Метод двойной диффузии в агар

Метод двойной диффузии. В стерильные чашки Петри наливают 2% агар без добавления сыворотки. Так же как в предыдущем случае, при постановке реакции методом простой диффузии устанавливают матриксы и наливают еще один слой среды. [c.133]

Для анализа антигенов, разделенных с помощью электрофореза или электрофокусирования в полиакриламидном геле, разработаны многочисленные методы иммунодиффузии. Так, для этой цели можно использовать различные варианты двойной иммунодиффузии. Цилиндрические столбики геля разрезают продольно на две половинки (см. разд. 1.15.6), а из пластин нарезают полоски, содержащие разделенные антигены. Разрезанный гель помещают на стеклянные пластинки, заливают их теплым раствором агара и дают ему застыть. Канавки для антител располагают на соответствующем расстоянии от полиакриламидного геля. Как только полиакриламидный гель покроется слоем агара толщиной 1 мм, в непосредственной близости от него сразу же вырезают канавку для антисыворотки. Если для анализа используют разрезанные вдоль столбики полиакриламидного геля, то их кладут на слой агарового геля и в нем рядом с полоской геля по обеим ее сторонам быстро вырезают канавки для антител. Преципитаты образуются под полоской полиакриламидного геля. Столбик полиакриламидного геля можно также разрезать в поперечном направлении на диски и проанализировать присутствующие в них антигены методом двойной радиальной диффузии 203, 394]. [c.244]

Широко используемый метод двойной диффузии в агаре предложенный О. Ухтерлони (О. ОисЬ1ег1опу, 1948), состоит в том, что антиген (ы) и антитело a) помещают в лунки, проделанные в топком слое геля на [c.254]

М КС1 и 0,015 М Mg b). Полноту насыщения контролируют, определяя наличие антител в надосадочной жидкости методом двойной диффузии в агаре (А. И. Гусев, 1968) или по реакции кольцепреципитации. Готовые сэндвич-сорбенты суспендируют в стандартном буфере из расчета 5 мг/мл. Сэндвич-сорбенты рекомендуется готовить небольшими порциями, рассчитанными на 1— [c.295]

Самым распространенным методом определения антигена и антител является преципитация в агаре (реакция двойной диффузии в геле по Оухтерлони). Преимуществами данной реакции являются относительная простота, высокая специфичность, отсутствие ложноположительных и ложноотрицательных ответов, небольшой расход материалов и возможность определения полноты антигенной идентичности. Недостатками реакции являются низкая чувствительность, длительность получение предварительного ответа через 24 ч, а окончательного—лишь спустя 48—72 ч. Для исследования берут кровь больного в количестве, необходимом для получения 0,3 мл сьшоротки. Реакции ставят на пластинах, в 1% агаре, в котором вырезают лунки для ингредиентов реакции. В качестве тест-системы используют стандартный австралийский антиген и соответствующую специфическую антисьшоротку. Учет реакции проводят через 1—3 дня по появлении дуг преципитации между лунками. [c.248]

Показано, что сыворотка больных аспергиллезом легких имеет на-иболее высокий титр при использовании методов непрямой гемагглюти-нации и непрямой иммунофдюоресценции в тоже время только 91 и 87 соответственно были позитивны при проточном иммуноэлектрофорезе и двойной диффузии в агар. [c.42]

В слое агара пробивают лунки, располагая их в определенном порядке. В обычных опытах по двойной диффузии антисыворотку вносят в центральную лунку, а растворы антигена — в песколько лунок, располагая их вокруг центральной. Растворы антигена и аптител диффундируют в агаре навстречу друг другу, и через какое-то время в зоне, где оба реагента оказываются в подходящих соотношениях, образуется преципитирующий комплекс. В этой точке реагенты выпадают из раствора и появляются видимые полосы преципитации. Piepeагирующий антиген (или антитела) может проходить сквозь полосу преципитации, ие задерживаясь. Полосы преципитации можно наблюдать визуально при подходящем освещении, их можно сфотографировать, а можно и воспользоваться белковыми красителями. Если в препарат вируса ввести радиоактивную метку, то для выявления полое преципитации можно воспользоваться радиоавтографией в соответствующих условиях метод радиоавтографии отличается высокой чувствительностью [1185]. [c.366]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология