Антигены контрольные

Реакция Николаева основана на идентификации величины белковой корпускулы по способности выпадать в осадок при определенной концентрации сульфата аммония. Известно, что чем больше относительная молекулярная масса белковой молекулы, тем при меньшем насыщении соли она выпадает в осадок. Антитела и антигены любой специфичности и природы будут иметь корпускулы меньшей относительной молекулярной массы, чем образуемые при их взаимодействии иммунные комплексы, состоящие не менее чем из 2 молекул. Следовательно, выпадение белков в такой системе будет происходить при добавлении меньшего количества химического реагента, чем в случае, когда реакция антиген — антитело не произойдет. В связи с этим учет реакции основан на сравнении объемов раствора сульфата аммония, необходимого для появления заметной мути (т. е. начала выпадения глобулинов) в опытных и контрольных пробирках. Достигается это повторными добавлениями равных объемов соли (по 0,1 мл, а затем по каплям) и регистрацией мути (визуально или с помощью нефелометра). Если при достижении некоего объема раствора соли муть появится лишь в опытных пробирках, но будет отсутствовать в контрольных, реакцию считают положительной, а разведение сыворотки принимают за титр. В реакции используют сыворотки и их разведения в объеме 1 мл (реже 0,5 мл), а антиген в объеме 0,1 мл. Добавление сульфата аммония начинают через 2—3 мин после тщательного смешивания антигена с сывороткой. [c.247]

Сравнение ассоциаций аллелей системы антигенов HLA и групп крови АВО с теми или иными заболеваниями выявляет некоторые различия. HLA-ассоциации, как правило, намного сильнее. Для большинства ассоциаций с группами крови АВО характерно, что относительные частоты среди больных превышают частоты в контрольных группах не более чем вдвое, тогда как для HLA-ассоциаций эти частоты обычно намного выше. Однако очень высокая предрасположенность носителей антигена HLA-В27 к анкилозирующему спондилиту была исключением, для большинства ассоциаций эти частоты значительно ниже. Таким образом, имеющиеся данные свидетельству- [c.268]

Козьи антитела против КК-ММ титровали также по их способности к преципитации антигенов. Контрольный препарат сыворотки человека, содержащий 80% очищенного изофермента КК-ММ и 20% очищенного КК-МВ (общая ферментативная активность 1300 МЕ/л при 37 °С), инкубировали 5 мин при комнатной температуре с различными разведениями антисыворотки. Далее добавляли избыток иммобилизованных вторых антител и инкубировали еще 5 мин. После центрифугирования полноту удаления КК-ММ и КК-МВ из супернатанта проверяли с помощью электрофореза, предварительно сконцентрировав образец в 5 раз. Для эффективного ингибирования и преципитации, как правило, требовалось разведение антисыворотки в 50—200 раз. [c.328]

Принцип метода. После электрофоретического разделения исследуемого белка в агаровом геле компоненты специфической иммунной сыворотки диффундируют навстречу полученным фракциям через слой агарового геля, содержащий известные (контрольные) антигены, которые абсорбируют соответствующие антитела и. задерживают их дальнейшую миграцию к определяемым антигенам. В результате в образовании полос преципитации принимают участие только те антигены исследуемого образца, которые отличаются от контрольных. [c.150]

Область применения. Этот метод можно использовать для идентификации отдельных компонентов белковых смесей неизвестного состава в том случае, если исследователь располагает соответствующей иммунной сывороткой и смесью контрольных (абсорбирующих) антигенов. [c.151]

В большинстве своих, работ Ландштейнер ограничивался визуальной оценкой количества осадка, образовывавшегося антисывороткой с контрольным антигеном, и выражал это количество различным числом знаков + знаком обозначалось наличие следов осадка. [c.656]

Сродство гаптена по отношению к антителу может быть оценено пределом, до которого определенное количество гаптена ингибирует образование осадка при воздействии гомологичного контрольного антигена на антисыворотку, или же количеством гаптена, необходимого для растворения осадка, образованного известным количеством реагентов. В этих опытах присутствие небольшого количества примесей в г аптеке или антител против примеси, находящейся в иммунизирующем антигене, не оказывает заметного влияния на результат. [c.657]

В большом числе экспериментов Полинг с сотрудниками определили сродство гомологичных и гетерологичных гаптенов по отношению к антителам, исходя из предела разведения, в котором они еще растворяли определенное количество осадка, образованного антителом и гомологичным антигеном. Оптимальное количество гомологичного контрольного антигена добавлялось к антисыворотке в присутствии различных количеств гаптена, а образовавшийся осадок определялся химическими методами. На рис. I показаны результаты одного из таких опытов, , . i [c.659]

Учет реакции производят через 1—2 мин. В случае положительной реакции в первой пробирке на границе между сывороткой и исследуемым антигеном появляется преципитат в виде белого кольца. В остальных (контрольных) пробирках преципитат не образуется (рис. 57). [c.116]

Поставить РСК (первую и вторую фазы) для определения присутствия специфических антител в испытуемой сыворотке по известному антигену. Объяснить результаты контрольных проб и необходимость их постановки, исходя из механизма РСК. [c.119]

Полуколичественная оценка /50 на ранних стадиях культивирования гибридом может быть осуществлена методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. В лунки платы для миКро-титрования, покрытые антигеном, использованным для получения моноклональных антител, помещают по 25 мкл растворенного в фосфатно-солевом буфере с тритоном перекрестно реагирующего антитела, концентрацию которого варьируют от 1 10 до 1 10 М. Затем в каждую лунку добавляют 25 мкл среды культивирования гибридом, разведенной в 2 раза буфером, содержащей моноклональные антитела. Аналогичным образом параллельно титруют исходный антиген, к которому были получены моноклональные антитела. В качестве контроля титрование сходного и перекрестно реагирующего антигенов осуществляют в присутствии 25 мкл разведенной в 2 раза среды культивирования гибридом, не содержащей моноклональных антител. Контрольные и опытные образцы инкубируют 1 ч при 37°С, а затем обрабатывают планшеты по методике для проведения непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. [c.173]

А, транскрипция которой находилась под контролем промотора вируса саркомы Рауса или ци-томегаловируса. Хотя уровень экспрессии гена нуклеопротеина был настолько низок, что не поддавался регистрации, через 2 нед после иммунизации в крови мышей обнаруживались антитела к нему. Выживаемость иммунизированных мышей оказалась значительно выше, чем мышей из контрольной группы (рис. 11.5). Более того, они были нечувствительны и к другому штамму вируса гриппа. Такая перекрестная защита не вырабатывается при введении традиционных противогриппозных вакцин, полученных на основе поверхностных антигенов вируса, и поэтому каждая вакцина специфична лишь к одному штамму вируса. Более того, традиционные вакцины сохраняют свою эффективность только до тех пор, пока остаются неизмененными поверхностные антигены. К сожалению, для генов поверхностных антигенов характерна высокая частота мутаций, что приводит к появлению существенно различающихся штаммов вируса. Кбровые же белки, такие как нуклепротеин, относительно стабильны и активируют иммунную систему по другому механизму, чем поверхностные антигены. [c.233]

Нанесение на стекло полосок геля, содержаищх абсорбирующие антигены и иммунную сыворотку. По окончании электро-4юреза рядом с полоской геля, содержащего разделенные антигены, наливают расплавленный агар, смешанный с раствором контрольных (абсорбирующих) антигенов, таким образом, чтобы получилась вторая полоска шириной 5 мм. После затвердения нанесенного агара рядом со второй наносят третью полоску агарового геля, содержащую иммунную сыворотку. В результате на одном стекле оказываются рядом друг с другом три полоЬки агарового гелй, образующие а) зону специфической иммунной сыворотки, [c.152]

Реакция встречного иммуноэлектрофореза (РВИЭФ). Эта реакция основана на встречной диффузии в электрическом поле антигенов и антител и появлении внутри прозрачного геля видимого преципитата. В агаровом или агарозном геле делают лунки диаметром 2 — 3 мм, причем расстояние между лунками для сыворотки и АГ должно составлять 5 — 6 мм. Лунки располагают попарно (одна — для АГ, вторая — для сыворотки) или по три (одна — для АГ, вторая — для испытуемой сыворотки, третья — для контрольной сыворотки). Лунки для сыворотки располагают ближе к аноду, а для АГ — к катоду. Реакцию проводят с несколькими разведениями АГ, продолжительность электрофореза — 90 мин. Результаты реакции учитывают сразу же после окончания электрофореза, отмечая количество и локализацию линий преципитации при сравнении их с контрольной тест-системой. [c.69]

Рис. 17-28. Принцип метода ра-диоиммунного анализа. Немеченый антиген конкурирует с меченым антигеном за свизывание с антителами. Это снижает количество радиоактивности в преципитате антитела с антигеном, и по величине этого снижения (в сравнении с контрольным образцом) можно определить концентрацию автигена в неизвестном образце.

Группировки, которые присоединяются к белкам и обусловливают новую специфичность их реакций, названы определителями или детерминантами. Вещество, использованное для иммунизации, и вещество, полученное из другого белка, который используется для контроля, названы соответственно иммунизи-pijfou uM и контрольным антигенами. Антитело против такого иммунизирующего антигена и контрольный антиген, содержащие тот же самый детерминант, называют гомологичными друг другу. [c.656]

Недавно было показано, что даже очень незначительные примеси в антигене могут вызвать выработку непропорционально большого количества антител. Так, количество антител против овальбумина в сыворотке лошади, иммунизированной кристаллическим овальбумином, было меньше, чем количество антител г[ротив кональбумина, который находился в качестве примеси в овальбумине ( ohn et al., 1949). Точно так же антисыворотка, полученная в результате иммунизации антигенами, образованными (—)-изомером, содержащим очень небольшое количество (4 )-изомера, может содержать значительное количество антител против (+)-изомера. Может оказаться, что антитела против (—)-изомера будут давать менее специфичную реакцию, чем она является на самом деле, поскольку антитела против (+)-изомера будут давать осадок с контрольными антигенами, образованными примесью (-Ь)-изомера. [c.656]

Это осложнение можно обойти, использовав метод ингибирования. Было найдено, что некоторые иизкомолекулярные вещества, содержащие специфическую детерминаитную группу (в нашем примере остаток фенилмышьяковой кислоты), взаимодействуя с антителом, не дают осадка. Конкурируя с контрольными (на данное антитело) антигенами, эти вещества связывают антитела сыворотки и тем самым ингибируют образование осадка антисыворотки с контрольным антигеном. Такие ингибирующие веще-. Ства были названы гаптенами. [c.656]

Выполнить эти условия трудно, так как, во-первых, химические аллергены, как иравило, в той или иной м е обладают денатурирующим белок действием. Поскольку по методике интенсивность денатурации белка под действием химического соединения не учитывается, а требуется лишь путем разведения аллергена уравнять степень ее по отношению к контрольному антигену, замена хотя бы одного аллергена другим триводит к изменению рабочих концентраций специфического или контрольного антигена. Во-вторых, объем сульфата аммония, добавляемого в контрольные пробы, будет зависеть от влияния коллоидного состояния и характера протеино-граммы контрольных и испытуемых сывороток. Все эти моменты не позволяют разработать стандартные условия реакций и, по-видимому, явились причиной отсутствия в публикациях данных о рабочих концентрациях. [c.248]

В опытах по количественному олигосахаридному ингибированию вначале устанавливают содержание антитела в используемой сыворотке и выбирают подходящие количества антигена и антисыворотки для максимального осаждения. К отмеренному объему исследуемой сыворотки прибавляют известные количества олигосахарида в возрастающей концентрации. После доведения растворов в пробирках до одинакового конечного объема и перемешивания пробирки помещают на 30 мин в водяную баню при 37°. После этого прибавляют антиген, снова перемешивают и выдерживают при 37° еще 30 мин. Одновременно готовят контрольные растворы, содержащие только сыворотку и сыворотку с антигеном. Пробирки помещают в холодильник на неделю, причем растворы перемешивают дважды в день. Затем выполняют промывку, описанную выше. Степень ингибирования вычисляют ио разности в иог гощении раство-ров, содержащих ингибитор, и контрольных растворов. [c.439]

В других экспериментах этой же группы ученых продемонстрирована устойчивость трансгенных животных с геном антисмысловой РНК против лейкоза крупного рогатого скота к заражению вирусом лейкоза. У траисгенных кроликов с геном антисмысловой РНК против лейкоза крупного рогатого скота, зараженных антигеном р24, уровень антител был значительно ниже и не превыщал титр 1 500 по сравнению с контрольными, у которых он изменялся в пределах 1 6000 — 1 8000. [c.235]

Как может иммунная система отличать чужое от своего Одна из возможностей состоит в том, что животное наследует гены, кодирующие рецепторы для чужих, но не для собственных антигенов, и поэтому его иммунная система генетически запрограммирована таким образом, чтобы отвечать только на чужеродные антигены. Другая возможность состоит в том, что иммунная система первоначально могла быть способна отвечать и на свои, и на чужие антигены, но в раннем периоде развития могла бы научиться не отвечать на свои. Было показано, что верна вторая из этих гипотез. Первым свидетельством в пользу этого явилось наблюдение, сделанное в 1945 г. Как правило, при пересадке ткани от одного индивидуума другому трансплантат распознается иммунной системой как чужеродный и отторгается. Оказалось, однако, что этого не происходит при пересадках кожи между дизиготными (развившимися из двух оплодотворенных яйцеклеток, т. е. нсршентичны ми) коровами-близнецами, которые во время внутриутробного развития могли обмениваться клетками крови вследствие спонтанного сращения их плацент. Эти результаты позднее были воспроизведены на курах (путем соединения кровеносных сосудов двух разных эмбрионов) и на мышах (путем введения новорожденным мышатам клеток селезенки от мышей другой линии - эти клетки выживали в течение большей части жизни мыши-реципиента). В обоих случаях, когда животные становились взрослыми, можно было пересаживать им ткань от временно присоединенной особи или от особи-донора. и трансплантат приживался (рис. 18-11). тогда как ткани, пересаженные от других, контрольных животных, отторгались. Таким образом, постоянное присутствие чужих антигенов начиная с того времени, когда иммунная система еш,е к созрела, приводит к долговременной ареактивности по отношению к этим антигенам. Такое состояние индуцированной антиген-специфической неспособности к иммунному ответу получило название приобретенной иммунологической толерантности. [c.226]

I — преципитирующая сыворотка + исследуемый материал 2 — преципитирующая сыворотка -Ь гомологичный преципитиногея 3 — преципитирующая сыворотка -Ь контрольный экстракт без антигена 4 — преципитирующая сыворотка + изотонический раствор хлорида натрия 5 — нормальная сыворотка -Ь исследуемый антиген б — нормальная сыворотка -Ь -Ь контрольный экстракт без антигена. [c.117]

В лунки с иммобилизованными иммуноглобулинами виосят по 0,2 мл специфического (положительного), контрольного (отрицательибго) и исследуемых антигенов в разведении 1 50. Одновременно проводят титрование положительного и отрицательного антигенов. Пробы разводят ТФБ. Тщательно перемешивают в течение 5—7 с и инкубируют в термостате 1,5—2,0 ч при 37°С. Затем трижды отмывают луики от несвязавшихся антигенов ТФБ. При качественной постановке реакции (ответ есть или нет ) постановку осуществляют аналогично, ио материал ие титруют, а ставят ие менее трех повторных опытов с разведением 1 50. [c.275]

Стандартизация метода. С целью улучшения характеристик dot-EUSA изучено влияние различных экспериментальных факторов [16]. При анализе смешанных положительных и отрицательных контрольных сывороток на висцеральный лейшманиоз мембраны с п ами хранили до 270 дней (9 месяцев) при 22, 4 и -20 °С. При 22 °С после 60 дней хранения наблюдалось воспроизводимое понижение титра на 2 разведения. При 4 °С понижение титра на одно разведение происходило через 30 дней. Напротив, при хранении проб при -20 °С даже через 270 дней не наблюдалось уменьшения их реакционной способности. Полученные данные показывают, что на нитроцеллюлозной мембране некоторые лабильные антигены со временем разрушаются, поэтому необходима периодическая проверка мембран с антигенами с помощью контрольной сыворотки. В то же время мембраны с антигеном Fas iola hepau a, хранившиеся более 12 месяцев, не изменили своей реакционной способности, судя по результатам их обработки контрольной сывороткой, разбавленной вдвое [11 ]. [c.122]

Смотреть страницы где упоминается термин Антигены контрольные: [c.209] [c.365] [c.256] [c.365] [c.17] [c.655] [c.658] [c.659] [c.659] [c.660] [c.664] [c.671] [c.673] [c.673] [c.95] [c.295] [c.438] [c.206] [c.262] [c.271] [c.294] [c.199] [c.26] [c.106] [c.132] [c.133]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология