Антисыворотка контроль качества

II. Антитела. Обычный тест на определение специфичности антисывороток (рис. 6.12,Л). В качестве контроля эффективны антисыворотки против суммарного пула сывороточных белков. [c.217]

Пробы инкубируют в панелях Терасаки, в лунки которых вносят по 10 мкл соответствующих разведений антисыворотки или перитонеальной жидкости. Параллельно в качестве контроля в лунки вносят такие же разведения нормальной сыворотки, а в две лунки — раствор, используемый для приготовления разведений. Для создания влажной атмосферы по периферии панелей наливают воду, и во время работы стараются как можно реже их открывать, чтобы свести к минимуму испарение жидкости. В лунки добавляют по 5 мкл суспензии бактериофагов в фосфатном буфере с желатиной (состав буфера см. в приложении). содержащем 20% питательного бульона (для того чтобы предохранить фаги от разрушения в ходе длительной инкубации). Число фаговых частиц (в единицах образования зон лизиса) в 5 мкл этой суспензии должно составлять 1000. Закрытую панель Терасаки помещают во влажную атмосферу в стек- [c.498]

Контроль колибактерииа осуществляют поэтапно, в процессе производства полуфабриката и готовой продукции. Поскольку действующим началом колибактерииа являются живые бактерии, основу контроля качества препарата составляют определение числа живых клеток в расчете на дозу и учет антагонистической активности к тест-штаммам возбудителей дизентерии Флекснера и Зонне Кроме этого в схему контроля входит определение остаточной влажности (не более 4—5%), агглютинабельности культуры специфической антисывороткой, определение безвредности на лабораторных животных, контроль на отсутствие постоянных микроорганизмов. [c.584]

Указанием на положительную реакцию служит локальное отложение продукта реакции — темно-коричневого преципитата. Отрицательные контроли, ставящиеся параллельно с исследуемыми образцами, представляют собой препараты клеток на стеклах, обработанные на этапе IV буфером для промывки вместо антикератиновой антисыворотки. В качестве положительного контроля можно использовать линии клеток карцином, такие как 5СС4 или 5СС15, или даже срезы кожи. Более подробно с этим методом можно ознакомиться в работах [35 и 36]. [c.151]

Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод — это оценка чистоты антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность, титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля качества, в некоторых случаях включающих в себя определение изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный выбор теста (табл. 1.2)—.например, выбор между иммунофлуоресцентным и иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков тест-систем следует подходить осторожно. [c.30]

М4 сохранял около 40% исходной активности. В то же время добавление 10 мкл той же сыворотки оказывалось достаточным для удаления основной массы этого изофермента из раствора. На рис. 21-1, показаны результаты, полученные при работе с антисывороткой, обладающей высокой ингибирующей активностью. Добавление менее 5 мкл такой сыворотки оказывается достаточным для полного ингибирования и преципитации присутствующего в растворе изофермента. Таким образом, для каждой новой полученной порции антисыворотки необходимо тщательно анализировать соотношение ингибирующей и пре-ципитирующей активности. Хороший контроль качества анти-сыворотки необходим для обеспечения достоверности и эффективности анализа. [c.320]

Потребность в полиспецифичных преципитирующих антисыворотках (и контроль их качества), равно как и значение самих преципитирующих методов, в связи с разработкой технологии получения МКА не снижается. [c.30]

В каждую лунку с помощью гамильтоновского шприца на 50 мкл вносят по 1 мкл каждой типирующей антисыворотки. Расположение определенных антисывороток на панелях должно быть единообразным. Лунки отрицательного контроля содержат среду Мак-Коя в качестве положительного контроля используют кроличью антисыворотку к лимфоцитам человека (АЛС). АЛС высокого титра нужно предварительно разбавить, чтобы избежать загрязнения соседних лунок антилимфоцитарными антителами во время добавления клеток и комплемента. [c.232]

МЛ Ю7о-ной суспензии на мышь. Наряду с опытной группой животных, получивших фактор, антиген и В-клетки, необходимо ввести две контрольные группы, из которых одна получала бы В-клетки и антиген, а другая (в качестве контроля на антигенную специфичность) — фактор, В-клетки и контрольный антиген, не дающий перекрестных реакций с испытуемым. Для сравнения в опыт следует также включить группы животных, получающих либо только Т-клетки, либо только В-клетки, либо один лишь испытуемый антиген. Через 8—14 дней после переноса (в зависимости от природы антигена и линии мышей) у животных берут кровь и извлекают селезенку. Целесообразно и титровать сывороточные антитела, и определять число антителообразующих клеток (АОК) в селезенке. Для этого используют общепринятые методы, применяя в качестве индикаторных клеток эритроциты, сенсибилизированные испытуемым антигеном. Синтетические полипептиды обычно присоединяют к БЭ с помощью хлорида хрома (III). Условия оптимального присоединения варьируют в зависимости от природы эритроцитов и антигена, и их следует определять заранее. Обычно смешивают в указанной последовательности равные объемы осадка эритроцитов, антигена (в концентрации от 1 до 10 мг/мл) и СгС1з (1—10 мг/мл). Все ингредиенты реакции готовят на физиологическом растворе без фосфатов. Смесь инкубируют 5 мин при комнатной температуре, затем добавляют избыток физиологического раствора, забуференного фосфатами, и клетки тщательно отмывают. Если при этом наблюдается выраженный гемолиз, содержание СгС1з следует уменьшить. Эффективность сенсибилизации эритроцитов проверяют непосредственно после присоединения антигена в реакции агглютинации со стандартной антисывороткой. В большинстве случаев к эритроцитам присоединяют антиген, использованный для иммунизации. Однако в случае, если антигеном служит (Т, 0)-А-Ь, для определения АОК в качестве индикаторных клеток обычно используют эритроциты, сенсибилизированные (Т, 0)-Рго-Ь, которые, как правило, дают более легко учитываемые зоны гемолиза. [c.331]

Флуоресценцию наблюдают в темнопольном микроскопе флуоресцентной приставкой. Ядра, содержащие Т-антиген, имеют желто-зеленую окраску и темные ядрышки (рис. 8.7). Позднее (через 36—48 ч после начала инфекции) Т-антиген локализуется уже не только в ядрах, но и в цитоплазматических включениях. В качестве контроля исследуют неинфициро-ванные культуры, обработанные флуоресцирующей антисывороткой, для исключения неспецифической флуоресценции. При подсчете положительных клеток учитываются только те, в которых четко видны окрашенные ядра. Мертвые клетки обычно дают высокий уровень неспецифической флуоресценции. [c.244]

Действительно, добавление антисыворотки против БХШ 310 к инкубируемым в состоянии 4 изолированным из стрессированных проростков озимой пшеницы митохондриям вызвало падение скорости нефосфорилирующего дыхания и увеличение коэффициента дыхательного контроля (рис. 35). При этом необходимо отметить, что неиммунная сыворотка, использованная в качестве контроля, не оказывала влияния на энергетическую активность изолированных митохондрий. [c.69]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология