Гемагглютинация постановка реакции

Рис. 7.1. Паиель для микротитрования, используемая для постановки реакции прямой гемагглютинации. Ряды луиок размечены для исследуемых

Рис. 85. Постановка реакции торможения гемагглютинации.

Рис. 7.2. Постановка реакций прямой гемагглютинации и прямого гемолиза, демонстрирующих эффект предварительной обработки сыворотки 2-мер-каптоэтаиолом (2МЭ). Сыворотки, тестируемые в рядах В и С, D и Е, получены после первичной иммунизации (преобладают IgM). Комплемент добавляли в лунки рядов D и Е для демонстрации литической активности IgM и ее изменения после добавления 2-МЭ (ряд Е). Сыворотки, тестируемые в рядах F и G, получены в ходе вторичного иммунного ответа (преобладают IgG), Поэтому 2-МЭ оказывает меиьший эффект на агглютинацию (ряд G). В лунках 06, 07 и 08 наблюдается агглютинация без лизиса.

Рис. 6.3. Титрование вируса гриппа в реакции гемагглютинации. Для постановки реакции готовят серии двукратных разведений исследуемого вируса в планшетах с круглодонными лунками, как описано в разд. 3.1. Конечной точкой считают минимальное разведение вируса, при котором наблюдается агглютинация 50% эритроцитов, В ряду 1 (а) разведения 1/2—1/16 дают полную агглютинацию, в то время как более высокие разведения не дают агглютинации. Конечной точкой считают такое разведение вируса, которое содержит 1 гемагглютини-рующую единицу (ГАЕ), т. е. количество вируса, необходимое для агглютинации стандартного объема 1%-ной суспензии эритроцитов. В ряду 1 (а) конечная точка лежит посередине между 1/16 и 1/32, т. е. составляет 1/24. Аналогично конечные точки для 2-го, 3-го и 4-го рядов составляют 1/768, 1/192,

Реакция непрямой гемагглютинации. Для постановки РНГА при диагностике сыпного тифа необходимы 1) сыворотка больного, подлежащая исследованию, инактивированная общепринятым способом и истощенная бараньими эритроцитами для удаления неспецифических агглютининов [c.300]

Постановка РГА. После вскрытия куриного эмбриона аллантоисную жидкость отсасывают и разливают в пробирки или лунки плексигласовой пластины в объеме 0,5 мл (для контроля берут 0,5 мл такой же жидкости незараженного эмбриона). Затем добавляют по 0,2 мл 1% суспензии отмытых куриных эритроцитов и выдерживают при комнатной температуре. Результаты реакции учитывают через 40 мин после оседания эритроцитов I I I I выраженная гемагглютинация — тонкая [c.62]

Для постановки гемагглютинации определенное количество эритроцитов смешивают в лунках планшета с равным объемом исследуемой суспензии вируса в разных разведениях. Планшет затем инкубируют 30—45 мин при комнатной температуре без перемешивания. По результатам реакции можно определить, при каком разведении вирусного препарата утрачивается гемагглютинирующая активность. Количество вируса, агглютинирую- [c.170]

Для постановки реакции гемагглютинации необходимы следующие ингредиенты [c.227]

При постановке реакции гемагглютинации (FPV) с культуральной жидкостью из зараженной камеры гемагглютинины обнаружены в титре 1 40, 1 80, 1 160. Культуральная жидкость из незараженных зеркальных камер положительной реакции гемагглютинации не давала, что свидетельствует об отсутствии вируса. [c.72]

Хлористый натрий — 8,76 г Однозамещенный фосфат натрия — 31,20 г Чтобы получить нужное значение pH для постановки реакции гемагглютинации, растворы А и Б смешивают, как указано в приведенной таблице. [c.110]

Супернатант переносят в чистые пронумерованные пробирки. В результате очистки получают сыворотки, разбавленные в четыре раза. Их попользуют для постановки реакции торможения гемагглютинации. Сыворотки можно хранить при 4 °С в течение ночи. [c.316]

Гуморальный иммунный ответ экспериментальных животных на эритроцитарный антиген изучали в реакции прямой гемагглютинации [102]. Постановку реакции осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями [103]. За титр антител, выраженный в log , принимали конечное разведение сыворотки, при котором наблюдалась видимая агглютинация тест-антигена (1% ЭБ). [c.227]

Лабораторная диагностика. Материалом для обнаружения вируса или вирусного антигена служат мазки-отпечатки со слизистой оболочки носовой полости, отделяемое носоглотки, при летальных исходах — кусочки легочной ткани или мозга. Экспресс-диагностика основана на выявлении вирусного антигена с помощью РИФ разработана тест-система для ИФА. Для вьщеления вирусов используют куриные эмбрионы. Индикацию вирусов гриппа осуществляют при постановке реакции гемагглютинации. Идентифицируют выделенные вирусы поэтапно типовую принадлежность определяют с помощью РСК, подтип — РТГА. Серодиагностику проводят с помощью РСК, РТГА, PH в культуре клеток, реакции преципитации в геле, ИФА. [c.251]

Вирус краснухи вызывает гемагглютинацию эритроцитов многих видов животных. Чаще всего в РТГА используют эритроциты однодневных цыплят. Гемагглютинирующим (ГА) антигеном вируса краснухи при постановке этой реакции служит выращенный в культуре и обработанный Твин 80 и эфиром вирус. Предварительная обработка увеличивает ГА-титр вируса. [c.314]

Иммунизация животных эритроцитами барана позволяет лродемонстрировать в учебных целях кинетику и клеточные основы образования IgG и IgM, а также получить практические навыки в постановке реакций агглютинации, обратного гемолиза и титрования гемолизинов. Кроме того, использование эритроцитов, нагруженных антиэритроцитарными антителами определенного изоти па, аллотипа и т. д., лежит в основе реакций гемагглютинации для выявления антиглобулинов как одного из методов специфического тестирования и титрования антиглобулиновых антисывороток. [c.88]

В контрольны х лунках, не содержащих сыворотки, не должно наблюдаться спонтанной агглютинации клето к. Такая проблема редко вюз нижает при использовании свежих клеток, обладающих высоким отрицательным поверхностным зарядом. Если же используют эритроциты, нагруженные растворимым антигеном ( для постановки реакции пассив ной гемагглютинации), поверхностный заряд зачастую уменьшается, и вследствие этого 1П0является воз1можность спонтанной агглютинации. Эту. проблему можно решить, применяя для приготовления разведений раствор, содержащий белок. При по-станов ке пря мых реакций в этом, как правило, нет необходимости. [c.245]

Эритроциты можно сенсибилизировать антителами, как описано в разд. 3.3.2. Используя для связывания с эритроцитами три концентрации антител, обычно мюжно с nepiboro раза определить дозу, дающую крайне чувствительный антиглобулиновый тест,. без какой-либо тенденции к спонтанной агглютинации. Однако в то М случае, если эритроциты, нагруженные антиг ло булинами в оптимальной концентрации, все же проявляют склонность ж образованию (конгломератов в безбелковом буфере, можно рекомендовать проводить тест с использованием буфера, содержащего. 2% инактивированной нагреванием сыворотки. плода коровы (СПК). Постановка реакции аналогична таковой в случае прямой гемагглютинации, однако в связи с ее высокой чувствительностью для определения конечной точки титрования воз можно придется титровать антиглобулины в разведениях, превышающих 24-луночные серии, либо же начинать титрование с разведения 1 1000. Для достижения максимальной чувст вительности можно использовать 0,5%-ную суспензию сенсибилизированных клеток. [c.254]

После промывания эритроцитов приступают к сенсибилизации их антигеном. Отмытые эритроциты в объеме от 0,1 до 1 мл смешивают с антигеном, количество которого определяется его качеством и способностью адсорбироваться на эритроцитах. Смесь антигена с эритроцитами помещают в термостат на 1—2 ч, а иногда, по условиям опыта, на более лродолжительное время. После инкубации взвесь сенсибилизированных эритроцитов центрифугируют, отмывают 2—3 раза изотоническим раствором хлорида натрия и из промытого осадка готовят 0,5—1% взвесь эритроцитов для постановки реакции гемагглютинации. Приготовленная взвесь может храниться в холодильнике при температуре 3—4°С до появления признаков гемолиза. [c.125]

Более чувствительным методом диагностики туляремии служит реакция пассивной гемагглютинации, дающая положительный результат с конца 1-й недели заболевания. Реакцию ставят объемным способом в полистероловых пластинах с лунками. Перед постановкой реакции исследуемые сыворотки инактивируют прогреванием при 56 °С в течение 30 мин и истощают бараньими эритроцитами (см. с. 103). Из инактивированной сыворотки готовят ряд последовательных двукратных разведений (от 1 10 до 1 2560) на изотоническом растворе хлорида натрия с 1% нормальной кроличьей сыворотки. Приготовленные таким образом разведения разливают в лунки пластин по 0,5 мл. В качестве антигена используют туляремийный зритроцитарный диагностикум, представляющий собой взвесь консервированных формалином бараньих эритроцитов, сенсибилизированных ту-ляремийным антигеном. К каждому разведению сыворотки прибавляют по 1 капле 2,5% взвеси диагностикума. [c.266]

Активность антиаллотипических сывороток часто можно-тестировать в реакции преципитации в геле, однако не все сыворотки мышей содержат преципитирующие антитела. В качестве более чувствительного метода применяют реакцию пассивной гемагглютинации, которая, кроме того, легче поддается количественному учету. Можно обработать эритроциты формальдегидом, ковалентно присоединить к их поверхности иммуноглобулины нужного аллотипа и работать с одной и той же серией таких индикаторных клеток по меньшей мере в течение 6 месяцев. Постановка реакции гемагглютинации в микротитраторе позволяет за короткое время оттитровать большое количество индивидуальных сывороток. [c.213]

С Другой стороны, ВПМ агглютинирует эритроциты мыши и хомячка. Методические аспекты постановки реакции гемагглютинации описаны в работе Компапса и др. [11]. [c.139]

Постановка реакции гемагглютинации. С помощью 0,15 М. раствора Na l готовят двукратные разведения исследуемой белковой фракции (по 0,2 или, 0,5 мл), к которым прибавляют равный объем 2% суспензии эритро-дитов. Пробы инкубируют в течение 1 ч.при 37 С, после [c.256]

Реакция непрямой пассивной) гемагглютинации. Наиболее высокой адсорбционной способностью обладают эритроциты. Реакция с использованием эритроцитов называется непрямой, или пассивной, гемагглютинацией (РИГА, или РИГА). Для постановки РНГА могут быть использованы эритроциты барана, лошади, кролика, курицы, мыши, человека и другие, которые заготавливают впрок, обрабатывая формалином или пгютаральдегидом. Адсорбционная емкость эритроцитов уг(еличивается при обработке их растворами танина или хлорида хрома. [c.61]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология