либо фермента на специально приготовленных тканевых срезах (гистохимическое окрашивание). Чаще всего применяют различного рода соли тетразолия, так как продукт восстановления (формазан) представляет собой нераство-. римое ярко окрашенное соединение и местоположение осадка указывает на участок ферментативной активности. Ферменты, прочно связанные с мембранами (такие, как сукцинатдегидрогеназа), обнаружить легко, но растворимые ферменты могут диффундировать из тканевых срезов, если не предпринять специальных мер. Для предотвращения диффузии срезы предварительно обрабатывают поливиниловым спиртом, что удерживает ферменты внутри ткани. Количественные данные по ферментативной активности можно получить с помощью микроденситометрии или элюировав формазан и определив его количество спектроскопически. Ферментативную активность рассчитывают по отношеншо к объему среза или, лучше, к азоту белка. [c.233]

Смотреть страницы где упоминается термин Окрашивание срезов тканей: [c.29] [c.376] [c.241] [c.236] [c.123] [c.190] [c.413] [c.20] [c.196] [c.387] [c.493] [c.248] [c.249] [c.330] [c.332] [c.248] [c.249] [c.140] [c.225] [c.434] [c.151] [c.225] [c.219]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология